口蹄疫病毒3ABC非结构蛋白抗体检测结果分析

随机选取猪、牛、羊场不同日龄动物血清,利用间接ELISA方法（3ABC-Ⅰ-ELISA）检测接种口蹄疫病毒疫苗的健康猪、牛、羊体内非结构蛋白3ABC抗体存在情况.结果发现临床健康动物也会产生3ABC非结构蛋白抗体,且动物日龄越大,产生抗体的比例越高.这可能与日龄越大的动物在生长过程中感染口蹄疫的概率越大有关,或与多次疫苗免疫后导致产生非结构蛋白抗体有关.因此,口蹄疫3ABC非结构蛋白抗体检测适用于对口蹄疫疫情的初筛,且对日龄较小或免疫口蹄疫疫苗次数较少的动物比较适用.     

口蹄疫病毒3ABC单抗阻断ELISA抗体检测方法应用

正根据新型口蹄疫疫苗生产工艺,用灭活疫苗免疫的动物不会产生病毒非结构蛋白3ABC抗体。因此,采用口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC单抗阻断ELISA试验,可以区分免疫抗体与自然感染抗体。1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物随机抽取基地牧场3-4月龄经过口蹄疫灭活三价疫苗免疫健康犊牛30-40头。1.1.2试验试剂盒采用中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫病毒3ABC单抗阻断ELISA抗体检     

免疫猪群口蹄疫非结构蛋白抗体与免疫剂量的关系

为了鉴别免疫猪群3ABC抗体阳性猪是免疫动物受到病毒感染引起的,还是疫苗中残留的非结构蛋白引起的,通过检测免疫动物体内的3ABC抗体和病毒感染情况,探讨3ABC抗体的出现与免疫剂量的关系。选取60日龄保育猪20头,分成A、B、C、D 4个组,分别注射猪口蹄疫O型灭活疫苗(OS/99株)1、2、4、6m L/头。每组猪分别在免疫前1 d以及免疫后3、7、14、30和60 d,采集血清和鼻咽拭子,使用口蹄疫3ABC间接ELISA检测试剂盒、口蹄疫多重RT-PCR检测试剂盒以及病毒分离试验,检测3ABC抗体和病毒感染情况,发现保育猪在低剂量(1 m L/头或2 m L/头)免疫后没有检测到非结构蛋白抗体,而高剂量(4 m L/头或6m L/头)免疫后出现非结构蛋白抗体阳性率升高,而且出现非结构蛋白抗体阳性的动物中没有检出病毒感染或病毒核酸。检测结果提示这些免疫猪群非结构蛋白抗体的形成与免疫剂量有关。     

科技

<正>兰州兽医所科研团队建立口蹄疫感染和免疫鉴别诊断技术体系近日,从中国农业科学院兰州兽医研究所获悉,经十余年的努力,该所科研团队建立了口蹄疫感染和免疫鉴别诊断技术体系。该体系包括研发了口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测ELISA试剂盒;口蹄疫病毒非结构蛋白2C3AB抗体检测试纸条;口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒;口蹄疫病毒五种非结构蛋白抗体检测免疫印迹技术等。     

国内外口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA检测方法和1种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阻断ELISA检测方法,在检测牛血清时的敏感性和特异性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的有效试剂盒。采用国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA试剂盒和1种阻断ELISA试剂盒,对150份牛血清样品进行ELISA检测。同时对150份样品进行非结构蛋白抗体酶联免疫电转移印迹试验(EITB),以评估4种ELISA检测结果。结果 4种试剂盒的敏感性均达到100%,特异性分别为100%、95%、73%、99%。结论:国内生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒可以用于牛口蹄疫血清学筛选性试验。     

口蹄疫病毒抗体检测

口蹄疫是一种急性、高度接触性、烈性的传染病,是由口蹄疫病毒引起的,常常发生在偶蹄动物,偶尔也见于人和其它动物。世界动物卫生组织已经将该病列为法定申报传染病,我国将其列为一类动物疫病。我国主要通过实施强制免疫来预防控制该病,疫苗免疫之后所产生的抗体水平是评价免疫效果的重要手段,也可以根据免疫后的效果来制定合理免疫程序。本实验室主要通过口蹄疫液相阻断和3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒来进行抗体检测。     

不同ELISA试剂盒检测感染猪口蹄疫病毒3ABC抗体效果比较

为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗体全部转为阳性;3种试剂盒检测最早3ABC抗体与症状对应关系有差异,每两种商业试剂盒呈现不同程度的相关性。其中A试剂盒显示出最大的灵敏度,而B试剂盒显示最高的特异性,C试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化,因此对3种试剂盒进行比较,发现A试剂盒更稳定,更适合于猪FMDV非结构蛋白抗体检测。     

