龙眼裳卷蛾微孢子虫对家蚕致病性研究(续报)

<正> 龙眼裳卷蛾(Cerace Stipatana Wa-lkar)体内寄生的微孢子虫,经1985年春、夏、秋三季养蚕添食接种试验鉴定能感染家蚕,对该病原孢子的大小、形状,用电镜扫描与家蚕微粒子孢子作了比较。1986年对龙眼裳卷蛾微孢子虫感染家蚕后出现的病     

家蚕分离的微孢子虫Vairimorphasp.MG_4的研究

从家蚕分离到一种小型微孢子虫 (MG4 )。MG4 孢子大小为 2 72± 0 1 2 μm× 1 98±0 2 2 μm ;孢子具单核、双核 2种类型 ,极丝在 6～ 9圈之间 ;在家蚕体内以 2种不同的生活史发育 ,发育过程符合变态孢虫属Vairimorpha微孢子虫发育特征 ;对家蚕有弱的食下传染能力 ,主要寄生在后部中肠的气管丛 ;感染家蚕后未见胚种传染     

食盐治疗鲤亲鱼混合感染肤孢虫和鲤鳍子宫线虫病

鲤鳍子宫线虫又叫“红线虫”，寄生于鱼类鳍上鳞下。大量寄生，亲鱼不能产卵。严重感染可引起夏花鱼种死亡。野鲤肤孢虫，寄生于鳃上鳞下，破坏鳃组织和表皮组织，引起发炎腐烂，重者死亡。渔业生产中，二者混合感染危害严重。据资料介绍，治疗肤孢虫，可用敌百虫。姜礼燔报道可用“应氏灭孢灵”治疗。1990年，我站流水养鱼池中暂养的鲤亲鱼20组4D尾同时感染肤抱虫鲤鳍子宫线虫，用食盐水浸泡治疗，收到较好效果。现介绍如下。1发病情况及诊断lop年4月侨日，我站流水养鱼池暂养的鲤亲鱼，消瘦发黑，鳞片隆起，遂逐尾检查发现：有的鳞片呈红…     

斯氏艾美耳球虫阿拉尔株致病性和免疫原性分析

对分离自阿拉尔的1株斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai)进行了致病性与免疫原性分析。试验共分5组,4个试验组每只兔分别口服感染1.0×103,5.0×103,5.0×104和1.5×105个孢子化卵囊;感染后14 d对1.0×103和5.0×103剂量组的剩余兔以2.5×105个孢子化卵囊攻毒,用0～5分肝脏平均病变记分、肝重指数和每克粪便的平均虫卵数(OPG)测定致病性及其免疫原性。结果显示:低剂量感染可引起轻微病变,5.0×104个孢子化卵囊感染即可表现出明显的致病作用,但免疫原性试验表明其免疫原性较弱。     

从家蚕和龙眼裳卷蛾分离到的微孢子虫的荧光抗体法识别

本研究应用间接荧光抗体检验技术识别微孢子虫。对种茧养蚕分离的微孢子虫(NIS—741,NIS—3922,NIS—388,NIS—2624,NIS—4141)与Nosema,bombycis进行了血清学性状的比较,且对危害家蚕的龙眼裳卷蛾微孢子虫进行了荧光抗体的鉴定观察。实验表明:从家蚕分离的不同形态差异的微孢子虫分离株与家蚕微粒子(N.bombycis)孢子虫具有相同的抗原性;对龙眼裳卷蛾微孢子虫的荧光抗体观察没有看到特异性荧光,不能判断龙眼裳卷蛾微孢子虫与N.bombycis具有相同的表面抗原。另一方面,对微孢子虫的发育前期裂殖体和孢子体的荧光抗体法观察表明:从染病组织中能够识别出裂殖体和孢子体,但要区别N.bombycis的裂殖体和龙眼裳卷蛾微孢子虫的裂殖体则比较困难,对此尚待于进一步研究。     

