江苏和安徽省水牛肝片和吸虫感染情况调查分析

采用鼻便检查，斑点酶联吸附试验检测江苏和安徽２省１０个县、市３０２户的３０７头水牛的粪便、血清，并以斑点杂交试验检测肝片吸虫的中间宿主小土蜗７７７只，以分析当地水牛肝吸虫感染状况。结果，粪便检查出虫卵阳性水牛４３头，阳性率为１４．０１％，其中安徽省为１１．６１％，江苏省为１６．４８％；阳性水牛最小年龄为１．５岁，最大为１６岁，阳性率随年龄增长而提高；母不不牛阳性率为１３．６０％，公水牛为１５．１９     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法，用该法检测20份人工感染鸡血清样品，抗体阳性率为100％，康复期鸡群血清抗体阳性率为43％，人工接种弱毒疫苗65d和170d鸡群血清抗体的阳性率分别为60％、70％。经反复试验，确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件，即抗原包被浓度10．8μg／孔，待测血清最佳稀释度为1：100。     

检测猪瘟抗体间接ELISA方法的建立及应用

用猪肾传代细胞PK-15增殖猪瘟病毒（CSFV）兔化弱毒苗株（HCLV），病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、浓缩后作为包被抗原。经各种条件的优化，建立了检测猪瘟血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度分22、28mg／L，血清最佳稀释度为1：40，与猪细小病毒、O型口蹄疫、猪衣原体阳性血清呈阴性反应，与HCV标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与标准阴性血清和临床未感染CSFV的猪血清呈阴性反应；用HI和本EI。ISA方法检测94个猪厂送检血清1455份。其中血清稀释液中不含PEG6000的914份送检血清阳性率为83．7％，与HI符合率为96．6％，HI阳性率略高为85．7%；血清稀释液中含2％PEG6000的541份送检血清阳性率为88．72％，与HI符合率为97．3％，HI阳性率为88．17％。结果表明本试验所建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于临床猪瘟血清抗体的定性和定量检测。     

鸡传染性法氏囊病血清学诊断的研究

应用琼脂扩散试验（AGP）法对具有典型临床症状并经病理学诊断确诊的鸡血清50份和法氏囊材料50份进行了标准抗原检测被检血清；标准阳性血清检测被检疫抗原的研究。标准抗原检测被检血清阳性40份，阳性率为80％（40／50）；标准阳性血清检测被检抗原阳性36份，阳性率为72％（36／50）。经x^2检验（P＞0．05）差异不显著。结果表明两者均适应于IBD的诊断。     

基于大片吸虫分泌排泄产物层析组分的牛片形吸虫病间接ELISA诊断方法的建立

为建立更敏感、特异的牛片形吸虫病早期诊断方法,本试验将收集的大片吸虫分泌排泄产物（Fasciola gigantica excretory-secretory products,FgESP）进行凝胶过滤层析并从中筛选出检测效果最优的UV280吸收峰,从此峰对应的组分中筛选出诊断效果最优的层析组分后将其作为抗原,通过棋盘滴定试验优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度、显色时间等,确定临界值,建立牛片形吸虫病间接ELISA诊断方法。对建立的方法进行敏感性和特异性试验,检测试验感染0~14周的水牛血清和临床160份水牛血清样本,并与已有的诊断抗原FgESP（阴阳临界值为0.320）进行诊断效果比较。结果显示,层析组分F22具有较优的检测效果。间接ELISA的最佳反应条件为：F22抗原包被浓度0.157 μg/mL,待测血清与酶标二抗的稀释度分别为1：400和1：40 000,显色时间为25 min。应用建立的方法检测15份水牛阴性血清,确定D_{450 nm}阴阳性临界值为0.408。比较F22与FgESP发现,二者特异性相似,但F22作为抗原的敏感性高于FgESP。检测试验感染大片吸虫的水牛0~14周血清,结果表明,从感染第2周开始F22-IgG水平极显著高于FgESP-IgG水平（P<0.01）,因此,F22比FgESP诊断效果更优。对160份水牛血清检测发现,F22阳性检出率为71.25%,FgESP阳性检出率为63.75%。上述结果表明,相比于FgESP,以F22作为诊断抗原建立的大片吸虫病间接ELISA诊断方法敏感性更高,可更有效地进行牛大片吸虫病的早期诊断。     

水牛盱眙病血清学研究

从水牛盱眙病病肝和淋巴结提纯病毒抗原，用双层间接ＥＬＩＳＡ和免疫扩散（ＩＤ）检测盱眙病抗体，结果在２９头病牛血清中ＩＤ阳性率为８％，ＥＬＩＳＡ阳性率为９３．１％；５４头疫区牛血清中，ＩＤ阳性率为１．９％，ＥＬＩＳＡ阳性率为１１．１％；非疫牛则两法均为阴性。以淋巴细胞免疫吸附试验证实病牛淋巴细胞的细胞膜上存在有病毒抗原。以病水牛血清和健康水牛对比作免疫电泳，发现病牛血清中缺少ＩｇＭ带     

