猪、牛源非结核分枝杆菌的分离与鉴定

采集猪颌下淋巴结,猪肠系膜淋巴结,牛颌下淋巴结和牛肠系膜淋巴结各200份,使用改良罗氏培养基进行分离培养和传代培养,通过进行生长特性试验、生化鉴定试验和鉴别培养基生长试验对所分离出的分枝杆菌进行菌型鉴定。结果显示:猪颌下淋巴结中分离出耻垢分枝杆菌4株,鸟分枝杆菌4株,胞内分枝杆菌2株,胃分枝杆菌2株,蟾蜍分枝杆菌1株,龟分枝杆菌龟亚种杆菌1株;猪肠系膜淋巴结未分离出非结核分枝杆菌;牛肠系膜淋巴结分离出瘰疬分枝杆菌2株,加地斯分枝杆菌1株;牛肠系膜淋巴结分离出,瘰疬分枝杆菌5株,金色分枝杆菌2株,戈登分枝杆菌2株,蟾蜍分枝杆菌2株。猪、牛的感染率均为3.5%。     

猪非结核分枝杆菌的分离与鉴定

采集结核菌素变态反应阴性猪的颌下淋巴结共计550份,肠系膜淋巴结共计550份,运用实验室常规检查、分离培养基分离培养、生长特性试验、鉴别培养基试验、产色试验、生物化学方法和分子生物学方法,对集约化养殖的猪群中非结核分枝杆菌（NTM）开展分离与鉴定研究。最终得到阳性结果14份,阳性率1.27%,其中颌下淋巴结6份,阳性率1.09%,肠系膜淋巴结8份,阳性率1.45%。分离株鉴定结果：2株为胃分枝杆菌,3株为胞内分枝杆菌,3株为偶发分枝杆菌,2株为牛分枝杆菌,4株为浅黄分枝杆菌。根据所得数据可以得知,结核阴性猪中NTM的流行情况不容乐观,其存在必定会对猪养殖业造成负面影响,试验为NTM的预防和中国消除结核病计划提供了理论依据。     

结核变态反应阳性牛的非典型性分枝杆菌的分离与鉴定

本试验从６９头结核变态反应阳性牛中采取病料２０２份进行分枝杆菌，特别是非典型分枝杆菌的分离与鉴定，共获２６株分枝杆菌，除５株分枝杆菌外，其它全是非典型分枝杆菌。在这些非典型分杆杆菌中，５株偶发分枝杆菌，６株瘰疠分枝杆菌，５株鸟－胞内分枝杆菌，２株副结核分枝杆菌和１株ＲｕｎｙｏｎⅡ群。从病料看，有病变的分离率为４１．２％，无病变的为７．１％。在三种淋巴结病料中，以肠系膜淋巴结的分离率为最高，颌下淋巴     

牛结核病两种活体诊断方法检测结合病原学诊断的研究

本文报道应用两种活体诊断方法检测牛结核病的试验结果。2010～2011年度,应用PPD皮内变态反应方法分3批次对5156头奶牛和奶水牛实施监测,监测阳性数57头,阳性率1.11%。采集该57头牛抗凝全血,应用γ-干扰素酶联免疫吸附试验进行检测,检出阳性样品3份,阳性率5.26%。对14头第一批PPD皮内变态反应阳性牛进行病理检验和进行细菌分离培养和PCR检测,结果3份样品分离培养呈阳性,其中1份PCR鉴定为结核分枝杆菌,2份为非分枝杆菌。PCR方法检测的14份组织样品中,2份为结核分枝杆菌阳性,1份为牛结核分枝杆菌阳性。结合病理剖检和病原PCR诊断,分析比较PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素酶联免疫吸附试验的敏感性和特异性,由于PPD纯度、非特异性反应、结果判定的主观性等因素,导致PPD皮内变态反应监测检出假阳性率较高。     

牛源非结核分支杆菌血清型的初步鉴定

为了解近年来长春地区非结核分支杆菌血清型流行情况,及时掌握本地区的优势血清型,以利于疫苗株的选择和免疫程序的制定,更好地控制由非结构分支杆菌引起疾病的发生和流行.对从长春地区屠宰牛的颌下淋巴结和肠系膜淋巴结中分离得12株非结核分支杆菌制备抗血清,通过Schaefer的凝集反应和凝集素吸收试验,初步将其分为5种血清型.     