家蚕病原性微孢子虫SCM_8的研究

家蚕病原性微孢子虫SCM8的生活史单型 ,所有时期核不成对 ,发育周期为 9～ 10d。蚕体内发育的裂殖体生殖呈带状分裂 ,以多分裂的方式进行增殖 ,裂殖体近椭圆形 ,外被寄主细胞的内质网膜 ;母孢子以出芽方式进行原生质团的分割 ,形成多个单核孢子母细胞 ,孢子成熟不同步 ,孢囊内有几个至数十个孢子不等 ;SCM8孢子单核 ,卵圆形 ,大小介于SCM7(Endoreticulatusbombycis)和家蚕微孢子 (Nosemabombycis)之间 ,并随继代数的增加而趋小 ,到第 3代时大小稳定 ,与SCM7相近 ;成熟孢子的极膜层前部结构致密 ,后部结构相对疏松 ;孢子的极丝单列 ,9～ 10圈 ,极丝倾角为 4 2° ;后极泡圆形 ,较大。SCM8仅感染寄生家蚕的中肠上皮组织 ,具食下传染、无胚种传染能力 ,致病力较弱 ,感染中量 (IC50 )为 1 2 9× 10 5,病程 12d以上。SCM8的分类地位为微孢子虫门 ,单倍期纲 ,格留目 ,科、属暂未确定。     

从蓝萤叶甲分离出的大型微粒子孢子对家蚕的病原性研究

<正> 家蚕微粒子病是蚕种及养蚕生产的一大病害,其病原是家蚕微粒子孢子,但也有一些从野外昆虫中分离得到的微粒子孢子能感染寄生家蚕。我们从四川采集来的蓝萤叶甲(俗称蓝叶虫)中分离收集到一种大型微粒子孢子(以下简称蓝叶虫微粒子),其检出率为42/57。这种微粒子孢子形态为长卵圆形,大小为4.6—5.2×2.6 3.3μm,比较整齐,其间也有少数大型孢子(6.7×3.6μm)。在光学显微镜下观察,该孢子表面光滑,呈淡绿色,其析光性比家蚕微粒子孢子更强。我们将这种微粒子孢子纯化后作了对家蚕病原性等方面的试验,现将结果报告如下。     

鹅球虫Eimeria fulva的生活史及其感染引起的组织病理变化观察

12只10日龄雏鹅分别接种7.0×105~1.5×106个孢子化E im eria fu lva卵囊,在接种后24~264 h分期扑杀,对E.fu lva的生活史及其感染引起的组织病理变化进行了动态性观察。在内生性发育过程中,E.fu lva至少有2个世代的裂殖生殖阶段,每个成熟的裂殖体含15个左右的裂殖子。接种后168 h左右,虫体进入配子生殖阶段。感染后7.5 d始有卵囊排出,显露期为2.5 d。25℃下卵囊孢子化时间为60~84 h。E.fu lva可寄生于整个肠道和泄殖腔的绒毛上皮、肠腺和固有膜中,引起上皮坏死、脱落以及肠壁水肿、出血和炎性细胞浸润等。病变以空肠和回肠较为严重。感染鹅严重腹泻,但不会发生死亡。研究结果表明,E.fu lva对雏鹅具有中等程度的致病性。     

球虫和其他原虫

正1球虫目(猪等孢球虫和艾美尔属球虫)球虫(Coccidia)是专性细胞内寄生的寄生性原虫,其中艾美尔球虫属(Eimeria)、等孢球虫属(Isospora)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、弓形体属(Toxoplasma)和住肉孢子属(Sarcocystis)是哺乳动物和鸟类的重要寄生原虫。家畜可感染多种球虫,但是通常仅有几种球虫对某一特定宿主是致病性的。目前,可以有效感染猪的肠道球虫种数尚不得而知,因为仅了解大多数球虫的孢子化卵囊阶段。Levine     

应用荧光染色剂Fluorescent Brightener 28和Propidium Iodide染色识别家蚕微孢子虫

家蚕微粒子病被列为蚕种生产的唯一法定检疫对象,母蛾镜检家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)是主要的检疫方法,但其准确性受到多种因素影响。为探究应用荧光增白剂28(Fluorescent Brightener 28,FB28)和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色识别Nb孢子的可行性,以感染Nb的家蚕幼虫中肠、蚕卵、母蛾、蚁蚕为材料,联合应用以上2种荧光染色剂进行Nb孢子检测效果试验。在荧光显微镜下可见成熟的Nb孢子被FB28染成蓝色且细胞核被PI染成红色,而未成熟的孢子只能被PI染色。采用2种荧光染色剂染色,在被感染的幼虫中肠、蚕卵、母蛾、蚁蚕中都能够检测到Nb孢子,并且带毒母蛾研磨液样品稀释1 000倍依然可以检测到Nb孢子。幼虫中肠感染后1~2 d很难观察到Nb孢子,感染后3 d可以观察到局部存在少量未成熟的Nb,感染后4 d开始局部出现成熟的Nb,至感染后5~6 d可见组织中大面积分布有成熟孢子和未成熟孢子。荧光显微镜下观察被染色的Nb孢子的细胞核明显小于幼虫中肠细胞核,且亮度明显较强,卵壳、母蛾、蚁蚕表面的几丁质碎片形状与Nb孢子明显不同,并且不能被PI染色。试验结果表明,该染色检测方法可以排除蚕体组织细胞、几丁质碎片的干扰,提高对Nb检测的准确度,并且在Nb浓度较低的情况下,可以提高检测的灵敏度。     

