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青花菜子叶和下胚轴原生质体的遗传转化系统 总被引:2,自引:0,他引:2
用根癌农杆菌共培养法将外源基因导入青花菜上海1号的无菌苗子叶及下胚轴原生质体。菌株为EHA105,携带质粒pMOG410,含GUS和NPTⅡ基因,实验得出其子叶芽分化率最高的激素组合为6-BA 5mg/L+IAA 0.1mg/L。原生质体以8 ̄10℃暗培养5 ̄6d,然后于25℃光照8h生长的无菌苗下胚轴切片游离出的密度最高,K8P培养基激素组合(mg/L)以2,4-D1.0+BA0.5+NAA0. 相似文献
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家蚕核多角体病毒Lef—1和DA26基因的克隆及部分序列分析 总被引:2,自引:1,他引:2
lef-1和DA26基因分别位于egt基因的上游和下游.从pUAc-egt中分离出EcoRI-XbaI1.1kb的egt基因片段,进行缺口平移标记,获得探针。与BmNPVDNA经HindⅢ酶切、电泳、转移至NC膜的DNA进行Southernblot杂交,发现BmNPVDNA的HindⅢD片段呈阳性。从BmNPV基因组中分离出10.4kb的HindⅢD片段,用EcoRI酶切得到HindⅢ-EcoRI2.2kb、EcoRI1.4kb和EcoRI-HindⅢ6.8kb3个片段,分别克隆于pUC19中,命名为pUHE2.2、pUE1.4和pUEH6.8。经双链测序并与AcNPV相关基因序列进行比较,发现lef-1基因被克隆于pUHE2.2中,DA26基因克隆于pUEH6.8中。从所测定的lef-1和DA26基因的启动子及5'端部分序列来看,它们在AcNPV和BmNPV之间有极高的同源性。 相似文献
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苹果叶片再生的改进及抗虫基因植株的获得 总被引:5,自引:0,他引:5
用分别含有全部改造和部分改造的Bt基因植物表达载体pB48.7和pB48.6的土壤农杆菌转化苹果优良品种(红富士、早生富士、辽伏)的叶片外植体,经过对MS培养基成分调整,在Nt保持不变的条件下以(NH4):SO4取代NH4NO3,使得转化后再生频率大增,现已获得232株转化再生植株,这些植株可以在合50mg·L-1的卡那霉素培养基上生长,选出部分植株作PCR检测,表明Bt基因已被导入这些苹果品种中。 相似文献
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采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子-Ⅰ(huIGF-I)基因的4条寡核苷酸 片段,再通过片段1、2与3、4末端互补配对和Klenow酶促补平及酶切连接成为完整的huIGF-IDNA片段,用 EcoR I/PstI酶切后克隆于 pGEM T-Easy Vector,经测序证明所得 DNA序列与设计的序列完全一致;选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ATG下游的6个密码子,并在ATG处增加Kozak序列后,插入pBI121的BamHI/ SacI位点,构建了以 35S为启动子的植物表达载体;以 Hind II/EcoRI切下“35S-Kozak-IGF-I-NOS(ter.)”插入 pCAMBIA2300之Hind II/EcoR I位点,构建成huIGF-I植物表达载体;通过CaCl2直接转化法将表达载体导入农 杆菌EHA105(Rif.r),并以菌落原位杂交技术和 DNA dot blot对重组农杆菌进行了筛选,所获得的重组农杆菌菌株为培育huIGF-I豆药用植物奠定了基础。 相似文献
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司龙亭 《沈阳农业大学学报》1995,(4)