河北省部分地区规模化养殖场羊口蹄疫3ABC抗体检测

为初步了解河北省规模化养殖场羊口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体水平,2018年5月在11个场点采集羊血清354份,用口蹄疫3ABC单抗阻断ELISA试剂盒进行抗体检测。结果显示:从不同市区分析,秦皇岛市抗体阳性率最高,为15.65%,其次是保定市、邢台市,分别为11.11%、2.86%;从不同饲养阶段分析,种羊的抗体阳性率明显偏高,为16.82%,羔羊、育成羊分别为6.53%、10.75%;从不同性别分析,母羊阳性率偏高,为11.7%,公羊为8.33%;从不同品种分析,绵羊阳性率高于山羊,分别为12.75%、4.67%。虽然我国目前使用的灭活疫苗可能会导致产生一定的非结构蛋白抗体,但上述结果能够说明河北省存在口蹄疫自然感染羊只。这提示河北省的口蹄疫防治和净化任务仍然繁重,要根除和消灭本病,可选用非结构蛋白纯化程度高的疫苗进行免疫,同时加强3ABC抗体监测和引种检疫,隔离并淘汰阳性动物。     

口蹄疫自然感染动物与免疫动物鉴别诊断研究进展

口蹄疫是偶蹄动物高度接触性传染病 ,能引起巨大经济损失。国际兽医局将其列为 A类动物传染病之首。除发达国家外 ,大多数发展中国家都采用注射疫苗的办法来控制该病的流行。因此如何区分感染动物和免疫动物是口蹄疫防制中迫切需要解决的问题。目前口蹄疫灭活疫苗的生产工艺可以将绝大部分的非结构蛋白除去 ,因而灭活疫苗免疫动物只能产生结构蛋白抗体 ,而感染动物能产生结构蛋白抗体 ,也能产生非结构蛋白抗体 ,因此 ,检测非结构蛋白抗体为鉴别口蹄疫感染动物与免疫动物提供了美好前景。文章从鉴别诊断的原理 ,非结构蛋白的免疫特性 ,鉴别诊断所面临的问题及解决方案 ,应用非结构蛋白作为鉴别诊断抗原的研究现状等方面进行了综述。     

用口蹄疫病毒非结构蛋白鉴别感染动物与疫苗免疫接种动物

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的发生于偶蹄类动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行。疫苗接种是防控口蹄疫暴发的有效措施之一,而要控制口蹄疫的流行,首先要将病毒感染动物从疫苗接种群体中区分开来。以口蹄疫病毒非结构蛋白(NSPs)为抗原,分别利用口蹄疫病毒非结构蛋白2C、3B、3AB和3ABC作为鉴别诊断抗原,检测动物体内的NSPs抗体,可有效的区分感染动物与疫苗免疫接种动物。目前,许多实验室已展开此项工作的研究,这为防控口蹄疫打下了良好的基础。     

四种试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体的对比试验

使用国产的4种猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒(VP1-ELISA)、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒(LB-ELISA)、猪口蹄疫正向间接血凝试剂盒、猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒(O-ELISA)同时检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清样品,阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同时使用农业部规定的3种试剂盒分别检测20份血清样品的抗体滴度发现,VP1-ELISA试剂盒和LB-ELISA试剂盒阳性符合率为95%,平均抗体滴度相差0.7,与IHA试剂盒符合率为55%,平均抗体滴度相差3.8,故LB-ELISA试剂盒可以用来评价合成肽疫苗免疫的抗体,而IHA试剂盒不能用来检测合成肽疫苗免疫的抗体。     

两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对常用的兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测方法,在检测猪血清抗体时的敏感性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的最佳试剂盒。采用上述两种阻断ELISA试剂盒对170份猪血清样品进行ELISA检测。结果表明,两种试剂盒的阳性检出率相差不大,阳性检出率分别为5. 29%和5. 88%。本试验表明:兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒检测结果差异不大,均可应用于口蹄疫血清学筛选性试验。     

猪O型口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗原模拟表位的筛选

口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白（NSP）3ABC与FMDV复制有关，感染FMDV的动物产生的NSP 3ABC抗体可在体内存留较长时间，是鉴别诊断动物接种疫苗与自然感染口蹄疫的可靠指标。本文从猪FMDV—NSP 3ABC阳性抗血清中分离和纯化IgG，以此为固相筛选分子，对噬菌体随机十二肽库进行4轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选后，随机挑取20个噬菌斑进行扩增，用ELISA方法分别检测扩增后的噬菌体抗原性，其中有8个噬菌体克隆与纯化的IgG有较强的特异性结合能力；对得到的阳性克隆提取ssDNA进行测序，分析所递呈的氨基酸序列，其中的7个噬菌体展示肽的氨基酸片段具有较高的保守性；进一步分别以8个阳性噬菌体克隆为固相捕获分子，对22份疑似FMD病猪血清进行检测，结果显示，有5个噬菌体克隆检测结果与试剂盒检测有较高的符合率。本研究为FMDV—NSP 3ABC抗原表位结构进一步研究和建立猪自然感染FMDV快速鉴别诊断新方法奠定了基础。     

