鲢酶解物对羟自由基的清除作用

通过测定酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果，从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和复合蛋白酶5种酶中，筛选出木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作为酶解鲢制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的理想水解酶；用正交试验L9(3^4)对两种酶的水解条件进行了优化，并对最佳酶解条件下得到的酶解物进行Sephadex G-25凝胶柱分离，洗脱液分别在波长280nm处比色，测定酶解物中主要抗氧化活性肽的分子量分布。结果表明，木瓜蛋白酶在温度50℃、酶解时间15min、pH=6．5、酶质量分数1．50％、底物：水=1：2的水解条件下，酶解物对羟自由基清除效果较好，清除率为88．2％；胰蛋白酶在温度55℃、酶解时间60min、pH=8．0、酶质量分数0．25％、底物：水=1：2的水解条件下，酶解物对羟自由基清除效果较好，清除率为84．2％。木瓜蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时有最大羟自由基清除率峰，清除率为95．1％，在最大峰处酶解物中活性肽的分子量为2．2kDa；胰蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时也有最大羟自由基清除率峰，其清除率为89．6％，该峰处活性肽的分子量为14．2kDa。     

紫菜活性肽复合酶法制备与清除羟自由基作用

以条斑紫菜为原料,利用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组成的复合酶水解紫菜蛋白制备生物活性肽并研究清除羟自由基作用。采用单因素试验考察胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的比例、底物质量浓度、酶用量、水解温度、水解时间、pH对羟自由基清除率及水解度的影响,响应面法优化酶解条件,SephadexG-15凝胶层析法测定活性肽的分子质量分布。试验结果表明,复合酶最佳酶解工艺条件为胰蛋白酶与木瓜蛋白酶复合酶比例1.67,底物质量浓度20mg/mL,酶用量1.67%,pH 7.0,温度55℃,酶解4h,紫菜活性肽对羟自由基的清除率为80.6%,清除率为50%时的质量浓度为0.744mg/mL,分子质量大多分布于500～1500ku。     

缢蛏蛋白肽制备工艺优化及其清除羟自由基作用

以缢蛏为试验材料,采用羟自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适水解用酶,在单因素试验基础上使用响应面法优化酶解工艺条件,考察缢蛏蛋白肽的羟自由基清除能力并通过Sephadex G-15凝胶层析测定其分子质量分布。结果表明,碱性蛋白酶酶解制备的缢蛏蛋白肽清除羟自由基能力明显强于其他蛋白酶,优化后的碱性蛋白酶水解缢蛏蛋白工艺条件为底物浓度6mg/ml、加酶量3%、pH8.0、温度55℃、酶解时间4h,蛋白肽的羟自由基清除率为76.60%,IC50值为1.89mg/ml,蛋白肽中80%以上是分子质量小于1500Da的小分子肽。     

基于Box Behnken响应面设计优化制备鸢乌贼抗氧化肽的研究#br#

以印度洋鸢乌贼(Symplectoteuthis oualaniensis)胴体分离蛋白为原料,基于分子量分布和营养价值分析,优化制备抗氧化肽的酶解工艺参数。碱溶酸沉法从鸢乌贼胴体提取分离蛋白;以底物浓度、酶底比、酶解时间等3个因素为单因素实验;Box-Behnken中心法则设计响应面实验;DPPH自由基清除率结合水解度为响应指标。鸢乌贼胴体分离蛋白相对分子量分布在30~240 kDa;必需氨基酸占总氨基酸42.56%;最佳酶解工艺参数是底物浓度4%、酶底比9 U·mg^-1、酶解时间4 h。5 mg·mL^-1的鸢乌贼胴体分离蛋白酶解物的DPPH自由基清除率为55.60%,羟自由基清除率为53.21%,ABTS自由基清除率为40.12%。鸢乌贼胴体分离蛋白符合FAO/WHO世界卫生组织提出的理想蛋白营养价值模式,鸢乌贼胴体能制备出营养价值高和抗氧化活性强的海洋功能蛋白肽。     

Optimization of the preparation of bioactive peptides from Sinonovacula constricta and its hydroxyl free radical scavenging activity

