北美蓝云杉体细胞胚发生技术研究

研究北美蓝云杉体细胞胚发生技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系等具有一定的理论意义。以成熟胚为外植体,分别对基本培养基、生长调节剂种类和浓度对其体细胞胚发生各阶段的影响进行了研究,同时观察体细胞胚发生过程的形态特征。结果表明:1)胚性愈伤组织诱导培养基,首先在DCR培养基+2,4-D5.0mg/L+6-BA4.0mg/L+KT2.0mg/L诱导15d后,之后转入DCR培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,胚性愈伤诱导率最高为45.3%;2)胚性愈伤组织保持与增殖培养基为1/2LM培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+PEG40001.0g/L,胚性愈伤组织增殖率最高为102.27%;3)IBA可促进成熟体细胞胚的诱导,以1/2LM+IBA0.5mg/L+ABA2.0mg/L(以上4种培养基均附加蔗糖30g/L,谷氨酰胺450mg/L,水解酪蛋白500mg/L,琼脂5.0g/L,pH=5.8)的体细胞胚诱导率最高,为38.10%;4)在1/2MS+1.0g/L活性炭的培养基上,体细胞胚萌发,子叶生长但胚根发生较少。北美蓝云杉体细胞胚诱导过程中出现严重的畸形胚现象及生根难的问题,今后有待进一步研究。     

麻城油茶体细胞胚胎发生及植株再生

为建立油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的技术体系,以湖北麻城油茶7月中旬幼胚为试验材料,消毒后切块接种于分别附加了2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT和5.0 mg/L NAA+1.0 mg/L KT的MS培养基,进行愈伤组织诱导培养。1个月后统计出愈率,两种处理的愈伤组织诱导率分别为83.23%和45.34%;挑选状态良好的愈伤组织继代于附加了1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L KT的MS培养基,培养2个月后可见明显的胚状体形成,统计胚状体平均发生率为15.25%;随后将胚状体继代于附加了1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA的MS培养基上进行胚状体发育和植株再生培养,获得具备完整子叶的胚状体后,转移至含有3.0 mg/L 6-BA的1/2MS培养基中进行生根培养,获得完整再生植株后驯化移栽至营养钵中继续生长。本研究建立了麻城油茶6个月内获得体细胞胚胎发生及植株再生的技术体系,为建立油茶农杆菌介导的遗传转化技术体系奠定了基础。     

不同培养基和激素对辣椒花药培养的影响

选用试验前期筛选出的易产生愈伤组织和胚状体的8个不同基因型辣椒进行花药培养,对基本培养基成分、激素种类和浓度、材料基因型等影响花药培养的因素进行研究.结果表明:1)NTH培养基为适宜于辣椒花药培养的最佳培养基,MS和B5培养基次之.2)以NTH为基本培养基培养红艳花药,0.5 mg/L NAA +1.0 mg/L KT + 0.3 mg/L BA +1.0 mg/L 2,4-D是花药愈伤组织诱导培养最适宜的激素组合;0.3 mg/L NAA +1.0 mg/L KT + 0.1 mg/L BA是花药胚状体诱导培养最适宜的激素组合.3)在相同条件下,不同基因型辣椒花药培养后的愈伤组织诱导率和产胚率均不同,愈伤组织诱导率为8.0% ~ 23.5%,胚状体诱导率最高为2%,最低为零.     

厚叶岩白菜叶片离体培养研究

以厚叶岩白菜无菌苗的嫩叶为试验起始材料,研究了其离体培养诱导不定芽再生和体胚发生的过程。结果表明,叶片可以诱导出愈伤组织,诱导培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT+0.5mg/L VC;愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+1.0mg/L ZT+0.1mg/L NAA+0.5mg/L VC;诱导不定芽分化的最佳培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+0.5mg/L VC,诱导率最高为30%;体胚发生的最佳培养基为MS+1.0mg/L ZT+0.1mg/L IBA+0.5mg/L,分化率最高为26.67%。     