家畜口蹄疫净化技术体系再添新产品

正近日,中国农业科学院兰州兽医研究所宿主抗病毒感染与免疫生物学团队申报的"口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒"获批新兽药注册证书,标志着我所家畜口蹄疫净化技术体系产品再添新成员。     

内蒙古地区牛羊口蹄疫灭活疫苗的免疫效果比较研究

为准确掌握牛羊口蹄疫疫苗免疫效果,2012年对内蒙古自治区的牛羊口蹄疫O—AsiaI型双价灭活疫苗和牛羊口蹄疫A型灭活疫苗免疫效果进行了监测。采用液相阻断ELISA方法。共检测了8个旗县23018份免疫牛羊口蹄疫O—AsiaI型双价灭活疫苗和牛羊口蹄疫A型灭活疫苗15日、30日、60日的血清中口蹄疫免疫抗体水平。结果显示,牛羊口蹄疫疫苗免疫效果总体良好,免疫抗体合格率超过了70％。规模化奶牛养殖场免疫效果稳定,散养地区免疫效果稳定性差,且不同厂家的疫苗免疫效果不同,加强免疫后A、B、D三个厂家抗体合格率能达到100％,C厂家的免疫效果较差,抗体合格率为93-3％。采用3ABC—ELISA检测试剂盒对部分地区牛羊进行感染抗体检测,结果为阴性。     

不同试剂盒检测接种FMDV的牛非结构蛋白抗体结果及分析

选取国内外3家不同的研发公司的甲、乙、丙3种试剂盒,利用ELISA方法分别检测了接种A型与O型口蹄疫病毒的牛口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3ABC抗体的变化规律。结果:接种A型与O型口蹄疫病毒的牛在感染后第3天发病,这与最早检测出阳性的时间相一致,至第9天3ABC抗体全部为阳性;接种A型口蹄疫病毒的牛与接种O型口蹄疫病毒的牛3ABC非结构蛋白抗体应答有差异。选取的3种试剂盒检测显示,每2种试剂盒呈现不同程度的相关性,并且甲试剂盒显示出最大的灵敏度,而乙试剂盒显示最大的特异性,丙试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化。因此,对3种试剂盒进行比较发现甲试剂盒更稳定,更适合于检测。     

口蹄疫非结构蛋白3ABC的融合表达及纯化研究

扩增了口蹄疫非结构蛋白3ABC基因，经双酶切后与表达载体pQE30Xa连接，构建了重组质粒pQE3ABC，并转化到宿主菌M15中进行表达，并对表达条件进行了优化。Western-blot结果表明，所表达的蛋白氨基酸序列正确，且表达的融合蛋白可与标准抗FMDV-O抗体特异性结合。本研究在大肠杆菌中成功地表达了口蹄疫非结构蛋白3ABC，为研制和开发口蹄疫感染和注苗动物鉴别诊断试剂盒奠定了基础。     

五省牛、羊和猪口蹄疫疫苗免疫效果的试验

为了监测O、A和AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫后引起的抗体水平,采用口蹄疫液相阻断ELISA法和病毒非结构蛋白3ABC-ELISA法对我国云南、内蒙古、甘肃、新疆和西藏的部分地区牛、羊和猪的血清样品共65591份进行三型口蹄疫抗体水平监测。液相阻断ELISA方法显示加强免疫后各地合格率均能达到100%;非结构蛋白3ABC-ELISA方法显示五省抗体检测合格率分别为91.13%、88.38%、78.04%、88.15%和85.15%;不同动物口蹄疫分型抗体检测结果以云南最高(均在85%以上),其它四省抗体检测合格率均在70%以上。结果表明,该疫苗免疫可产生较好的免疫效果。     

口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗免疫安全性和抗体消长规律研究

为摸清口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗免疫安全性和抗体消长规律,对试验猪群进行免疫,观察其健康状况,采用口蹄疫非结构蛋白ELISA检测非结构蛋白抗体,采用液相阻断ELISA检测O型和A型口蹄疫抗体。结果显示,疫苗免疫后,猪群健康状况良好,各时间点口蹄疫非结构蛋白抗体均为阴性;免疫前、一免后29 d、61 d、95 d、123 d,二免后30 d、64 d、92 d,A型口蹄疫抗体阳性率分别为7.14%、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%,O型口蹄疫抗体阳性率分别为0、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%。表明该疫苗免疫猪只后,安全性好,不会诱导动物机体产生口蹄疫非结构蛋白抗体,诱导产生的高水平A型、O型口蹄疫抗体可以维持较长时间,实施一免可维持至少4个月,实施二免可维持至少3个月。     

比较3种间接ELISA试验检测口蹄疫感染抗体的研究

将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。