鸭源巴氏杆菌-大肠埃希菌二联多价蜂胶灭活疫苗的制备与免疫效果试验

本研究选取鸭致病性大肠埃希菌（E．coli）常见血清型O1、O2、O18、O78和3株分离自发病鸭场、毒力强、免疫原性好的巴氏杆菌（Pasteurella multocida,P砌）D22、D23、D157作为制苗菌株,分别以鲜血琼脂和马丁琼脂进行固体表面培养制备的抗原与蜂胶佐剂高速乳化,制备鸭多杀性巴氏杆菌-大肠埃希菌二联多价蜂胶灭活疫苗。结果表明,疫苗安全可靠,雏鸭一免后第14天对同源E．coli、Pm攻击免疫保护率为100％和90％;雏鸭二次免疫后第14天的免疫保护率均为100％。用间接ELISA对免疫鸭进行抗体消长规律检测,7日龄商品麻鸭首免后20d抗体达到高峰,抗体维持时间在54d以上;首免7d后进行二免,可产生显著高于一免的抗体水平。疫苗免疫雏鸭能够显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）地增强T细胞的免疫力,可维持3周左右。疫苗在4℃可保存12个月以上。     

Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌三种佐剂灭活疫苗研制及免疫效果比较

本研究采用从武汉地区分离的Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌,分别研制了油乳剂、蜂胶及黄芪多糖灭活疫苗,并从安全、效果等方面对这三种疫苗进行了比较.结果表明,三种疫苗的最佳免疫剂量分别为0.3、0.5、0.3mL/只;攻毒平均保护率为92%、84%、96%;免疫后3～21 d,三种疫苗产生的特异性抗体效价均逐步升高,免疫后10d抗体效价均显著高于免疫后7d(P<0.01),并且此时APS苗的血清抗体水平显著高于蜂胶苗(P<0.05).三种疫苗均具有良好的安全性和免疫原性,其中黄芪多糖灭活苗的效果较为突出.     

鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌二联自场疫苗的研制

本试验将从山东省临朐、新泰、高唐、微山、禹城、博兴等地的40多个不同鸭场分离到的鸭疫里默氏杆菌RA10型LQ09、RA1型YC11和鸭大肠杆菌优势血清型菌株O₇₈型LQ06、O₉₂型BX02作为菌种,采用液体培养工艺进行增菌后,制备鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌的二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗经无菌和安全检验合格后,进行免疫原性研究。结果表明,对3日龄肉鸭雏鸭颈部皮下注射0.3 mL/羽即可产生良好的免疫应答,免疫后10日龄用同源菌株攻击保护率可达70%,17日龄达80%,24日龄至出栏达100%;对7日龄肉鸭雏鸭颈部皮下注射0.5 mL/羽即可产生良好的免疫应答,免疫后14日龄用同源菌株攻击保护率可达80%,21日龄直至出栏达100%;该疫苗经田间试验,效果良好。     

禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗的研究

为研制绿色环保型的禽霍乱与大肠杆菌病多价二联灭活疫苗,本研究以禽多杀性巴氏杆菌强毒株G48-1、G48-2和禽致病性大肠杆菌常见血清型01/0154、02/086、078、018、08/093等为制苗菌株,分别以改良马丁琼脂和马丁肉汤进行固体表面培养和高密度发酵培养制备抗原,将灭活的抗原铺以具有广谱生物学活性的天然物质-蜂胶为免疫增强剂,已拥有完全自主知识产权的纳米蜂胶疫苗制造工艺技术平台制备禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗.试验结果表明,疫苗安全可靠,无明显的干扰现象,免疫后5～7 d产生坚强保护力,对禽霍乱和鸡大肠杆菌病的近期保护率均为100%.以实验动物小鼠代替本动物进行二联疫苗效检取得成功,本效检方法可缩短检验期限7 d,降低检验成本,具有更敏感、更特异、更客观、更简便等特点.禽霍乱采用攻毒法,大肠杆菌采用改良微量凝集试验测定抗体效价法测定禽-大二联疫苗的免疫期与保存期.结果表明,该疫苗的免疫期为6个月以上,-10℃保存期为18个月;4℃～8℃为12个月;15℃～30℃为6个月.田间免疫试验表明,疫苗安全可靠,现场应用已逾2亿羽份,效果良好.     