对流免疫电流法诊断传染法氏囊病的研究

应用对流免疫电流技术（CIET）和琼脂扩散试验（AGP）对具有典型临床症状传染性法氏囊病鸡血清50份和法氏囊材料50份进行标准抗原检测被检血清，标准阳性因清检测被检抗原。AGP法标准抗原检测被检血清阳性40份，阳性率80％（40／50），标准阳性血清检测被检抗原，阳性36份，阳性率72％（36／50）；CIET法标准阳性血清检测被检抗原，阳性47份（47／50），阳性率为94％，标准抗原检测被检血清，阳性48份，阳性率为96％（48／50）。经x^2检验均P＞0.05，差异不显著。CIET法与AGP法，标准抗原检测被检血清，AGP法阳性率80％（40／50），CIET法阳性率96％（48／50）；标准阳性血清检测被检抗原，AGP法阳性率72％（36／50），CIET法阳性率94％（47／50）。经x^2检验均P＜0.05，差异显著。结果表明，CIET法比AGP法敏感、快速、且检出率高。     

三种抗原对家畜日本血吸虫病诊断价值的比较

以日本血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23／pGEX、可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，SEA）及SEA经Sephadex G-200柱层析分离后得到的第一峰SEAl作为诊断抗原，应用ELISA检测人工感染日本血吸虫绵羊血清及自然感染日本血吸虫水牛血清。结果显示，三种抗原用于检测人工感染日本血吸虫绵羊血清的阳性符合率分剐为88．79％、98．15％、100％，阴性符合率均为100％；自然感染日本血吸虫水牛血清的阳性符合率分别为80％、80％、84％，阴性符合率分别为88．9％、93．3％、91．1％；三种抗原与伊氏锥虫病牛血清无交叉反应；检测感染日本血吸虫不同时间绵羊血清，发现感染6周后均被检出针对这三种抗原的特异性抗体，且SEA及SEAl在感染4周后即可检出特异性抗体。三种抗原的诊断效果差异不显著。     

基于GAPDH重组蛋白建立羊肝片吸虫病间接ELISA检测方法

为了建立早期羊肝片吸虫病的血清学快速检测方法，本试验成功克隆并表达肝片吸虫GAPDH重组蛋白，Western blot结果显示，该重组蛋白具有良好的抗原活性。用肝片吸虫GAPDH重组抗原包被，建立肝片吸虫病血清抗体的间接ELISA方法；随后优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量，同时筛选其他反应条件。结果显示，间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,GAPDH重组抗原与华枝睾吸虫、日本血吸虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。对来自黑龙江省各地区的96份羊血清进行检测，阳性率为16.67%(16/96)。结果表明本试验建立的方法具有良好的敏感性和特异性，能够为早期诊断羊肝片吸虫病提供参考。     

牛分枝杆菌重组MPT83蛋白间接ELISA方法的建立

以纯化的牛分枝杆菌重组MPT83蛋白为包被抗原，建立了检测牛分枝杆菌抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA各组分的最适反应条件：抗原包被浓度为1μg／mL，酶标二抗稀释度为1：1600，血清稀释度为1：60，抗原和血清、血清和二抗均在37C反应30min，底物在37℃显色15min，D655nm阴性、阳性临界值为0．5。经阻断试验、交叉试验、重复性试验，表明该方法特异性强、重复性好。用该方法对18份结核菌素试验阳性牛血清和36份结核菌素试验阴性牛血清进行检测，结果显示，阳性血清的符合率为27．8％，阴性血清的符合率为91．7％。     

牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

经DNAstar分析，据牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）全基因序列设计合成gB基因的特异性引物，以构建的pGM-T-gB为模板，PCR扩增IBRVgB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆，酶切鉴定并测序鉴定后，定向插入pET32a表达载体中，转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明，诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在，大小约为29．2ku，与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2．000mg／mL，纯度为79．2％。间接ELISA检测证明，表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原，建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50／zg／mL，血清的最佳稀释度为1：40，阳性标准定为s／e〉0．395。交叉试验表明对牛流热（BEV）、牛肺疫（CBPP）、牛病毒性腹泻（BVD）、牛结核（BTB）、牛副结核（PBB）以及牛赤羽病（BAD）等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较，特异性、敏感性和符合率分别为83．3％、90．9％和88．9％；与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较，特异性、敏感性和符合率分别为92％、92．7％和92．5％。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性，显示了良好的应用前景。     

间接ELISA检测抗传染性法氏囊病病毒抗体方法的建立

采用原核表达的传染性法氏囊病毒(IBDV)核衣壳蛋白VP2作为诊断抗原,建立检测IBD血清抗体的间接ELISA方法.抗原最佳包被量为每孔174.67ng,待检血清最佳稀释度为1:40,待检血清样品的D492nm≥0.43Dpos+0.57Dneg判为阳性,反之判为阴性.对采自安徽省部分地区的979鸡血清样品进行检测,IBDV抗体阳性率为39.73%.结果证实,间接ELISA法用于IBDV血清抗体的监测具有良好的特异性,是一种快速简便的血清学方法,值得在基层推广应用.     