以缢蛏为试验材料,采用羟自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适水解用酶,在单因素试验基础上使用响应面法优化酶解工艺条件,考察缢蛏蛋白肽的羟自由基清除能力并通过SephadexG-15凝胶层析测定其分子质量分布.结果表明,碱性蛋白酶酶解制备的缢蛏蛋白肽清除羟自由基能力明显强于其他蛋白酶,优化后的碱性蛋白酶水解缢蛏蛋白工艺条件为底物浓度6 mg/ml、加酶量3％、pH8.0、温度55℃、酶解时间4h,蛋白肽的羟自由基清除率为76.60％,IC50值为1.89 mg/ml,蛋白肽中80％以上是分子质量小于1500 Da的小分子肽.     

金枪鱼鱼骨胶原肽的制备及抗氧化活性研究

为制备金枪鱼鱼骨胶原肽,并对其抗氧化活性进行研究,利用酶解、超滤、凝胶色谱和反相高效液相色谱制备抗氧化胶原肽,采用氨基酸序列分析仪测定其氨基酸序列,利用质谱(ESIMS)确定其分子量,采用羟自由基、DPPH自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基清除实验和脂质过氧化抑制实验对胶原肽抗氧化能力进行评价。结果显示,金枪鱼鱼骨胶原蛋白经胃蛋白酶和胰蛋白酶2步酶解和分离纯化得到1个十肽(TFCH-P2),经氨基酸序列分析和质谱(ESIMS)确定其氨基酸序列为Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Glu-Gln-Gly(GPAGPAGQEG),分子量为839.87 u([M+H]+840.68 u)。体外抗氧化实验结果表明,GPAGPAGQEG对羟自由基(EC500.18 mg/mL)、DPPH自由基(EC500.97 mg/mL)、ABTS自由基(EC500.52 mg/mL)和超氧阴离子自由基(EC500.38 mg/mL)具有良好的清除作用;GPAGPAGQEG亦显示出良好的脂质过氧化抑制作用。研究表明,胶原肽GPAGPAGQEG抗氧化活性良好,可以用于抗氧化相关的功能食品、药物或者食品添加剂。     

海洋酶法利用海产品下脚料制取活性胶原肽的研究

以富含胶原成分的海产品下脚料为原料,经脱除杂蛋白、脂肪后,用海洋碱性蛋白酶水解,以Feton法检测水解产物的羟自由基清除率,提取具有抗氧化活性的胶原肽。通过温度T(℃),pH值,酶料比([E]∶[S]),料水比([S]∶[W]),时间(min)单因素实验,选取合理水平,做L18(37)正交实验,最终优化得到最佳提取条件为:温度45℃、酶料比1∶150、pH8·0、料水比1∶4、反应30min,所得胶原肽的羟自由基清除率为60·42%。与同浓度Vc、谷胱甘肽(GSH)相比,均具有较高的抗氧化活性,有着良好的开发应用前景。     

罗非鱼活性肽分离及抗氧化能力研究

利用正交试验L9(34),以清除超氧自由基能力为指标,分别对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶水解罗非鱼肉的水解条件进行优化,并对最佳清除率下的两种酶解物进行Sephadex G-50凝胶柱分离,检测了各组分对超氧自由基清除率及活性肽分子量分布情况.结果表明:中性蛋白酶在45 ℃、酶的质量分数2.0%、水解105 min及肉水比1∶3的水解条件下对超氧自由基有较好清除作用;木瓜蛋白酶在60 ℃、酶的质量分数2.0%、时间150 min及肉水比1∶2的水解条件下对超氧自由基有较好清除效果.木瓜蛋白酶酶解物在分子量为660 Da的多肽洗脱峰具有最大超氧自由基清除率,中性蛋白酶酶产物在分子量为1320 Da多肽洗脱峰具有最大超氧自由基清除率.     