四川和重庆地区鸭源沙门氏菌分离鉴定及血清型分析

为了解四川和重庆地区规模化种鸭场鸭源沙门氏菌流行情况,本研究从四川和重庆地区规模化种鸭场采集病料样品366份,分离出163株鸭源沙门氏菌。血清型鉴定结果显示163株沙门氏菌中有96株能够确定血清型,分属A、B、C1、C2、D及F共6个血清群;另有67株属于粗糙型菌落未能分型。优势菌株为伊鲁木沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌及奥雷宁堡沙门氏菌。其次为习志野沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、奥斯陆沙门氏菌、姆卡巴沙门氏菌及昌丹斯沙门氏菌。采用已确定血清型的7株鸭源沙门氏菌人工感染实验雏鸭,结果显示7株鸭源沙门氏菌均具有致病性,死亡率为20%~100%,平均死亡率77.14%。本研究为进一步研究鸭源沙门氏菌流行情况和血清型分布情况提供参考。     

家禽主要疫病免疫技术(三)

大肠杆菌病目前只有大肠杆菌灭活疫苗。最好应用标准株加现地株的“现地自家多价灭活疫苗”,并且注意随时跟踪现地致病菌株的动态变化以便适时针锋相对,保证疫苗的“动态对型”预防。疫苗种类依佐剂的不同大体分为四类:铝胶佐剂灭活疫苗、蜂胶佐剂灭活疫苗、蜂胶中草药佐剂灭活疫苗、油佐剂灭活疫苗,以后二者效果最好。一般七日龄以上鸡均可应用,皮下或肌肉注射。禽霍乱分为灭活疫苗与弱毒活菌苗两大类,还有联苗和亚单位疫苗。1.灭活疫苗:共有“铝胶、油乳剂、蜂胶”3种佐剂类型,以蜂胶佐剂灭活苗保护率最高(80%以上)、免疫期最长(半年);铝…     

疫苗免疫剂量及次数对鸭病毒性肝炎母源抗体的影响

为了解疫苗免疫剂量及次数对鸭病毒性肝炎(DVH)母源抗体的影响,将2月龄体质量均等的枫叶种鸭120只平均分为3组(A1、A2、A3)。A1组在留种蛋前3周免疫DVH弱毒苗(CH60株)0.5 mL/只,A2组在留种蛋前5周和3周各免疫0.5 mL/只,A3组在留种蛋前5周和3周分别免疫0.5 mL/只和1 mL/只。雏鸭孵出后,用ELISA方法检测1日龄雏鸭的抗体效价,并进行攻毒保护试验。结果显示,A1、A2、A3组种鸭免疫后收获的第1周种蛋孵出的雏鸭(B1、B2、B3)抗体效价分别为0.52～0.57、0.54～0.59、0.56～0.63,雏鸭攻毒保护率分别为73.3%～93.3%、86.7%～100%、90%～100%;免疫后收获的第4周种蛋孵出的雏鸭(C1、C2、C3)抗体效价分别为0.40～0.46、0.42～0.47、0.45～0.50,雏鸭攻毒保护率分别为40.0%～56.7%、50.0%～60.0%、56.7%～70.0%。结果表明:种鸭DVH疫苗的免疫次数和剂量,均可影响雏鸭体内抗体水平的高低,进而直接对雏鸭保护力产生影响;母源抗体会随着种鸭免疫时间延长逐渐减少,从而降低对雏鸭的保护力;对种鸭免疫DVH弱毒苗(CH60株)能够对孵出的雏鸭提供较高的母源抗体。本研究为通过种鸭免疫来预防雏鸭DVH发生提供了数据支撑。     

雏鸭病毒性肝炎蜂胶灭活苗研究初报

用上海地区的雏鸭病毒性肝炎病毒Ⅰ型株,以蜂胶为佐剂,制备雏鸭病毒性肝炎蜂胶灭活苗,经实验室和现场初步试验,显示对雏鸭具有良好的安全性和免疫原性。每羽接种０．５ｍｌ,７ｄ后攻毒的总保护率为８５．７０％,保护指数为８２．１０％。     

A:L1型鸭源多杀性巴氏杆菌灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】制备鸭多杀性巴氏杆菌灭活疫苗,有效控制贵州省鸭多杀性巴氏杆菌发生和流行。【方法】以实验室分离保存的A：L1型多杀性巴氏杆菌地方流行株为菌种,通过涂板法测定该菌株生长曲线,并采用改良寇氏法计算该菌株对鸭的半数致死量（median lethal dose,LD₅₀）,将该菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后分别制备白油佐剂灭活疫苗和卡波姆佐剂灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行免疫雏鸭试验;通过攻毒保护试验评价比较两种疫苗的保护率,并对攻毒试验鸭肝脏、肺脏、脾脏进行病理组织学观察。【结果】A：L1型多杀性巴氏杆菌疫苗株培养至18 h到达峰值,活菌数可达1.0×10¹⁰ CFU/mL;LD₅₀为5 CFU;制备的两种疫苗安全性良好;攻毒保护试验结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗免疫保护率可达62.5%,高于白油佐剂灭活疫苗（50.0%）及商品灭活疫苗（50.0%）。二免后卡波姆佐剂灭活疫苗优势更为明显,免疫保护率可达87.5%,高于白油佐剂灭活疫苗（75.0%）及商品灭活疫苗（62.5%）。病理组织学结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗能对肺脏提供较好的保护效果,二免后在肝脏、肺脏和脾脏的保护效果上,卡波姆佐剂灭活疫苗组优势明显。【结论】利用贵州地区流行的A：L1型菌株所制备的卡波姆佐剂灭活疫苗免疫效果明显,能对贵州地区多杀性巴氏杆菌病的防控起到重要作用。     