2个甘蓝F1小孢子培养中高出胚率的诱导技术研究

以2个优良的F1甘蓝为试材,探讨了高温热激、蔗糖浓度、添加和更换培养液培养、激素种类与浓度配比等因素对提高甘蓝小孢子诱导胚产量的影响.结果表明,2个F1甘蓝材料经24 h 、33℃高温热激处理对小孢子胚胎发生是必要的;小孢子在13%蔗糖浓度培养基(NLN-13)中培养胚产量最高,为1.89胚/蕾;高浓度蔗糖的培养基(NLN-17)培养3 d后添加低浓度蔗糖培养基(NLN-10)培养能大幅度提高胚产量,比一直在13%蔗糖的培养基(NLN-13)培养的胚状体增加255.2%;NLN-13培养基中添加0.1 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA能够诱导出高胚产量.     

亚麻离体再生体系的建立及优化

[目的]对植物离体培养再生形态发生的两条途径进行研究,建立并优化亚麻离体再生体系。[方法]以10～15d不同基因型亚麻无菌苗的下胚轴为外植体,研究不同激素配比培养基对诱导影响。[结果]器官发生途径的初始愈伤组织诱导的培养基为MS＋4mg/LIAA＋2mg/LKT;诱导不定芽发生的最佳培养基为B5＋2.5mg/LKT＋1mg/LIAA;最佳生根诱导培养基为1/2B5＋0.3mg/LIBA,生根率达90%。以体胚发生为目的的最佳初始诱导培养基为MS＋2mg/L2,4-D＋0.5mg/L6-BA;体细胞胚胎诱导培养基为MS＋0.5mg/LNAA＋0.5mg/L6-BA。[结论]激素在亚麻离体再生体系中起着重要作用,在对亚麻体细胞胚胎发生研究中,只在H14体胚诱导中得到了球形胚和心形胚,对于亚麻体胚再生途径需要做进一步研究。     

耐寒结球甘蓝小孢子培养及其发育过程

以6份耐寒结球甘蓝杂交F1为试验材料,研究其胚胎发生过程及胚胎发生的诱导条件,为耐寒甘蓝材料的小孢子培养,以及其他芸薹属小孢子胚胎体系的建立及优化提供理论依据。采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色方法对小孢子体内和体外的发育及胚胎发生过程、特征进行观察;NLN-13培养基中添加阿拉伯半乳聚糖(Arabinogalactan,AG)和阿拉伯半乳糖蛋白(Arabinogalactan-protein,AGP)对小孢子培养胚胎发生率的影响进行统计分析;小孢子体内正常发育方向是单核小孢子经历2次不对称核分裂后发育成三核成熟花粉,小孢子单核晚期对应的花蕾长度主要集中在3.5~4.5mm;体外培养中,热激胁迫(32.5℃)诱导小孢子从配子体发育途径向胚胎发生途径转换,只有少数胚性细胞最终发育成为胚状体;供试材料中有5份材料获得胚状体,材料间出胚量差异较大,其中‘寒玉37’出胚量最高,为每蕾22.5个;在NLN-13培养基中添加10mg/L AG或10mg/L AGP,可以促进耐寒甘蓝胚状体发生。32.5℃热激胁迫1d可有效诱导耐寒甘蓝小孢子培养中的胚胎发生,10mg/L AG或10mg/L AGP促进胚胎诱导。     

樟树胚性愈伤组织诱导与体胚发生研究

以樟树未成熟合子胚为外植体,探讨了外植体取材时间、植物生长调节剂配比、附加有机物等因素对胚性愈伤组织诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的影响。结果表明:不同采集时期的合子胚愈伤组织诱导率差异显著,只有心形胚时期的合子胚才能诱导胚性愈伤组织;在改良MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA培养基初诱导情况下,后接入改良MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D培养基中,胚性愈伤组织诱导率可达77.78%;外加添加200 mg/L水解络蛋白和200 mg/L环糊精可保持胚性愈伤组织增殖和体细胞胚诱导,胚性愈伤组织增殖系数达3.86,每克愈伤组织平均分化116.67个体细胞胚,胚性愈伤组织继代周期以25～30 d为宜。在改良MS+200 mg/L环糊精+1.0 mg/L ABA+0.5 mg/L IAA中可以促使体胚成熟萌发,萌发率可达52.78%。将萌发的芽体转接到MS+0.1 mg/L BA+0.5 mg/L IAA+0.2 g/L AC生根培养可获得完整植株。     