2020年河南省奶牛副结核病流行情况分析

为了解河南省奶牛副结核病流行情况,利用副结核分枝杆菌(MAP)间接ELISA抗体检测对2020年省内11个地市部分牧场送检的523份牛血液样品进行副结核抗体检测。结果显示,14个送检牧场,阳性样品145份,场间阳性率92.86%,样品阳性率27.72%。对4个500头左右中小规模牧场进行批量检测,833份样品中阳性样品210份,场间阳性率100%,场内阳性率15.67%～36.06%,样品阳性率25.93%。2019年共计送检样品345份,其中MAP抗体阳性数104份,样品阳性率30.14%。2020年送检样品与2019年相比,送检量增加了51.59%,阳性率降低了2.42个百分点。     

牛分枝杆菌特异性PCR检测方法的建立及初步应用

根据已发表的牛分枝杆菌的pncA的基因序列，设计和合成了一对可扩增294bp目的片段的引物，建立了特异性检测牛分枝杆菌的PCR方法。对牛分枝杆菌国际参考株和国内分离株成功扩增出294bp的特异性基因片段；对人结核分枝杆菌、副结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌和草分枝杆菌DNA的PCR扩增结果均为阴性。本PCR方法检测的敏感度可达到50pg。对10份牛分枝杆菌培养阳性和10份阴性样品的DNA分别进行了PCR检测，结果10份阳性样品中有9份样品为PCR扩增阳性，阳性符合率为90％（9／10）；而10份阴性样品则PCR扩增全部为阴性，阴性符合率为100％（10／10）。本方法可做为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。     

青藏高原部分地区牦牛结核病血清学检测报告

应用酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）对2011年采自西藏的938份和青海的206份牦牛血清进行结核分枝杆菌抗体检测,结果显示,西藏牦牛血清24份呈阳性,平均阳性率为2．56％;青海牦牛血清3份呈阳性,平均阳性率为0．98％。统计数据表明,西藏和青海牦牛群中均存在牛结核分枝杆菌的感染。本研究的目的是调查西藏和青海牦牛群中牛结核病的流行情况,为制定该病的防治措施提供理论依据。     

用多重PCR方法检测奶牛场麻雀中分枝杆菌感染情况

目的：利用可以鉴别分支杆菌属中结核分枝杆菌、牛分支杆菌、非结核分枝杆菌多重PCR方法,检测奶牛场麻雀组织中分支杆菌感染情况。方法根据结核分枝杆菌种特异基因目的片段MTP40、分枝杆菌属特异基因32kD、结核分枝杆菌复合群特异基因IS6110插入序列,设计合成三对特异性引物,扩增对32kD的506bp、MTP40的396bp和IS6110的984bp片段,以此方法检测奶牛场麻雀肺组织中分支杆菌感染情况,并对阳性结果的目的片段进行克隆测序。结果在分析的21份麻雀肺组织中,检测出2例非结核分枝杆菌阳性病料,阳性率9.52%。2例阳性样本PCR扩增得到的片段与GenBank收录的32kD基因同源性分别为95.8%和97.2%。结论麻雀肺组织中存在分支杆菌感染阳性病例提示该牛场中生物体内存在分支杆菌潜伏感染,并可能导致奶牛的潜伏感染以及干扰结核检疫。     