鲢鱼鱼皮蛋白肽的制备与抗氧化活性评价

为制备抗氧化活性良好的鲢鱼鱼皮蛋白肽,采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶等4种常见的商业酶对鲢鱼鱼皮进行酶解,测定酶解物的ABTS自由基清除力和Fe2+螯合力来评价其抗氧化活性,并用超滤及凝胶层析对酶解物进行分离,以期得到活性更好的酶解物分离组分。酶解后产物的抗氧化活性均有所提高,其中碱性蛋白酶酶解2 h产物活性较强。对此酶解物用截留分子量为10 k Da、5 k Da和3 k Da的中空纤维超滤膜进行超滤,得到的4个组分中,分子量越小的组分抗氧化活性越强。分子量小于3 k Da的组分经Sephadex G-15凝胶层析得到3个组分,其中分子量最大的组分活性较好,在0.51 mg/m L质量浓度下测定其ABTS自由基清除率和Fe~(2+)螯合力分别为(79.65±0.87)%和(93.40±0.20)%。该研究成果对鲢鱼鱼皮抗氧化肽的开发具有较好的指导作用。     

黄缘盒龟肉的酶解工艺优化及其体外抗氧化活性研究

龟类不仅营养价值高,而且具有潜在的药用价值,通过研究龟肉酶解产物的功能特性,可以科学认识其营养保健功能.以黄缘盒龟肉为原料,羟自由基清除率为指标,碱性蛋白酶为水解酶,通过正交试验L9(34)得到制备抗氧化肽的最佳酶解条件为pH值8.0、酶解温度55℃、料液比1.5∶20 g/mL、加酶量(酶/底物,E/S)3.0％、酶解时间3h,酶解液对羟自由基清除率达到82.08％.酶解产物体外抗氧化活性的结果表明,酶解产物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基和过氧化氢均有较好的清除作用,还具一定的还原能力、亚铁离子螯合能力和亚油酸自氧化抑制能力.总体而言,黄缘盒龟酶解产物在不同的体外抗氧化体系中均表现出一定的抗氧化效果,具有良好的开发利用前景.     

牡蛎多糖苹果果醋的制备及其抗氧化活性研究

以苹果醋为主要原料,添加牡蛎多糖采用正交实验研制牡蛎多糖苹果果醋,并测定了牡蛎多糖苹果果醋、牡蛎多糖及苹果醋的ABTS自由基清除能力、DPPH自由基清除能力和还原能力。结果表明,牡蛎多糖苹果果醋的最佳配方为:牡蛎多糖添加量0.3%,酵母添加量0.1%,柠檬酸添加量0.1%,蜂蜜添加量10%,其感官评定得分为86.6。抗氧化测定结果表明,牡蛎多糖苹果果醋ABTS自由基清除率为95.81%,DPPH自由基清除率为95.11%,还原力为0.66,具有较强的抗氧化活性。     

耐盐红螺菌拮抗物质的分离纯化及特性分析

耐盐红螺菌的无菌代谢产物经CM—Sephadex C-50弱阳离子交换色谱柱分离,获得3个蛋白吸收峰：PSB2-1’峰,PSB2—2’峰,PSB2—3’峰。其中PSB2-1’峰对病原菌具有拮抗作用。PSB2-1’峰组分样品经透析脱盐,后进行SDS—PAGE电泳检测,其冷冻干燥样品进行毛细管电泳与MALDI—TOF质谱鉴定,结果表明PSB2-1’峰的抑菌蛋白物质已达到较高纯度,其准确分子量为9290Da。耐盐红螺菌拮抗物质具有较好的热稳定性,对紫外线不敏感,但对酸碱性较敏感;用蛋白酶处理,其抑菌活性受枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响。耐盐红螺菌产生的拮抗物质可初步归属于小分子热稳定肽(SHSP)。     

马氏珠母贝黏液糖蛋白分离纯化及其抗氧化活性研究

该研究采用直接醇沉法、盐提醇沉法和水提醇沉法提取马氏珠母贝(Pinctada martensii)黏液中的糖蛋白,优选直接醇沉法粗品(DAS),进一步采用Sephacryl S-200纯化获得直接醇沉纯化品(DAPS),同时测定DAS及DAPS的体外抗氧化活性。结果显示,DAS的糖和蛋白质得率均最高,且3种方法提取的糖蛋白粗品蛋白质组成无明显差异;DAPS的总糖和蛋白质质量分数分别为(22.72±0.26)%和(71.18±0.62)%,分子量主要集中在245kD;DAS和DAPS对羟自由基的清除能力显著,在0.8 mg·mL-1下两者对羟自由基的清除率均高于90%,对超氧阴离子自由基及DPPH自由基也有一定清除能力。研究结果可为探索马氏珠母贝黏液功效组分提供理论基础数据。     