花生再生体系的建立

取4 d龄花生(鲁花14)的胚轴、小叶和成熟子叶为外植体,对其进行离体组织培养研究。结果表明:在培养1个月后,胚轴在MS+8.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/LNAA培养基上可以诱导产生丛生芽,诱导率达到80%,平均每个外植体可以产生10~20个芽点;小叶在MS+5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/LNAA培养基上能诱导出胚性愈伤组织,进一步诱导分化形成芽点并伸长;诱导出的丛生芽接种在MS+5mg/L6-BA+1.0 mg/LNAA+50.0 mg/LAD的培养基上可以扩繁和伸长;花生成熟种子的子叶在MS+20 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT+1.0mg/LAgNO3培养基上可直接诱导形成颗粒状、表面光滑、干燥的体细胞胚,每个外植体可以诱导出8个左右的体细胞胚。     

中国沙棘体细胞胚胎间接发生与植株再生

以中国沙棘组培苗茎尖为外植体,在1/4 MS基本培养基上,对愈伤组织、胚性愈伤组织及体细胞胚胎进行诱导,探讨植物生长调节剂配比对中国沙棘愈伤组织、胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚发生的影响。结果表明:在KT 1.0 mg/L + NAA 0.3 mg/L的最佳组合中,暗培养20 d后,愈伤组织的诱导率达到90.10%;暗培养30 d后,胚性愈伤组织的诱导率达到77.67%;将胚性愈伤组织转移到新鲜诱导培养基上,光培养20 d,平均体细胞胚发生数达到15.48。为了得到完整的再生小植株,将胚状体转移到不含任何生长激素的体细胞胚发育及植株再生培养基上,分析了KT和白砂糖不同浓度的组合对小植株再生的影响。结果发现:WPM + KT 0.05 mg/L + 白砂糖 20 g/L + 琼脂粉 6.5 g/L + CH 0.5 g/L处理上的植株再生率达到60.30%。该研究建立起了完整的中国沙棘体细胞胚胎间接发生的再生体系。      

花魔芋组织培养初步研究

以花魔芋球茎切块作外植体,接种在MS附加6-BA、NAA和KT的培养基上诱导愈伤组织的形成.各种培养基均能诱导外植体产生愈伤组织,但不同激素浓度组合其诱导率不一样.其中以MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 1.0 mg/L的诱导率最高,达84.62%.愈伤组织芽分化最适培养基是MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.5 mg/L KT2.0 mg/L,分化率为73.81%.芽在MS NAA 0.5 mg/L和1/2MS NAA 0.5 mg/L培养基上的生根率均在78%以上.     

棉花优良新品种泗棉3号高频体细胞胚发生和植株再生的研究

选择我国棉花优良品种泗棉３号进行组织培养，获得了具有高频胚胎发生的愈伤组织、胚状体和小植株。在附加ＺＴ的ＭＳ培养基上，泗棉３号的下胚轴、子叶、根均诱导获得了愈伤组织，但其形成率和形成量不同，其中下胚较易诱导获得愈伤组织，根和子叶较差。ＺＴ对愈伤组织形成和生长影响较大，其在愈伤组织诱导中较适的使用浓度为３．０或５．０ｍｇ／Ｌ。     