多重PCR-变性高效液相色谱法快速检测结核致病菌群并同步鉴别致病菌种

本研究旨在运用多重PCR联合变性高效液相色谱(DHPLC)技术原理,建立快速检测人兽结核致病菌群并鉴别主要致病菌种的新方法。建立了四重PCR-DHPLC方法,可同时检测结核分枝杆菌复合群(MTC)特异的IS6110和IS1081插入序列、结核分枝杆菌特异结构基因和牛分枝杆菌特异结构基因共4个目标基因。采用13种分枝杆菌标准菌株和分离株以及23种常见微生物样品进行特异性试验,采用纯化标准菌株DNA以及克隆了扩增序列的重组质粒DNA进行检测灵敏度试验,采用从临床疑似发病牛群采集的牛组织样品进行临床检测试验,并与细菌分离培养方法进行比对。结果表明:所建立的多重PCR-DHPLC方法能特异检测MTC并准确鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌,而对其它11种分枝杆菌以及23种常见微生物样品均呈典型阴性检测结果;检测灵敏度达到每个反应102～103基因拷贝或3.6～6.8fg DNA模板浓度。采用该法从39份临床疑似样品中检出33份MTC阳性并检出其中28份为牛分枝杆菌阳性,而培养法检出21份阳性样品。采用该法临床检测全程可缩短至1d之内,其中对纯化DNA样品的检测分析可在2h内完成。本研究为人兽结核致病菌(群)的快速检测鉴别提供了新型分子生物学方法,所建立的四重PCR-DHPLC方法能实现快速检测结核分枝杆菌复合群并鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌     

内蒙古地区奶牛源沙门氏菌的分离、鉴定及其对小鼠的致病性研究

本研究旨在通过对内蒙古地区奶牛源沙门氏菌的分离、血清学鉴定及其对小鼠的致病性研究,探明本地区奶牛源沙门氏菌的血清型分布及其对小鼠的致病力强度,为兽医临床防制由沙门氏菌引起的奶牛感染性疾病提供依据。采用SC增菌液和SS琼脂从兽医临床采集的奶牛乳房炎和奶牛子宫内膜炎病料中分离沙门氏菌;对分离到的疑似菌落进行涂片染色镜检和生化鉴定;采用A～F群O抗原多价诊断血清及单价诊断血清对疑似沙门氏菌进行血清型鉴定;采用腹腔注射感染小鼠,观察部分菌株对小鼠的致病和致死情况,并进行病理学检查。结果显示,从460份病料中共分离、鉴定出沙门氏菌38株,分离率为8.3%;38株分离菌均分布于A～F群内,分属8个群、14种血清型,其中鼠伤寒沙门氏菌分离率最高（39.5%）;选择的5株沙门氏菌攻毒后均可引起小鼠发生死亡,死亡率在50%～80%之间;在感染小鼠的心脏、肝脏均回收到了攻毒菌,且发病小鼠的心脏、肝脏和肾脏出现坏死灶,肺脏有细菌性栓子。结果表明,内蒙古地区奶牛源沙门氏菌血清型分布较复杂,对小鼠有较强的致病性,且不同血清型菌株间的毒力存在差异。     

Molecular characterization of Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) isolated from cattle in northeast and northwest China

We studied throat swabs and corresponding serum samples collected from 1067 protein purified derivative (PPD)-tuberculin skin test (TST) positive cattle from different regions of China. The 1067 throat swabs were inoculated onto modified Löwenstein–Jensen medium for the isolation and culture of Mycobacteria. Acid-fast bacilli were identified using traditional biochemical methods, polymerase chain reaction (PCR) amplification and multiplex PCR. They were distinguished as Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) and non-tuberculous mycobacteria (NTM) strains. An indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) was applied to detect specific antibodies against bovine TB (bTB). Correlations among the ELISA, bacteriology and TST were analyzed and compared. Spoligotyping and variable number tandem repeats–mycobacterial interspersed repetitive unit (VNTR–MIRU) analysis were used to genotype the MTBC. In total, 111 strains of Mycobacteria were cultured from the 1067 throat swab samples, including 43 stains of MTBC (14 strains of Mycobacterium bovis and 29 of Mycobacterium tuberculosis) and 68 strains of NTM. Thirty-eight MTBC strains and four NTM strains were isolated from 72 throat swab samples that the ELISA determined were antibody positive; five MTBC strains and 64 NTM strains were isolated from 995 throat swab samples that were antibody negative on the ELISA. The positive isolation rates of MTBC and NTM were 38.7% (43/111) and 61.3% (68/111), respectively. The concordance rate of cultured MTBC with a positive result on the indirect ELISA for antibody was 52.8% (38/72), which was much higher than the positive rate for TST (4.0%; 43/1067). Genotyping of the 43 strains of MTBC isolated, using spoligotyping and VNTR–MIRU, showed that the 43 isolates had 26 genotypes; 16 strains had a unique genotype. Two groups of six strains and two strains, respectively, showed the same spoligotyping pattern, and belonged to the Beijing family and Beijing-like family, respectively. Combined application of spoligotyping and VNTR–MIRU typing would improve the molecular epidemiological investigation and monitoring of the etiology of bTB in China.     