鸭传染性浆膜炎灭活疫苗比较研究

将重庆地区分离鉴定的2株鸭疫里氏杆菌培养、灭活、加入佐剂制成蜂胶、氢氧化铝和油乳剂灭活疫苗，分别免疫5日龄雏鸭，结果表明疫苗是安全的，经一次免疫后10天的保护率分别是70%、50%、75%，15天后的免疫保护率分别是80%、75%、100%；经2次免疫后7天的保护率分别是100%、100%、89%，10天后的保护率均达到100%。     

鸭疫里默氏杆菌（10型）灭活疫苗的研制

以10型鸭疫里默氏杆菌GN52株为菌种,采用改进的液体培养工艺进行增菌后,制备油乳剂灭活疫苗,经无菌和安全检验合格后,进行免疫原性研究。结果表明,对3日龄雏鸭颈部皮下注射0.3 ml/羽即可产生良好的免疫应答,免疫后7 d用同源菌株攻击保护率可达70%,14 d达100%,至56 d免疫保护率仍可达80%。于10日龄进行第2次免疫,二免后3 d免疫保护率达100%。疫苗免疫雏鸭后能够显著（P〈0.05）或极显著（P〈0.01）地增强其T细胞的免疫力,时间达2周。疫苗在4-8℃可保存1年,保存6个月和1年的保护率分别达95%和85%。该疫苗经田间试验,效果良好。     

肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶苗的研制

从分离鉴定的49株大肠杆菌中筛选出5株致病力强、免疫原性好、具有优势血清型的大肠杆菌作为制苗菌株，经培养灭活后，以蜂胶为佐剂，研制出的肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶疫苗，使用安全，免疫效果好。用该苗免疫后150d的保护率为100％，无不良反应。该苗4C下保存1年不失效。田间试验结果表明，该苗性能好，免疫后对肉仔鸡、肉种鸡的生产性能无不良影响，鸡群大肠杆菌病的死亡率明显下降。     

猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗免疫抗体水平分析

为评估猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性,用商品化的乙型脑炎鼠脑疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗(SA14-14-2株)以及自制乙型脑炎细胞灭活疫苗(HW1株)分别免疫仔猪,通过抗体水平监测试验、中和抗体试验、小鼠攻毒保护试验分别检测了其特异性抗体消长情况、中和抗体效价产生情况及疫苗对小鼠的攻毒保护率。结果显示,3种疫苗均能产生中和抗体,乙型脑炎细胞灭活疫苗免疫组中和抗体水平要高于鼠脑疫苗和弱毒疫苗免疫组,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组对小鼠的攻毒保护率高于鼠脑疫苗免疫组,但两者之间差异不显著。抗体消长情况显示,至8周观测期结束,鼠脑疫苗免疫组的抗体阳性率为80%,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组抗体阳性率为100%。结果表明猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性优于鼠脑灭活疫苗和弱毒疫苗。     

大足区万古镇鸭源大肠杆菌分离鉴定与药敏试验

大足区万古镇是养鸭大镇,是万古镇的支柱产业之一.据万古镇畜牧兽医站统计,万古镇鸭年出栏量约为9万只.而鸭大肠杆菌病患病率最为普遍,其中雏鸭和种鸭发病较多,尤其在肉用商品鸭中发病率和死亡率较高,直接影响养鸭业的经济效益,给养鸭户带来较大经济损失.目前采取的防治措施有疫苗和抗生素.笔者通过对2014年和2015万古镇赵学六等养鸭场鸭源大肠杆菌流行菌株的分离,对其进行鉴定和药敏试验,为万古镇鸭大肠杆菌病的临床治疗筛选出有效药物.     