复合酶提取牡蛎抗氧化肽的工艺研究

以牡蛎为原料,首先从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中筛选出胰蛋白酶为内切酶,以水解度为指标,得到最佳的酶解工艺条件:时间4h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％(7 500 U/g),水解度为49.50％;同时以水解度为指标,得到外切酶风味蛋白酶的最佳酶解工艺:时间5h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％ (450 U/g),实际水解度50.95％.最后,以清除羟自由基能力和水解度为指标,探讨内切酶(胰蛋白酶)和外切酶(风味蛋白酶)不同复合酶解方式的抗氧化能力.最终确定,复合酶解制备牡蛎抗氧化肽效果最好,其酶解条件为胰蛋白酶为3％(7 500 U/g)、风味蛋白酶加酶量为3％ (450 U/g),pH8.0,时间5h,料水比1∶2,温度50℃时,水解度高达53.94％,体外清除·OH的EC50为0.56 mg/mL.     

克氏原螯虾蛋白肽及其美拉德反应产物抗氧化活性的研究

以碱性蛋白酶水解克氏原螯虾副产物得到的蛋白肽为原料,与葡萄糖发生美拉德反应(Maillard reaction,MR),在单因素实验的基础上,通过正交实验优化美拉德反应,并对虾蛋白肽和最优条件下获得的美拉德产物(Maillard reaction produces,MRPs)进行抗氧化性测定。实验结果表明:虾蛋白肽美拉德反应的最佳条件是反应时间为4h,蛋白肽与葡萄糖的质量比(肽糖比)为1∶3,pH为9,最适温度为100℃制备得到的美拉德反应产物还原力达0.929,DPPH自由基清除能力为87.75%。克氏原螯虾虾壳蛋白肽美拉德反应后抗氧化活性明显的增加,还原力、羟自由基清除能力,DPPH清除能力分别为反应前的8.367倍、1.829倍和2.027倍。     

缢蛏多糖的提取及抗氧化作用研究

以新鲜缢蛏的碎肉为材料,加水配制成一定比例的匀浆,利用超声波提取法对缢蛏碎肉匀浆进行多糖的提取。利用蒽酮—硫酸法对多糖得率进行计算。将得到的多糖粗品通过DEAE离子交换层析及G-75凝胶层析进一步分离纯化。通过邻苯三酚自氧化体系和Fenton体系测定所得样品的抗氧化能力。结果表明:利用超声波提取多糖的提取率为19.93%。多糖粗品通过DEAE离子交换柱,得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为43.89%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为57.80%。峰2对超氧阴离子的清除能率为57.80%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为77.83%。将DEAE峰2进行G-75凝胶层析得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为83.08%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为94.76%。峰2对超氧阴离子的清除能率为74.41%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为52.41%。     

双螺杆挤压对低值海参多肽提取率及抗氧化活性的影响

海地瓜(Acaudina molpadioides)属低值海参产品,为了提高其使用价值,本研究以海地瓜为原料,利用双螺杆挤压辅助不同浓度亚硫酸钠(Na2SO3)处理,并对挤出物多肽提取率、游离巯基含量和蛋白质溶解度进行测定;利用DA201-C型大孔吸附树脂对挤出物多肽进行分离纯化,并对多肽纯化组分的分子量分布和抗氧化能力进行测定。结果显示,双螺杆挤压辅助3.0% Na2SO3处理组多肽提取率、游离巯基含量和蛋白质溶解度分别为(57.12±0.62)%、(110.32±0.07)%和(28.72±0.13)%,较空白对照组(control check, CK)分别显著提升(7.66±0.35)%、(105.32±0.01)%和(4.91±0.15)% (P<0.05);粗肽经纯化得到纯化组分Ⅰ(1000~3000 u)和纯化组分Ⅱ(<1000 u)。CK组、双螺杆挤压辅助3.0% Na2SO3处理组及其经分离纯化后得到的的纯化组分Ⅰ、Ⅱ海地瓜多肽的DPPH自由基清除率的IC50值分别为25.51、12.72、6.58和9.02 mg/mL,对超氧阴离子自由基清除率的IC50值分别为25.56、13.51、11.87和8.44 mg/mL。纯化组分Ⅰ在浓度为80 μg/mL时,人正常肝细胞(human normal liver cell, LO2)细胞存活率较损伤组最大提高(20.33±0.41)%;纯化组分Ⅱ在浓度为20 μg/mL时,LO2细胞存活率较损伤组最大提高(17.07±1.18)%。综上所述,双螺杆挤压辅助亚硫酸钠处理海地瓜提高了多肽的提取率,并增强了海地瓜多肽抗氧化活性。     