从东方粉蝶分离的一种变态微孢子虫的研究

从东方粉蝶成虫体中分离到一种微孢子虫 (M Pc1) ,其孢子大小为 3 2 7± 0 36 μm× 1 6 8± 0 16 μm ,孢子具单、双核两种类型 ,在家蚕体内可见到Nosema和Thelohania两种不同类型的发育过程 ,认为M Pc1应归入Vairi morpha属。这种微孢子虫对家蚕具有很强的食下感染能力 ,并有弱的胚种感染率     

一株家蚕病原性微孢子虫的生物学特性与分子系统发育分析

从家蚕体内分离得到一株新的病原性微孢子虫,编号为GXM1。光学显微镜下观察GXM1微孢子虫为长卵圆形,大小(1.85±0.15)μm×(4.19±0.18)μm,在生活史的各发育阶段均为双核,以二分裂方式增殖,发育速度缓慢,发育周期约8～10 d。GXM1微孢子虫与家蚕微孢子虫(Nb)的抗血清产生阳性凝聚反应。利用透射电子显微镜观察到GXM1微孢子虫的超微结构具双核,极丝11～12圈,极丝倾斜角约45°。以上生物学性状显示GXM1微孢子虫具有微孢子虫属(Nosema)的基本分类特征。依据GXM1微孢子虫与其它昆虫微孢子虫的SSU rRNA基因序列构建的系统发育树,以及序列相似性和遗传距离分析,进一步证实GXM1微孢子虫属于Nosema属。GXM1微孢子虫对蚁蚕的半数感染浓度(IC50)为6.06×105mL-1,对家蚕的胚种传染率可达23.28%,是一株具有较强致病性和危害性的家蚕病原性微孢子虫。     

从家蚕蛾中分离的微孢子虫MZ_1(Nosema sp.)对家蚕的病原性研究

从养蚕生产的蚕蛾中分离到一种小型微孢子虫 ,暂名MZ1,其形状为卵圆形 ,大小为 2 49± 0 10 μm×1 32± 0 12 μm。寄生家蚕的大多数组织器官 ,在蚕体内的生殖发育圈与N .bombycis相似。对家蚕的致病力弱 ,ID50为每条蚕 172 5 0粒孢子 ,能在蚕体内经胚种传染给下一代。MZ1具有Nosema属的分类特征 ,初步定为Nosemasp .。     

蝇蛆寄生对家蚕血细胞和酚氧化酶活性的影响

为了探明蝇蛆寄生对家蚕免疫因子的影响,对家蚕追寄蝇(Exorista sorbillansW iedem ann)幼虫寄生的5龄家蚕血淋巴中血细胞数量的变化以及血淋巴酚氧化酶活性的变化进行了研究。结果表明:蝇蛆寄生家蚕后,家蚕血淋巴中颗粒细胞和浆细胞的数量急剧上升,在寄生后16~24 h,蝇蛆蚕血淋巴颗粒细胞和浆细胞数达到6.81×106/mL,比对照增加了4.76×106/mL;蝇蛆寄生导致血淋巴黑化反应加快,黑色素增加;蝇蛆蚕血淋巴酚氧化酶活性升高,在6 d内由7 U/mg上升到34 U/mg。     

Differences between the European carp (Cyprinus carpio carpio) and the coloured carp (Cyprinus carpio haematopterus) in susceptibility to Thelohanellus nikolskii (Myxosporea) infection

Thelohanellus nikolskii infection of the common carp (Cyprinus carpio L.) has been a common parasitosis in the Central European fish farms since the first detection of the parasite about 20 years ago. This parasite, introduced from the Far East, causes intensive infection on the fins of fingerlings of the carp subspecies cultured in Europe (European carp, Cyprinus carpio carpio). This infection of the common carp occurs in the Hungarian fish farms every year. Until the present study, this parasite had not been recorded from the fins of koi or coloured carp (Cyprinus carpio haematopterus), a carp of Far Eastern origin, which is cultured in Hungary as an ornamental fish. A recent survey conducted in common carp, koi and goldfish stocks demonstrated that T. nikolskii infection of low prevalence and intensity occurs also in koi populations, but its prevalence and intensity are markedly lower than in common carp kept in the same ponds. It is suggested that the observed differences are due to disparities in the susceptibility of the two carp subspecies to T. nikolskii, and that the koi is less susceptible to this infection. Other signs of susceptibility can also be observed in the European subspecies, since in 15% of the fish plasmodium development was arrested at an early stage. Thelohanellus nikolskii infection could not be demonstrated on goldfish (Carassius auratus).     

