2007-2010年河北省猪蓝耳病病毒隐性感染情况调查

采用RT-PCR方法对2007—2010年采自全省11个地市272个县级屠宰场2159份商品猪的肺脏或肺门淋巴结进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病原学检测,结果PRRSV场总体阳性率为38.97%,样品总阳性率为11.90%,高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)总阳性检出率为9.77%,经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)总阳性检出率为2.13%。PRRSV同CSFV、PRV和PCV-2混合感染所占的比率为55.64%,HP-PRRSV和C-PRRSV同其他病原体混合感染所占的比率分别为58.76%和41.30%,混合感染以二重或三重感染为主。在同一份样品中不能同时检测到HP-PRRSV和C-PRRSV。C-PRRSV隐性感染阳性率虽然在河北省猪群中一直较低,但其略呈上升的趋势;而HP-PRRSV隐性感染阳性率虽然在河北省猪群中呈逐年下降趋势,但其污染面积较大,应值得高度重视。     

河北省“猪高热病”主要病原分析

对2006～2009年河北省“猪高热病”的主要病原进行了调查分析。结果表明,猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）、猪伪狂犬病毒（PRv）、猪瘟病毒（CSFV）、副猪嗜血杆菌（HPS）、胸膜肺炎放线茵（APP）、链球菌（S．S）、大肠杆菌（E。coli）、沙门氏菌（Sal．）和巴氏杆菌（Pro）的总检出率分别为64．52％、30．27％、11．26％、6．13％、3．10％、2．58％、1．46％、1．11％、1．08％和0．10％。其中高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP—PKP．SV）和经典猪繁殖与呼吸综合征病毒（C—PV．P．SV）总检出率分别为60．92％和3．60％。HP—PRIKSV同其他病原体混合感染比较普遍,感染以二重感染、三重感染为主。总之,河北省“猪高热病”的主要致病病原是HP-PRRSV,并多与PCV-2、PRV、CSFV、HPS、APP、E．cold、S．S和Sal．、Pm等病原体中的-种或几种病原混合感染或继发感染-种“综合症候群”型疫病。     

我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析

对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析.结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平均74.6%.屠宰场的检出率平均44%,混合感染主要以二重感染为主,且发病场较屠宰场严重.对获得的13株HP-PRRSV ORF5进行测序分析,发现序列长度均为603 bp,未见缺失或插入,仅在9 aa～29 aa存在点突变;序列比较发现,与普通株标准序列VR-2332株核苷酸同源性达85.9%～87.2%;与高致病性毒株的同源性JXA1-06核苷酸同源性达96.0%～99.0%.而其推导氨基酸序列与普通型、高致病性毒株的同源性分别为87.1%～88.1%和97.5%～98.0%.从遗传进化以及变异情况看,获得的PRRSV ORF5序列均为与JXA1类似的高致病性PRRSV序列,与JXA1和HB-1同属美洲型中的一个亚群.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用

为快速鉴别诊断高致病性猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病,根据GenBank中登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区和猪伪狂犬病病毒(PRV) gB基因保守区序列,分别设计并合成了2对特异性扩增引物,通过对反应条件的优化,建立了能够同时检测HP-PRRSV和PRV的双重PCR诊断方法.利用建立的双重PCR方法对30份临床可疑样品进行检测,并与商品化单项PCR试剂盒进行对比验证.结果表明,本试验建立的双重PCR方法具有较高的灵敏度和特异性,与商品化单项PCR试剂盒检测结果完全一致.因此,该双重PCR方法能够用于HP-PRRSV和PRV单项或混合感染的临床样品快速鉴别检测.     