盐度对点篮子鱼的存活、生长及抗氧化防御系统的影响

在容积为500 L的圆锥形塑料缸中分别用对照(自然海水)、配制的盐度为20、10、5的海水和淡水(地下水)养殖点篮子鱼［(67.76?26.12) g］,研究了不同盐度对点篮子鱼存活、生长和抗氧化酶活性的影响。结果显示,淡水组第9天出现死亡,至第27天时死亡率达100%,其余各组未出现异常,死亡率为0%。各盐度组鱼的特定生长率未表现出显著性差异,但盐度10组鱼体重显著高于盐度20和盐度5组,与对照组无显著性差异;盐度5组全长显著低于其余各盐度组。驯化40 d后,对各组鱼鳃、肝脏、肾脏和肌肉中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗超氧阴离子自由基、羟自由基活性检测结果显示,除盐度5组外,盐度10、20组点篮子鱼鳃、肝脏、肾脏、肌肉中SOD、CAT、抗超氧阴离子自由基和羟自由基活性在驯化40 d后均恢复到对照组水平,组间无显著性差异;盐度5组中鱼鳃的SOD和抗超氧阴离子自由基活性显著高于盐度10和盐度20组,肝脏、肌肉和肾脏中SOD、CAT、抗超氧阴离子自由基和羟自由基活性均恢复到对照组水平。点篮子鱼不同组织中SOD和CAT酶活力在不同盐度下均以肝脏中最高,肾脏和鳃次之,肌肉中最低;抗超氧阴离子自由基活力以肝脏中最高,极显著高于其余各组织中抗超氧阴离子自由基活力(P<0.01),肌肉次之,肾脏和鳃最低;羟自由基活力以肾脏中最高,显著高于其余各组织中羟自由基活力(P<0.05);鳃次之,肝脏和肌肉中最低,结果表明盐度能影响抗氧化酶活力大小,但并未影响鱼体内酶的分布。     

鳕鱼鱼鳔抗氧化肽制备工艺研究

本研究以鳕鱼(Gadus morhua)鱼鳔为原料,选用6种不同蛋白酶对其进行酶解,通过比较酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除能力,筛选出最佳蛋白酶为复合蛋白酶。通过单因素实验与响应面优化实验,确定最佳提取工艺：酶解时间为6 h、pH为7.21、温度为58.56℃、酶添加量为200 U/ml。研究结果显示,DPPH自由基清除率为61.1%,与理论值62.0%接近。鳕鱼鱼鳔肽体外清除自由基能力实验发现,酶解产物对羟基自由基与超氧阴离子自由基具有一定的清除能力,同时,具有较好的亚铁离子螯合能力。体外模拟胃肠消化后多肽的抗氧化活性变化,结果显示,体外模拟消化产物水解度有增加,对自由基的清除能力与亚铁离子螯合能力有一定的下降,其可能原因为,经模拟胃肠消化后多肽的结构发生一定的变化,导致了抗氧化活性的变化。     

酶水解美洲帘蛤蛋白质及产物抗氧化活性初探

采用二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基法和改进的邻苯三酚法检测了胃蛋白酶对美洲帘蛤的水解作用及其水解液的抗氧化活性,探讨了酶质量分数、底物质量分数、pH、水解时间、温度对美洲帘蛤蛋白质水解度的影响.试验结果表明,酶质量分数为5%,底物质量分数为10%.pH 1.0,酶解3 h.温度为50℃时可以获得较高的水解度,同时水解液对超氧阴离子自由基和DPPH自由基有较高的清除率.