克蚕菌与家蚕血浆蛋白结合率的研究

用平衡透析法测定克蚕菌与家蚕血浆蛋白结合率 ,克蚕菌浓度用标准曲线法求出。克蚕菌血浆浓度在5 74～ 188.6 7μg/mL时血浆蛋白结合率为 5 3 4 0 %～ 2 9.2 8%。结合参数的最大结合力 ( β)为 5 88× 10 -6mol/g;解离常数 (Kdp)为 1 0 8× 10 -4mol/L ;结合常数 (K)为 9 82× 10 3 L/mol;结合部位 (N)为 0 9132。克蚕菌与家蚕血浆蛋白具有单一类型的结合部位 ,药物血浆浓度升高结合率下降。     

家蚕微孢子虫PCR检测的研究

根据家蚕微孢子虫（Nosemebombycis,N．b）孢子的DNA序列，设计合成一对引物，对家蚕微孢子虫孢子及其近缘种孢子的DNA进行PCR检测。结果表明只有家蚕微孢子虫孢子DNA获得特异性扩增区带，大小为317bp，可以区别于Nosemasp.MG1和MG2、柞蚕微孢子虫、Vairimorphanecatrix及Pleistophoraanguillarum等。对N.b孢子DNA检测灵敏度达1ng水平。     

Comparative susceptibility of carp fingerlings to Lernaea cyprinacea infection

Study was conducted to find out the comparative susceptibility of fingerlings of seven species of carps (Labeo fimbriatus, L. rohita, L. calbasu, Catla catla, Ctenopharyngodon idella, Cyprinus carpio and Hypophthamichthys molitrix) grown under both mono and polyculture to Lernaea cyprinacea infection. Under monoculture, C. carpio, L. rohita and L. calbasu, did not acquire Lernaea infection and were thus considered resistant, whereas C. idella, H. molitrix, C. catla and L. fimbriatus were susceptible. Even challenge with higher infective doses of copepodids under monoculture did not result in infection in the resistant fish species. The resistance of L. rohita and C. carpio to Lernaea infection under monoculture was not sustained when these two fish species were maintained in polyculture along with susceptible fish species. Labeo calbasu, even under polyculture, however, did not acquire Lernaea infection indicating that this fish species is the most resistant and least preferred host for this parasite. Similarly, C. carpio, L. rohita and L. calbasu when grown together in polyculture and exposed to a higher infective dose (120 copepodids/fish) also did not develop the infection. The possible reasons for differences in susceptibility shown by these carp species in monoculture and the loss of resistance by rohu and common carp while in polyculture with susceptible species are discussed. The ability of resistant fish species to prevent establishment of anchor worms on them under monoculture can be utilized to control this parasitic infection commonly encountered in culture ponds.     

重度感染家蚕微孢子虫的家蚕丝腺cDNA文库构建及EST测序分析

用家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)感染家蚕品种大造的3龄幼虫,于感染后第10天选择有Nb重度感染特征的家蚕丝腺组织无菌操作提取RNA,构建Nb和家蚕丝腺混合样品cDNA文库(文库滴度≥1.6×106PFU/mL)。对文库进行测序,获得EST序列5 026条,其中家蚕丝腺EST3 901条、家蚕微孢子虫EST970条。拼接后,分别获得家蚕丝腺和Nb的单一EST(unique EST)563和383条。对EST和unique EST进行分析发现,感染后第10天家蚕丝腺中Nb的组蛋白、细胞分裂激酶等与孢子分裂增殖相关的基因表达水平较高,一些可能与Nb侵染或寄生适应相关的基因,如Nb孢壁蛋白、极丝蛋白、转运体蛋白等基因亦在此时期较高水平表达,尤其是此期间有相对高水平的组蛋白脱乙酰基酶基因表达,说明Nb基因的表达受到组蛋白去乙酰化方式的调控。对家蚕微孢子虫uniqueEST的序列特征分析发现,Nb mRNA UTR的长度和GC含量与其它微孢子虫差异较小,但ORF区的AT含量较高,即家蚕微孢子虫基因ORF序列较其它微孢子虫发生了高AT变化。Nb unique EST的功能注释及分类结果表明感染后第10天家蚕丝腺中的Nb孢子仍处于多形期,还未完全成熟化。