鸭源大肠杆菌O_(78)菌蜕的制备及免疫原性研究

为制备大肠杆菌(E.coli)菌蜕并研究其免疫原性,本研究将带有裂解基因E的质粒pHH43转化致病性鸭源E.coli O78,构建获得E.coli O78/pHH43重组菌。于不同培养温度下研究重组菌E裂解蛋白表达所介导的宿主菌的裂解情况,结果显示在42℃培养时最佳诱导时间为4h,约90%的重组菌被裂解失活,以冻干法及添加庆大霉素完全灭活未裂解的细菌后制备"菌蜕疫苗"。雏鸭免疫试验表明,接种E.coli O78/pHH43菌蜕两周后免疫雏鸭可产生对同源强毒菌株致死剂量攻击的免疫保护。比较E.coli O78/pHH43菌蜕与甲醛灭活的同株E.coli所诱导的免疫保护效果,结果免疫保护率分别为87.5%和75%,表明菌蜕比甲醛灭活法能更有效地诱导机体的特异性免疫应答。     

鸭疫巴氏杆菌与大肠杆菌二联苗研究

用临床分离到的鸭疫巴氏杆菌与大肠杆菌制成二联灭活苗，并加入免疫调节剂左旋咪唑。经实验室与野外扩大试验证实，该疫苗具有确实的预防效果，在免疫１０天后，雏鸭即可产生坚强的免疫力，攻毒保护率达１００％，野外试验可明显降低鸭疫苗杆菌与大肠杆菌感染造成的死亡。     

鸭源大肠杆菌的分离鉴定及致病性分析

【目的】 了解江苏、江西、安徽地区鸭源大肠杆菌的分布以及致病性情况。【方法】 本研究对江苏、江西、安徽地区的病死鸭进行了鸭源大肠杆菌的分离鉴定,运用PCR结合玻片凝集法测定鸭源大肠杆菌分离株的血清型,并进行了18种毒力基因的PCR检测,随后进行雏鸭致病性试验,并对毒力较强和毒力较弱的菌株进行生长曲线以及半数致死量(LD₅₀)测定。【结果】 本研究共分离鉴定获得鸭源大肠杆菌74株,鉴定为O1、O2、O18、O78血清型的分别有1、2、2和4株,其余均未定型;18种毒力基因鉴定结果表明,ibeB、yijp、OmpA和mat基因检出率分别为97.3%、97.3%、95.95%和90.54%。动物致病性试验结果表明,经10⁷ CFU/只攻毒后,74株分离株均引起雏鸭不同程度发病,但仅有2株对雏鸭致死率≥50%。生长曲线测定结果表明,2株强毒株与2株弱毒株的生长速度无显著差异(P>0.05),2株强毒株的LD₅₀分别为10^4.75和10^7.375 CFU。【结论】 本研究分离的74株鸭源大肠杆菌O1、O2、O18和O78型仅占12.16%,毒力基因谱分布广泛,但仅有2株毒力较强,该研究为鸭源大肠杆菌病的预防控制以及研究血清型、毒力基因与致病性之间的相互关系奠定基础。     

ND—EDS鸭源二联油乳剂灭活苗的研制

以鸭源NDV和EDSV适应株同时接种鸭胚,收获48一120小时鸭胚尿囊液,测其NDV和EDSV的HA价后,制成二联油乳剂灭活苗,免疫130日龄蛋鸡,免疫后30天HI抗体达到高峰,免疫后180天ND—HI抗体≥8log_2,EDS—HI抗体≥6.5log_2,与进口和国产二联苗比较抗体水平相近,P>0.05无显著差异,疫苗保存6—9个月不影响免疫效果。     

鸭疫里默氏菌的分离鉴定及免疫原性

自西安某鸭场病鸭中分离到 1株菌 ,经染色镜检、分离培养、生化试验、动物回归试验 ,鉴定为鸭疫里默氏菌 ;用分离菌株制作成油佐剂灭活疫苗 ,免疫 10日龄雏鸭 ,于免疫后 30 d用同源菌攻击 ,保护率为 83%(5 / 6 ) ,结果表明 ,本菌具有良好的免疫原性。     

鸭源抗鹅细小病毒卵黄抗体的制备

利用GPV 98E株胚毒免疫产蛋鸭,收集高免鸭蛋,分离卵黄,经水稀释法去脂粗提,硫酸钠盐析获得纯化的鸭源抗鹅细小病毒卵黄抗体,测定其琼脂双扩散效价、含量和回收率;利用低日龄无母源抗体易感雏鹅检测其预防和治疗效果。结果表明:经GPV 98E株胚毒免疫的鸭可以很快产生高水平的特异性抗体,纯化的卵黄抗体琼扩效价为1∶32,含量为81.6%,总蛋白回收率为6.01mg/mL。在预防试验中,雏鹅的死亡率为0,在治疗试验中,使用一次预防试验用的剂量治疗发病雏鹅,其死亡率为59%,经二项分布显著性检验,鸭源抗GPV卵黄抗体对鹅细小病毒感染有极显著的预防和治疗效果。