安徽省仔猪腹泻5种病毒感染情况的调查研究

为了解安徽地区仔猪病毒性腹泻流行病学特点,对从安徽省37个规模化猪场采集腹泻仔猪的粪便或病死猪肠段共计186份,用RT-PCR和PCR技术进行了猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(RV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)等5种病毒的检测.结果表明,PEDV阳性病料数占59.1％,阳性猪场占75.7％;TGEV阳性病料数占5.4％,阳性猪场占8.1％;RV阳性病料数占2.7％,阳性猪场占2.7％;PRV阳性病料数占8.1％,阳性猪场占21.6％;PCV-2阳性病料数占25.8％,阳性猪场占54.1％.PEDV与TGEV混合感染占4.3％,PEDV与PCV-2混合感染占18.8％,PEDV与PRV混合感染占10.8％,PRV和PCV-2混合感染占4.8％;其他病因50例,占26.9％.结果表明,PEDV、PCV-2 、PRV的单纯或混合性感染是近年安徽省仔猪腹泻的最为重要的3种病毒性病因,说明在今后的仔猪腹泻病防控过程中,应该着重加强对该3种疾病的综合防控.     

HP-PRRSV和PCV-2混合感染的诊断及阿司匹林与替米考星联合应用的治疗效果

四川省某规模化猪场各阶段猪只陆续发病,通过临床症状观察、病理剖检、实验室诊断确诊发病猪为高致病性繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)混合感染,选取混合感染检测阳性病猪40头进行治疗试验,结果表明阿司匹林与替米考星联合使用对HP-PRRSV与PCV-2混合感染治疗效果较好,随后联合应用阿司匹林与替米考星对大群猪进行了治疗,取得了较为理想的效果。     

内蒙古地区猪群中HP-PRRS的流行病学调查

为掌握内蒙古地区猪群中高致病性猪蓝耳病(HP-PRRS)的流行规律,应用流行病学调查、病理剖检、血清学试验、分子生物学等方法对发病猪群进行了HP-PRRSV的研究.结果表明,临床上发病猪多为合并感染,病死率高.PCR检测16份送检样品中, HP-PRRS阳性率62.5%,猪蓝耳病(PRRS)阳性率18.8%,猪瘟(CSF)阳性率25%,伪狂犬病(PR)阳性率12.5%,猪细小病毒(PP)感染阳性率0%,猪圆环病毒2型(PCV-2)感染阳性率37.5%,而且以上这些猪病病毒抗体在猪群中普遍高于未发生HP-PRRS疫情之前.由此可见,目前猪病疫情是以HP-PRRSV为优势毒株,结合其他病原体混合感染而引发的.     

怀化市屠宰场常见病毒隐性感染情况的监测与分析

为了评估怀化市屠宰场健康猪群病原的隐性感染情况,使用荧光PCR检测技术对市内2个屠宰场共360份健康猪扁桃体进行了口蹄疫病毒(FMDV)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)等主要猪病原进行核酸检测。结果显示,屠宰场内外观健康猪群中的病原阳性率分别为PCV2 82.78%、PRRSV 13.61%、HP-PRRSV 3.89%、PRV 3.89%、FMDV 3.06%、CSFV 0。表明健康猪群中携带PCV2比较普遍,其他病原也有一定的携带率。     

SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2和PRV交叉感染的检测

采用RT-PCR方法对37份疑似猪流感病毒(SIV)感染病料进行了病原学检测。同时,还运用PCR和RT-PCR方法对SIV阳性病料进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪伪狂犬病毒(PRV)目的基因片段的扩增。结果,扩增出了SIV特异目的基因片段,且4份病料都为混合感染,感染状况分别为SIV/PRRSV/PRV,SIV/CSFV/PRRSV三重感染,SIV/PCV-2和SIV/PRRSV二重感染。     

猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性/经典毒株多重RT-PCR方法的建立及应用

为了建立鉴别猪瘟病毒(Classical swine virus,CSFV)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)及经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)的快速检测方法,根据GenBank中公布的已知序列,设计合成了针对CSFV、HP-PRRSV和C-PRRSV特异性引物。经过引物筛选及对退火温度、引物比例等扩增条件的优化,建立了用2对引物同时检测CSFV、HP-PRRSV和C-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法可同时扩增出287bp的CSFV、374bp的HP-PRRSV和464bp的C-PRRSV目的核苷酸片段,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等无交叉反应,最低可以检测到11.3pg的CSFV、4.7pg的HP-PRRSV和2.8pg的C-PRRSV总RNA。分别用多重和单项RT-PCR检测了从河北省采集的31份血清或组织样品,其中CSFV、HP-PRRSV、C-PRRSV以及CSFV与HP-PRRSV混合感染的检出率分别为19.4%、22.6%、0%与9.7%,多重与单项RT-PCR的符合率为100%。本试验建立的多重RT-PCR方法可同时鉴别CSFV、HP-PRRSV与C-PRRSV,适于猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测与流行病学调查。     

2006-2011年唐山地区猪蓝耳病病毒隐性感染情况调查

为了了解唐山地区猪蓝耳病的带毒情况,采用RT-PCR方法对2006-2011年采自64个县级屠宰场276份商品猪的肺脏或肺门淋巴结进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病原学检测,结果屠宰场阳性率为51.56%,样品总阳性率为20.29%,其中高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)样品总阳性率为15.94%,经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)样品总阳性率为4.35%。总之,猪繁殖与呼吸综合征病毒,尤其是高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在唐山地区猪群中污染面积较大,应值得高度重视。     

湖南高致病性猪蓝耳病隐性感染情况调查

用ELISA和RT-PCR的方法对采集自湖南省内20个规模场1007份血清和3个市级定点屠宰场50份猪肺门淋巴结进行蓝耳病血清抗体检测和高致病性猪蓝耳病病毒的检测。结果1007份血清中,蓝耳病抗体阳性率为72.9%(734/1007),高致病性猪蓝耳病病毒携毒率为3.2%(32/1007),50份肺门淋巴结病毒阳性率为16%(8/50),其中,蓝耳病免疫与非免疫猪血清其抗体阳性率相差不显著,种猪的抗体阳性率明显高于商品猪,而其病毒携毒率为0%。部分规模猪场和眼观健康的育肥猪存在高致病性猪蓝耳病病毒的隐性感染。     

重庆市高致病性猪蓝耳病流行病学调查

为了掌握高致病性猪蓝耳病(HP-PRRSV)的流行规律,应用病理学、RT-PCR/荧光RT-PCR、血清学试验、流行病学调查等方法对592发病场点的794份组织样品、来自屠宰场的636份健康组织和604份健康猪血清进行HP-PRRSV检测。经检测,发病组织HP-PRRSV样品阳性率为85.01%,健康猪组织HP-PRRSV阳性率为8.18%;健康猪血清HP-PRRSV阳性率为2.32%。另采用ELISA法对604份健康猪血清PRRSV抗体检测,免疫抗体阳性率仅为43.87%。由此可见,HP-PRRS广泛存在重庆市各区县,以仔猪和育肥猪易感且发病率高,5～7月是发病的高峰期,主要在500头以下小规模猪场流行,长期带毒、持续感染、隐性感染、混合感染、免疫应答延迟是本病的流行特点。     

New genomic characteristics of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome viruses do not lead to significant changes in pathogenicity

Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP-PRRS) initially emerged in China and currently prevails in other Asian countries as well, resulting in immense economic losses. HP-PRRS virus (HP-PRRSV) has undergone rapid evolution since its first recognition in 2006. To analyze the genomic and pathogenic characteristics of 2010 HP-PRRSV, we tested 919 clinical samples collected from China, Laos and Vietnam, sequenced 29 complete genomes of HP-PRRSV isolates, and determined the pathogenicity of seven HP-PRRS viruses isolated from 2006 to 2010. HP-PRRSV was detected from 45.2% (415/919) samples, while only 0.1% (1/919) was classical PRRSV, indicating that HP-PRRSV isolates with a unique discontinuous deletion of 30 amino acids (aa) in non-structural protein 2 (Nsp2) are still the predominant viruses. 2010 HP-PRRSV together with 2009 HP-PRRSV isolates form a new evolutionary branch based on phylogenetic analyses. The numbers of potential N-glycosylation sites are variable in major glycoprotein GP5 but are conserved in minor glycoproteins GP2, GP3 and GP4. Pathogenicity studies showed that HP-PRRS viruses isolated from 2006 to 2010 maintain similar level of high pathogenicity, which caused high fever (>41°C for at least four days), 100% morbidity, and 40-100% mortality in 4-10 weeks old pigs. Real time monitoring information from this study could help to understand the genetic and pathogenic evolution of HP-PRRSV and assist in the control of HP-PRRS in Asia.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立