应用种子进行穿龙薯蓣组织培养的研究

以穿龙薯蓣种子为外植体诱导出了愈伤组织,最佳培养基为MS 6-BA3.0mg/L NAA2.0mg/L,最高出愈率为18.9%;诱导不定芽的最佳培养基为MS 6-BA2.0mg/L NAA2.0mg/L,最高诱导率可达75.5%;最佳壮苗培养基为1/2MS 6-BA 1.0mg/L KT1.0m g/L;根诱导的最佳培养基为1/2MS 6-BA0.5mg/L NAA0.5mg/L,诱导率最高达86.2%;最佳的炼苗基质为腐质土∶蛭石∶河沙=1∶1∶1,成活率最高达84.8%。     

南方红豆杉愈伤组织培养研究

对南方红豆杉叶、茎的愈伤组织诱导条件及最适培养基组成成分进行了探讨.结果表明:2,4-D浓度2.0 mg/L比0.5 mg/L或1.0 mg/L处理的叶、茎愈伤组织诱导率高;嫩茎愈伤组织的诱导率因不同类型的激素组合以及激素不同质量浓度而不同,培养基MS 2,4-D 2.0mg/L,MS 2,4-D 2.0 mg/L 6-BA 1.0 mg/L,MS 6-BA 1.0 mg/L IAA 1.0 mg/L,1/2 MS NAA 2.0 mg/L IBA 1.0 mg/L,茎诱导率分别为100%,90%,75%,75%,相对其比较对象而言,这些培养基的诱导率最高.     

激素与低温胁迫在茄子叶片组织培养中的效应

以西安绿茄为试材 ,对激素和低温胁迫在茄子叶片组织培养中的效应进行了研究 结果表明在MS +2 ,4 -D ( 0 3mg/L) +KT( 1 0mg/L)培养基上叶肉愈伤组织的诱导率为 53 6% ,5～ 6℃的低温胁迫可诱导茄子产生耐冷性愈伤组织 ,耐冷性愈伤组织在MS +NAA( 0 0 0 5mg/L) +ZT( 1 0mg/L)培养基上的芽再生率为 4 1 0 3%     

马齿苋的组织培养和植株再生

用马齿苋的幼嫩叶片和茎段建立了马齿苋组织培养及植株再生系统。最适愈伤组织诱导培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L 2,4-D 0.5 mg/L或2,4-D 1.0 mg/L,愈伤组织诱导率均可达100%。将生长良好的愈伤组织块转入分化培养基中以诱导不定芽的分化,其最适分化培养基为MS 6-BA 4.0 mg/L NAA 0.2 mg/L,分化率达到87.5%。再生苗在1/2MS IBA 2.0 mg/L的培养基上诱导生根,经过15d培养,100%生根成苗。     

四川竹根姜胚性愈伤组织诱导和植株再生

选用四川竹根姜的茎尖组织,诱导产生了胚性愈伤组织,建立了高频再生体系。筛选出了适于胚性愈伤诱导及扩增最佳培养基MSN+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;胚性愈伤组织分化培养基MS+0.2 mg/L 2,4-D+5.0 mg/L BA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;根状茎形成培养基MS+3.0 mg/LBA+0.1 mg/L NAA+6.0%蔗糖+0.7%琼脂。在3.0%~6.0%的范围内蔗糖浓度越高越促进根状茎形成。     

不同激素对补血草器官分化的影响

以补血草的带节花梗为材料,在离体条件下研究不同激素对花梗愈伤组织的诱导、不定芽分化、继代培养以及生根的影响,建立和优化离体再生体系,为补血草快速繁殖、种质资源保存以及遗传转化提供有效的途径和技术。结果表明,MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L为补血草花梗愈伤组织诱导的最佳培养基,愈伤组织诱导率最高(89.2%),出愈速度最快(12 d),产生的愈伤组织颜色翠绿,质地紧密;不定芽诱导以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L的效果最佳,诱导率为74.3%,平均每块愈伤组织诱导的不定芽数为3.6个;在NAA 0.1～0.2 mg/L+6-BA 1.5～2.0 mg/L时的继代增殖效果最好,分化率大于85%,使幼苗数增加3倍以上;生根培养以1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L时的生根率最大,为100%。