猪圆环病毒1型ORF2基因的改造及其在大肠杆菌中的表达

根据GenBank中猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因序列,设计合成了一对引物,对PCV1ORF2基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF2基因(702bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒命名为pMD-ORF2。由于ORF2前面有120多个信号肽和序列中有大量的稀有密码子,所以将ORF2进行改造并将改造的ORF2双酶切产物插入原核表达载体pET-32α与pET-41α,得到重组子命名为pET-ORF2-1与pET-ORF2-2。用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Westernblot分析,结果表明PCV1-ORF2在pET-32α和pET-41α中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为30Kda和45Kda。     

猪维生素、矿物质缺乏症的病因分析

随着养猪业的不断发展，营养代谢病已成为不可忽视问题，其直接或间接给养猪业带来的损失是巨大的。本文主要就维生素、矿物质缺乏症的发生原因作些简要概述，以便在实际工作中力求采取有效的预防措施。１饲料因素１．１品种单一猪的生长发育过程中需要大量的营养物质，其中所需的维生素及矿物质就各有１０种之多，单一化的饲料不能保证各种营养物质都能满足机体需要。玉米中叶酸、烟酸、泛酸、胆碱等成分贫乏；植物性饲料中几乎不含VB１２；长期单一饲喂稻谷可导致维生素缺乏等。在实际工作中要注意饲料的配合，以保证其生长发育所需的营…     

猪圆环病毒2型Rep、Cap蛋白基因串联重组腺病毒的构建及其免疫效果研究

采用PCR方法克隆猪圆环病毒2型(PCV2)Rep和Cap蛋白基因,以串联的方式依次克隆到pMD18-T载体中.经鉴定后亚克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV.重组穿梭质粒用Pme Ⅰ线性化后与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183株内进行同源重组产生重组腺病毒质粒.将重组腺病毒质粒用Pac Ⅰ线性化后转染293细胞中包装成为完整的腺病毒.将构建的重组腺病毒按照每100μL 1×107蚀宽单位(PFU)滴鼻2次免疫6～8周龄BALB/c小鼠,经尾部采血获得一免、二免血清.用ELISA方法检测结果表明,该重组腺病毒可以诱导机体产生针对PCV2的特异性抗体,可作为候选基因工程疫苗进行本体动物免疫试验研究.     

猪IgG1-Fc与圆环病毒3型Cap融合基因的原核表达与分析

为了探索猪Ig G1-Fc(pIgG1-Fc)与猪圆环病毒3型(PCV-3) Cap融合基因在大肠杆菌中的表达效果,试验采用PCR方法扩增pIgG1-Fc-Cap136～645融合基因,通过PCR和双酶切技术鉴定重组质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc-Cap136～645,使用SDS-PAGE和Western-blot方法对该重组质粒进行原核表达与鉴定,并进行可溶性分析。结果表明:PCR扩增得到pIgG1-Fc-Cap136～645融合基因,大小为1 221 bp,共编码407个氨基酸,并成功构建重组质粒pET30a(+)-p IgG1-Fc-Cap136～645;该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中获得表达,表达的融合蛋白分子质量约为53. 0 ku,在25℃、IPTG终浓度为0. 5 mmol/L、诱导8小时时,重组蛋白pIgG1-Fc-Cap136～645的表达量最高,且主要以包涵体形式表达。     

肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶苗的研制

从分离鉴定的49株大肠杆菌中筛选出5株致病力强、免疫原性好、具有优势血清型的大肠杆菌作为制苗菌株，经培养灭活后，以蜂胶为佐剂，研制出的肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶疫苗，使用安全，免疫效果好。用该苗免疫后150d的保护率为100％，无不良反应。该苗4C下保存1年不失效。田间试验结果表明，该苗性能好，免疫后对肉仔鸡、肉种鸡的生产性能无不良影响，鸡群大肠杆菌病的死亡率明显下降。     

许昌地区鸡大肠杆菌分离鉴定和某些生物学特性研究

在许昌地区10个鸡群中,无菌采集临床上疑似大肠杆菌病的18只病死鸡的心、肝。经接种培养、细菌镜检、生化试验、动物试验,共分离出大肠杆菌15株,其中有13株能使雏鸡发病死亡,但各菌株之间毒力存在明显差异;药敏试验表明:多数大肠杆菌对环丙沙星、氧氟沙星、氯霉素、壮观霉素、庆大霉素敏感;经O因子血清试验发现,其中有10株为O78,1株为O54,1株为O5,1株暂未定型。     

猪圆环病毒2型Cap蛋白重组腺病毒的构建及表达

根据PCV2Cap蛋白基因的序列设计引物,从1份患PMWS仔猪组织病料中扩增出Cap蛋白基因（702bp）。并利用基因工程技术将Cap蛋白基因克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,将其与腺病毒骨架载体（pAdeasy-1）共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组后转染293细胞,在293细胞内包装出重组腺病毒。通过免疫荧光、PCR和Westernblot检测证明PCV2Cap蛋白基因在293细胞内获得表达。     

猪圆环病毒Ⅰ型荧光定量PCR检测方法的建立

以定量的10倍系列稀释的质量pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了PCV1检测的荧光定量PCR方法.结果表明该方法检测灵敏度可达1.0×104拷贝/μL,线性范围为1010～101;对起始浓度为1.0X107、1.0×106、1.0×106拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758%、1.865%和3.836%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nPCR)具有相近的灵敏度.     

猪呼吸道病的综合控制

1引起呼吸道病的常见因素1.1环境因素1.1.1灰尘:能携带病原微生物进入呼吸道内,覆盖在呼吸道表面,使呼吸道粘膜的防御系统受到干扰,导致呼吸道感染,引起呼吸道发病。此外,多尘的环境还可以加重肺的负担,影响其清除功能。我们认为饲喂干粉料的猪场呼吸道发病率较高与此有关。1.1.2有害气体:主要是NH3和H2S,对粘膜纤毛的清洁功能和肺泡巨噬细胞有毒害作用。1.1.3密度:可增加有害气体含量及群体应激,使呼吸道发病率提高。1.1.4温度、湿度及通风:尤其在高温、高湿及通风不良的情况下,可引起空气中灰尘和微生物及有害气体含量增加,降低呼吸道的…     

动物遗传学教学实践中如何贯彻工程教育专业认证理念

为了提高动物遗传学教学质量,把工程教育专业认证理念引入动物遗传学教学实践中,按照动物医学专业人才培养目标和毕业要求,确立动物遗传学的课程地位和课程教学目标,合理安排教学内容和考核知识点,并协调二者的结构比例,使动物遗传学教学目的更明确,教学内容与考核内容对动物医学专业培养目标形成良好支撑。