新型高效生物饲料添加剂4PCA应用效果试验

以2600只海兰蛋鸡,22头奶牛、160头商品猪及60头肉牛为试验动物,对照组在基础日粮中分别添加0．1％、0．3％及0．5％新型复合酶及微生物饲料添加剂（简称复合酶制剂）进行饲喂,结果表明,与对照相比,蛋鸡产蛋率提高13．8％,蛋重平均增加7．1g,料蛋比明显下降,破蛋率减少,死淘率降低,育肥猪平均增重0．74kg,较对照日增重提高12．1％,料肉比降低17％。奶牛较对照每日头均多产奶2．88kg,产奶量提高16．6％,奶料比提高13．1％,采食量加大,消化功能增强。肉牛平均日增重较对照增加22．98％,对照组料肉比为3．46：1,试验组为2．91：1,料肉比降低15．9％。     

广西某牛场死亡病例的病理学观察及病原菌的分离鉴定

2010年7月某养牛场肉牛开始发病,临床症状表现为食欲下降,流鼻,体温升高,呼吸困难等,病程7d至1月,病牛因极度虚弱而死亡.为查明病因并制定有效的综合防控措施,对其中5头病死牛肺和脾等内脏器官进行病理学观察、细菌分离鉴定以及药敏试验.病理组织学观察显示,肺表现为纤维素性大叶性肺炎病变,肺细支气管、肺泡腔内有大量中性粒...     

龙岩市部分地区牛、羊弓形虫病的血清学调查

目的：采集龙岩市部分地区牛、羊血清,检测福建省牛和羊弓形虫病的感染情况。方法：应用酶联免疫吸附试验检测牛和羊血清弓形虫IgG抗体。结果：49份牛血清弓形虫IgG抗体均呈阴性;35份羊血清中,8份弓形虫IgG抗体呈阳性,阳性率为22．86％（8／35）。结论：龙岩市部分地区羊弓形虫的感染率较高,应引起人们重视。     

“板黄口服液”对肉牛支原体肺炎治疗效果

[目的]为了减轻支原体肺炎对肉牛的危害,寻找最佳的治疗方案。[方法]:我们采用"板蓝口服液"对80头有严重感染的西门培尔牛分了组进行治疗试验:第一组为10头空白对照,第二组10头采用板黄口服液按0.4mL/kg体重给药,每日2次连用7d,第三组60头采用阿其霉素0.25×5支,地米10mg,生理盐水250mL,结果表明:第二组治疗有效的90%治愈率80%,第三组80%治愈率70%,第一组自愈率是70%,死亡率是20%,差异显著(p0.01)。[结论]板黄口若悬河服液对支原体引起的肺炎有良好效果。     

2006-2011年唐山地区猪蓝耳病病毒隐性感染情况调查

为了了解唐山地区猪蓝耳病的带毒情况,采用RT-PCR方法对2006-2011年采自64个县级屠宰场276份商品猪的肺脏或肺门淋巴结进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病原学检测,结果屠宰场阳性率为51.56%,样品总阳性率为20.29%,其中高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)样品总阳性率为15.94%,经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)样品总阳性率为4.35%。总之,猪繁殖与呼吸综合征病毒,尤其是高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在唐山地区猪群中污染面积较大,应值得高度重视。     

倍硫磷浇泼剂防治牛皮蝇蛆病的扩大试验

自１９９４～１９９６年对５０００多头牛应用倍硫磷浇泼剂防治牛皮蝇蛆病。经治疗过的牛食道中或背部皮下所发现的幼虫数不到未治疗对照牛的３％，杀虫率达９７％以上。此外，并发现此种药剂的杀虫效率高于倍硫磷注射剂７％，被治疗牛只未出现任何中毒症状。