本文报告了以甘蓝(bressicaoleracea)子叶为外植体,成功地将抗潮霉素(Hyg~r)基因和抗卡那霉素(Km~r)基因导入甘蓝品种,培育出转基因植物的技术研究成果.以MS为基本培养基,添加IAA2mg/1,BA4mg/1,蔗糖20mg/1和琼脂8.0mg/1,进行高再生率基因型选择,结果19个品种的再生芽发生率在0%~90%之间。对高再生率的品种进一步试验,进行不同激素浓度的适宜培养基的选择。结果表明:以IAA3mg/1和BA4mg/1的MS固体培养基诱导甘蓝子叶,其再生芽发生率高达95%~100%;每个外植体平均可诱导出2.4~3.9个再生芽。抗生素耐性试验结果指出,培养基中含有500mg/1羧苄青霉素几乎时再生芽的发生率和再生芽个数无影响,只是诱导的再生芽相对发育缓慢,体态弱小。用卡那霉素和潮霉素所进行的致死试验结果是:虽然致死率因基因型不同而有所不同,但培养基中含有Km20mg/1和Hyg20mg/1以上基本可以使所有的外植体死亡而无幼芽的再生。选择时期的试验结果显示,在外植体与EHA101农杆菌共培养3~l0d范围内,共培养6d和7d进行选择分别获得3%~5%的转化率。 相似文献
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本文通过对pE3-mMT-I-cDNA克隆质粒的分离纯化及鉴定,确定了mMT-I基因确实已整合进入PE3植物双元表达载体上。并通过三亲株杂交法将pE3-mMT-I基因转化根癌农杆菌LBA4404。原位杂交结果表明,转化后的根癌农杆菌菌株LBA4404中带有mMT-I基因。 相似文献
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含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
以含有鸡传染性支气管炎病毒Holte株S1基因的重组质粒pUC18-S1.Holte和pUC18-S‘1.Holte为材料,分别构建了可表达IBV S1基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒pSXIVVI^+X3-S1.Holte(含IBV先导序列),pSXIVVI^+X3/4-S1.Holte(IBV先导序列为融合短肽),pAcGHL-C-S1,Holte。 相似文献
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本文作者构建了pXM1和pGCY6两个质粒,其中质粒pXM,含有高赖氨酸基因和GUS报告基因,质粒pGCY6则由裂解多肽Cecropin B基因和GUS基因组成。这两个基因均以CaMV35S作为启动子,以NOS作为终止子。经纯化的质粒DNA以PEG法导入4个水稻品种:89-2、Laccasin、Cypress、台北309细胞悬浮系的原生质休中,组织化学检测结果表明,GUS基因在原生质体、愈伤组织及 相似文献
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苹果叶片再生的改进及转抗虫基因植株的获得 总被引:7,自引:0,他引:7
用分别含有全部改造和垢Bt基因植物表达载体PB48,7和PB48.6的土壤农杆菌转化苹果优良品种(红富士、早生富士、辽伏)的叶片外植体,经过对MS培养基成分调整,在N量保持不变的条件下以(NH4)2SO4取代NH4NO3,使得转化后再生频率大增,现已获得232株转化再生植株,这些植株可以在含50mg.L^-1的卡那霉素培养基上生长,选出部分植株作PCR检测,表明Bt基因已被导入这些苹果品种中。 相似文献
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肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因快速克隆和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
以提纯的肠炎沙门氏菌染色体DNA为材料,在一对含有CUACUACUACUA的特殊引物引导下,应用PCR扩增出鞭毛蛋白基因fliCg.m,允1.8kb左右大小,然后以UDG法快速克隆到质粒,pAMP10中,转化第1宿主大肠杆菌TG1或大肠杆菌DH5a,在氨苄青霉素平板上筛选转化子,小量制备重组质粒DNA,再转入第2宿主大肠杆菌LC-2a(hag-,recA-),所有转化子均出现动力。其中的一个克隆p 相似文献
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普通不结球白菜抗虫转基因植株的获得 总被引:18,自引:2,他引:16
