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微量补体结合试验检测牛、羊副结核病的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准》“副结核病补体结合试验操作规程”方法(简称常量法)和微量补体结合试验(简称微量法)检测3677头进口牛羊的副结核病抗体并进行比较。结果表明,常量法和微量法的溶血素效价测定值相同,补体效价测定值近似,阴性血清对照、抗原对照、补体对照、红细胞对照、血清抗补体结合对照结果均相同,阳性对照血清效价微量法比常量法提高1个滴度,被检血清的阳性检出率微量法高于常量法。比较37℃水浴及37℃恒温培养箱环境下的微量法补体结合试验结果,溶血素效价、补体效价、各项对照试验结果完全相同,被检血清在37℃水浴反应更加充分。比较用变态试验和补体结合试验检验3677头牛羊副结核病的结果、以及用补体结合试验、变态反应和酶联免疫吸附试验方法同时检测2024头牛的结果,发现它们的相关性很小。 相似文献
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利用昆虫杆状病毒表达系统制备了H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白、类病毒脂质体和病毒样颗粒,分别作为包被抗原,建立了相应的检测H5N1亚型禽流感病毒抗体的ELISA方法。特异性试验、敏感性试验、重复性试验和稳定性试验结果表明,利用3种抗原包被所建立的ELISA方法均具有良好的重复性和稳定性,批间和批内变异系数均小于10%,但单独表达的HA蛋白和类病毒脂质体特异性更好,而且类病毒脂质体有更高的免疫反应性,与灭活全病毒相比安全性更高,故在H5N1亚型AIV抗体水平检测方面更具有应用前景。 相似文献
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取含有小鼠重金属螯合蛋白(mMT)基因启动子及人生长激素(hGH)基因的鱼样品,以Qiagene核酸纯化技术对鱼组织DNA进行纯化。常规PCR检测显示,mMT启动基因和hGH基因的PCR产物分别为240bp和130bp,与设计相符。PCR产物的核酸测序结果证实其扩增产物具特异性。地高辛-PCR(Dig-PCR)标记反应显示,2个基因均产生1条Dig标记的特异产物带。Dig-PCR-ELISA检测敏感性试验显示,对mMT启动子和hGH基因的检测敏感性可达10^-3,与常规PCR结合琼脂糖胶电泳检测方法相比,检测敏感性可提高至100-1000倍。试验证明,针对mMT和hGH基因所建立的Dig-PCR-ELISA技术特异可靠。 相似文献
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禽败血支原体病的预防与控制 总被引:4,自引:0,他引:4
禽败血支原体病主要是指鸡或者火鸡的一种慢性呼吸道传染病。1病原迄今为止确认对鸡致病的支原体仅有三种:一是引起鸡的慢性呼吸道病和火鸡的传染性鼻窦炎的禽败血支原体(MycoplasmaGalliseptium,MG);二是引起鸡和火鸡亚临床或临床感染的滑液膜支原体(MycoplasmaSynoviae,MS);三是引起火鸡气囊炎的火鸡支原体(MycoplasmaMeleagrides,MM)。鸡败血支原体一般为球形、卵圆形,有时为棒状或球杆状,大小约为0.2~0.5μm,利用瑞氏染色液或姬姆萨染色液染色时… 相似文献
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水疱性口炎病毒RT-LAMP快速检测方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
根据逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)原理,针对水疱性口炎病毒(VSV)糖蛋白G基因序列中的6个区域设计内外各1对特异引物,建立扩增VSV糖蛋白(G)基因的RT-LAMP方法。扩增产物电泳呈特异的阶梯状条带分布,扩增产物加SYBR GREEN I染色呈特征性的黄绿色,肉眼可直接观察判定。同时,还建立了可以进行定量检测的实时RT-LAMP方法。特异性试验显示,本方法可快速检验鉴别VSV与口蹄疫病毒(FMDV)和猪水泡病病毒(SVDV)。敏感性试验显示,建立的实时RT-LAMP方法检测VSVRNA的最低检测量为0.01 PFU,比实时荧光RT-PCR显著提高。建立的LAMP方法可检测p-VSVNJ质粒DNA的最低量为6.36×10-3pg/μL(1.4×103copies/μL),比PCR也显著提高。综合表明,本研究建立RT-LAMP检测VSV的方法具有特异、敏感、快速、简便的特点,具有开发应用前景。 相似文献
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以定量的10倍系列稀释的质量pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了PCV1检测的荧光定量PCR方法.结果表明该方法检测灵敏度可达1.0×104拷贝/μL,线性范围为1010~101;对起始浓度为1.0X107、1.0×106、1.0×106拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758%、1.865%和3.836%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nPCR)具有相近的灵敏度. 相似文献
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猪瘟病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 总被引:7,自引:4,他引:3
本研究设计了4条针对猪瘟病毒6个位点的特异性引物,建立了一种灵敏、特异、快速的猪瘟病毒体外等温扩增(RT-LAMP)检测方法,所建立的方法能够特异地检测出猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的存在,检测PRV、PRRSV、PCV-2等病毒均为阴性;灵敏度高,所建立的CSFV-RT-LAMP方法灵敏度为10-5,总RNA的检测阈值约为1pg;反应快速,整个扩增反应可在1h内完成;操作简单,不需要PCR仪等复杂的仪器,结果可经肉眼观察及电泳检测。本试验为猪瘟的现场快速检测提供更加简便、快速的方法,可以满足基层检疫的需要。 相似文献
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副猪嗜血杆菌环介导等温扩增检测方法的建立 总被引:2,自引:1,他引:2
本研究旨在建立检测副猪嗜血杆菌(Hps)的新方法。根据GenBank上发表的不同血清型Hps的16S rRNA序列,找出高度保守区域,再针对该区域设计了4条特异性引物,建立了Hps环介导等温扩增法(LAMP)。试验结果表明,LAMP方法在恒温(63℃)条件下特异性强,比PCR方法敏感100倍,鉴于目前副猪嗜血杆菌分离培养和鉴定的复杂性,LAMP操作简单、成本低,整个扩增反应在1 h内即可完成,为检测Hps提供了一个快速简便的分子生物学方法。 相似文献
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