检测减蛋综合征抗体间接ELISA法的建立及应用

用蔗糖不连续梯度纯化的减蛋综合征＊（ＥＤＳ－７６）病毒包被ＥＬＩＳＡ板，建立了检测ＥＤＳ－７６抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。经测定，抗原最适包被浓度为１μｇ／ｍＬ，待检血清最佳稀释度为１：２００，以ＯＤ４９０〉０．３，Ｐ／Ｎ〉２．１判为阳性结果。对４个鸡场的１２０份鸡血清进行检测，阳性率分别为０，４３．３３％，８０．００％和９３．３３％。     

异源抗原在建立间接酶联免疫试验(ELISA)检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用

本文利用vero细胞增殖的IBDN抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ELISA），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）抗体。该法快速，敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过30份血清样品ELISA致价（ET）的对数值，（logET）与血清P／N值（待检血清OD也与阴性血清OD值之比）的线性回归分析，得直线方程y=3．0589＋0．0739x（r=0．9174），从而血清样品的ET可通过血清单一稀释度的P／N值来计算。用不同抗原来源作ELISA表明，从vero细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（CEF）细胞增殖的抗原可提高检测血清OD值近20％，表现出异源抗原县有更高的特异性。     

应用LHD-Sj23和SjCL基因重组抗原诊断水牛日本血吸虫病的研究

目的：验证日本血吸虫基因重组抗原检测水牛日本血吸虫病的效果。方法：以日本血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23／pGEX和SjCL／pET-28a( )作为抗原，应用ELISA法检测水牛日本血吸虫病。结果：感染日本血吸虫病阳性符合率分别为93．3％(42／45)和95．6％(43／45)，阴性符合率分别为93．3％(42／45)和80％(36／45)。和以血吸虫成虫抗原(SWAP)和虫卵(SEA)抗原作为诊断抗原获得的结果差异不明显。同时将上述两种基因重组抗原混合作为诊断抗原，检测水牛血吸虫病，结果阳性符合率为88．9％(40／45)，阴性符合率为33．3％(15／45)。结论：由于基因重组抗原制备简便、价廉，有利于诊断技术的标准化。因此，基因重组抗原在血吸虫病诊断领域有着良好的研究和应用前景。     

酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１：１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的家访工为１：２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳     

应用酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征血清抗体的研究

建立的检测猛增生殖与呼吸综合征（PRRS）酶联免疫吸附试验（ELISA），其抗原包被浓度为24μ／mL，血清稀释度为1∶100，酶标二抗的工作浓度为1∶500。应用该方法对陕西省9个地区采集的有疑似PRRS征候的250份猪血清进行检测，检出阳性血清32份，阳性率为12．8％，从而证实陕西省存在PRRS，也为该病的大面积血清学普查提供了一种简易、快速、准确的检测方法。     

苏皖水牛肝片吸虫和前后盘吸虫感染情况的调查

苏皖两省１０县（市）共调查３０２农户的３０７头水牛,粪便学检查肝片吸虫阳性４３头,阳性率１４．０％,其中安徽的阳性率为１１．６１％（１８／１５５）,江苏阳性率为１６．４８％（２５／１５２）;母牛阳性率为１１．８％,公牛为１１．４％;前后盘吸虫阳性１７０头,阳性率为５５．４％（１７０／３０７）,其中安徽的阳性率为５８．１％（９０／１５５）;江苏的阳性为５２．６％（８０／１５２）,母牛的阳性率为６０．１％（１３７／２２８）,公牛的阳必国４１．８％（３３／７９）,两种吸虫的阳性率均呈现随年龄增加而提高的趋势,经统计学分析,两种吸虫的感染与地形无显著差异（Ｐ〉０．０５）,肝片吸虫的感染与性别、年龄亦无显著差异（Ｐ〉０．０５）,但对前后盘吸虫来说,感染与性别、年龄的差异显著（Ｐ〈０．０５）。而各县间两种吸虫感染则有显著关     

应用间接ELlSA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1：80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1．5％,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1．30％。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。     

应用Sj23基因重组抗原诊断牛、羊血吸虫病研究

以血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23／pGEX(血吸虫23kD抗原大亲水区多肽／pGEX载体表达蛋白)作为抗原。应用ELISA法检测黄、水牛和绵羊血吸虫病。结果对黄、水牛的阳性符合率为94．0％(79／84)和85．5％(53／62)，阴性符合率为82．7％(81／98)和95．1％(77／81)，对绵羊的阳性符合率为86．04％(111／129)，阴性符合率为100％(9l／91)。以血吸虫成虫抗原(SWAP)及虫卵抗原(SEA)作为诊断抗原获得的结果差异不明显。对锥虫感染绵羊血清不出现交叉反应。由于基因重组抗原的制备比虫体抗原制备简便、价廉，同时由于基因重组抗原的应用有利于诊断技术的标准化，以基因重组抗原作为血吸虫病诊断抗原具有良好的研究应用前景。