以普通不结球白菜品种“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”种子无菌苗的子叶为外植体材料,在附加2mg/L CPPU、0.1mg/L NAA和7.5mg/L AgNO3的稍作修改的MS培养基上诱导不定芽,子叶(柄和子叶切段诱导不定芽频率分别为32.52%、4.35%和4.79%、11.55%。应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)和新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)的重组质粒导入普通不结球白菜,获得具有卡那霉素抗性的再生植株。具有卡那霉素抗性的当代转基因植株(T0)及其自交后代(T1)植株经PCR和Southern blot分子检测,确认抗虫基因已整合到受体植株的基因组中,并通过有性生殖遗传给后代。体外生物学测定结果,显示抗虫性在转基因植株自交后代植株中得到表达。 相似文献
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司龙亭 《沈阳农业大学学报》1995,26(4):348-353
本文报告了以甘蓝子叶为外植体,成功地将抗潮霉素(Hyg^r)基因和抗卡那霉素(Km^r)基因导入甘蓝品种,培育出转基因植物的技术研究成果。以MS为基本培养基,添加IAA2mg/l,BA4mg/l,蔗糖20mg/l和琼脂8.0mg/l,进行不同激素浓度的适宜培养基的选择,结果表明,以IAA3mg/l和BA4mg/l的MS固体培养基诱导甘蓝子叶,其再生芽发生率高达95%~100%,每个外植体平均可诱导 相似文献
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菊花幼嫩花瓣愈伤组织的诱导和植株再生 总被引:21,自引:0,他引:21
以菊花幼嫩花瓣作为供体材料,MS作为基本培养基,在激素组合为6BA1~3mg/L+NAA1mg/L或2,4 D1~3mg/L+KT1mg/L的范围内均能诱导出愈伤组织,但以MS附加6BA2mg/L和NAA1mg/L的诱导率最高,可达100%。将愈伤组织转移到MS+6BA2mg/L+NAA02mg/L的培养基上,分化芽的频率为778%。将3cm左右的茎段转移到不含激素的MS培养基或MS+NAA01mg/L的培养基上,生根率可达95%以上。 相似文献
17.
当归愈伤组织的再分化及植株再生 总被引:5,自引:0,他引:5
张俊莲 《甘肃农业大学学报》1995,30(4):293-297
MS+IAA1mg/L+KT1mg/L+ZT0.5mg/L有利于诱导愈伤组织的再分化,1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA1mg/L和MS+IAA1mg/L+KT2mg/L+6-BA2mg/L有利于诱导生根;愈伤组织的再分化能力与其形态有关;诱导形成的完整植株基部可以再次形成次生愈伤组织。 相似文献
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丰花月季组培快繁技术研究初报 总被引:7,自引:0,他引:7
组织快繁技术研究结果表明:适宜丰花月季离体芽诱导分化的培养基为MS+6-MA0.50mg/L+NAA0.10~0.20mg/L;适宜丛生芽继代增殖的培养基为MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10~0.20mg/L;适宜丰花月季试管苗生根的培养基为1/2MS+NAA0.10mg/L,其生根率达90%。 相似文献
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通过根癌农杆菌介导法获得新疆甜瓜抗病优质新品系 总被引:2,自引:0,他引:2
用新疆甜瓜无菌苗子叶块,通过根癌农杆菌介导法,将黄瓜花叶病毒外壳蛋白cDNA基因导入“新红心脆”等6个品种(系),经卡那霉素筛选,获得大量Km抗性植株,其中部分Km抗性植株经Luis法检测,表达了胭脂碱合成酶活性。进一步经SDS-PAGE,DOT-Elisa,PCR特异扩增。Western-Blot等方法检测,结果证明了Km抗性植株基因组中整合了CMV-CP基因,长度为1kb,并能有效表达,表达产 相似文献
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非洲菊组培快繁技术研究 总被引:16,自引:1,他引:15
以非洲菊花蕾为外植体,接种在MS+6-BA10mg/L+NAA0.05mg/L培养基中,45d左右诱导成芽,再将芽接种于MS+6-BA2mg/L+IAA1mg/L培养基中进行继代培养出苗,最后将苗接种于1/3MS+IBA 0.1mg/L的培养基中,15d即可生根,30 ̄35d平均生根率达98.8%。 相似文献