为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株PRRSV以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株PRRSV毒株并准确鉴别其中7株HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对PRRSV、HP-PRRSV病毒液的检测低限均小于每个反应0.5TCID_(50);其组内、组间检测变异系数均10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光RTPCR试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测PRRSV提供了一种新的分子生物学检测方法。     

Concurrent highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection accelerates Haemophilus parasuis infection in conventional pigs

This study was aimed at determining the effect of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) on Haemophilus parasuis (HPS) in co-infection. A quantitative real-time PCR targeting infB gene, which is conserved among different HPS serotypes, was developed to improve the accuracy and speed of the detection of HPS. A total of 32 four-week-old conventional pigs were distributed randomly into four groups: pigs in group I were intranasally infected with HP-PRRSV first, and were then intraperitoneally inoculated with HPS on 5 days after HP-PRRSV infection; pigs in group II were intranasally inoculated with HP-PRRSV alone; pigs in group III were intraperitoneally inoculated with HPS alone; pigs in group IV were intraperitoneally inoculated with physiological saline. The amount of HPS in serum on 0, 3, 6, 9 and 12 days post-inoculation (dpi) with HPS were detected using the established quantitative real-time PCR. Clinical signs, pathological changes and histopathological lesions were observed. The amount of HPS in serum reached 10(6)copies/μl at 3 dpi with HPS in pigs of group I, while it arrived 10(5.7)copies/μl at 9 dpi with HPS in pigs of group III. The HPS loads in hearts and lungs were much higher than in other tissues. The study showed that HP-PRRSV was able to accelerate HPS infection and loads.     

Identification of porcine serum proteins modified in response to HP-PRRSV HuN4 infection by two-dimensional differential gel electrophoresis

Since 2006, highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) has become the major pathogen attributed to the prevalent porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) in China. The present study aims to identify serum proteins modified in response to infection of HuN4, a HP-PRRSV strain isolated from a farm in 2006. 2-D DIGE analysis allowed for the detection of 19 differentially expressed protein spots, of which 18 were identified by MALDI-TOF/TOF MS. These 18 spots represented for a total of 9 proteins (6 up-regulated and 3 down-regulated), most of which belonged to the acute phase proteins in swine and showed a trend of regression in the late phase of the experiment. One of a series of AGP spots was identified for the first time to be decreased in acute phase of PRRSV infection in swine. But the whole level of the protein in the serum did not show significant changes by Western blot. The rising tendency of Hp was confirmed by Western blot and ELISA. These altered proteins were probably involved in the inflammatory process triggered by HuN4 and in alleviating the oxidative damage occurring in the process. In summary, these results may provide new insights into understanding the mechanisms of HP-PRRSV infection.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断及病理分析

根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)的Nsp2基因部分缺失的特征,设计合成1对特异性引物,对长春某猪场4份疑似HP-PRRSV感染病死猪的淋巴结、脾脏、肺脏等病料进行RT-PCR检测,结果均扩增出226 bp的特异片段,与预想结果一致。取病死猪淋巴结、肺脏、脾脏等组织,用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色,进行病理组织学分析,结果显示,淋巴结和脾脏中淋巴细胞严重坏死,肺脏呈弥漫性间质性肺炎病变,肝脏、肾脏、脑等器官实质细胞均出现不同程度的损伤。