甘蓝型黑籽油菜遗传转化中预培养环节的优化

[目的]对甘蓝型黑籽油菜遗传转化中预培养环节进行优化。[方法]利用甘蓝型黑籽油菜下胚轴为外植体,对油菜下胚轴的预培养及其浸染后影响再生和分化情况进行研究,分别从苗龄、激素两方面讨论了下胚轴再生与分化频率的影响。[结果]苗龄、激素与遗传转化之间存在密切的联系。在农杆菌介导的油菜下胚轴预培养最佳体系是:4 d苗龄的外植体在农杆菌侵染前进行5 d预培养,预培养基是MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L。绿色抗性愈伤组织获得GUS瞬时表达,PCR鉴定再生植株为转基因植株。[结论]该研究获得了最佳的预培养条件,为建立一个高效的遗传转化体系奠定基础。     

南盐油1号油菜的组织培养及植株再生研究

以南盐油1号油菜的下胚轴为外植体,利用组织培养的方法,研究苗龄、预培养时间、预培养基的激素配比、分化培养基的激素配比及AgNO3浓度等对芽再生的影响.结果表明,6 d苗龄的下胚轴在MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA培养基预培养4 d后,转入分化培养基MS+2.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+8 mg/L AgNO3培养,可以获得较高的芽再生频率.     

新疆甘蓝型油菜下胚轴的组织培养和植株再生研究

以新疆甘蓝型油菜(Brassica napus L.)1khp11品系下胚轴为外植体,不同浓度6-BA与NAA激素组合的分化培养基诱导芽苗的分化,研究发现下胚轴在不同激素及浓度的6-BA与NAA组合中再生频率、分化率存在显著差异.通过种子实生无菌苗苗龄、诱导分化,4-D的预培养、添加AgNO3等因素的系统分析:五日无菌种子实生苗的下胚轴通过3d短时间的预培养,在最适分化培养基MS0+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+3.5mg/LAgNO3中,再生频率和分化率分别为35;和122.5;,初步建立了甘蓝型油菜1khp11品系下胚轴的高频率再生植株体系,为开展优良性状甘蓝型油菜的生物技术育种工作提供了条件保证.     

甘蓝型黄籽油菜高油品系下胚轴再生体系研究

为获得甘蓝型油菜高含油量双低恢复系,育成高含油量双低油菜杂交种,以2个不同甘蓝型黄籽油菜高油双低品系(GY1、GY2)下胚轴为外植体,采用正交设计,研究了预培养基中2,4-D和6-BA质量浓度、预培养时间、分化培养基中NAA和6-BA质量浓度组合以及AgNO3质量浓度5种不同因素对其下胚轴芽苗再生的影响。结果表明,除AgNO3质量浓度外,其他4种因素对2个油菜品系下胚轴芽苗再生均具有显著或极显著影响。2个油菜品系间和不同处理间的芽苗再生频率差异均达显著水平,且油菜品系与处理间存在明显互作效应。4d苗龄,在MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L预培养基上预培养3d后,在添加NAA 0.05mg/L+6-BA 2.0mg/L的分化培养基中芽苗再生频率最高,GY1和GY2的下胚轴芽再生频率分别为45.2%和41.7%。初步建立了甘蓝型油菜高油品系的下胚轴再生体系,为高含油量油菜遗传转化奠定了基础。     

甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生体系的建立

【目的】探索甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴的最佳离体培养条件。【方法】以甘蓝型油菜雄性不育系B2无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究了苗龄、预培养时间、预培养基和分化培养基中激素配比等对甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生的影响。【结果】4因素对甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴的再生均有明显影响。4 d苗龄,在MS+6-BA 1mg/L+2,4-D 1mg/L预培养基上预培养3 d后诱导分化,子叶在添加NAA 0.02 mg/L+6-BA 3.0 mg/L的分化培养基中分化率最高,达80.45%,下胚轴在添加NAA 0.05 mg/L+6-BA 3.0 mg/L的分化培养基中分化率最高,达69.33%。【结论】建立了甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴稳定高效的再生体系,为其遗传转化奠定了基础。     

甘蓝型油菜离体培养再生体系的优化

为优化甘蓝型油菜离体培养再生体系,本研究分析了影响再生频率的多个关键因素,包括品种、外植体类型、苗龄、预培养时间以及激素浓度与配比等。结果表明:品种对再生频率影响较大,Westar的外植体再生频率高于宁油18号和中双11号;不同外植体再生频率也存在差异,子叶柄的再生频率显著高于下胚轴;苗龄以4 d较好,预培养时间以2 d较适宜;预培养基中激素2,4-D最适浓度为1 mg/L,分化培养基中,6-BA/NAA比例为10∶1时子叶柄的再生频率最高,为70.79%,6-BA/NAA比例为9∶1时下胚轴的再生频率最高,达到96.73%。经过优化后,油菜外植体再生频率得到显著提高。     

不同基因型黄瓜离体再生及其影响因素的研究

以6个黄瓜(Cucumissativus L.)自交系为试验材料,研究不同的基因型、外植体类型和激素组合等因素对黄瓜离体植株再生的影响。结果表明,不同基因型黄瓜材料的再生能力差别较大;带柄子叶比下胚轴和不带柄子叶的再生率高,是比较理想的外植体材料;较低的6-BA/IAA配比促进黄瓜不定芽的分化;6-BA/IAA配比较高则适合再生芽的伸长;添加0.5mg/LAgNO3可以促进不定芽发生,5～6d苗龄的外植体分化再生频率较高;在供试的6个试验材料中,M8,M10的再生频率较强,分别达到96%和90%。高频率不定芽诱导分化培养基为:MS+IAA0.6mg/L+6-BA0.5mg/L+AgNO30.5mg/L;不定芽伸长的培养基为MS+IAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+GA31.0mg/L+AgNO30.5mg/L;高效生根诱导培养基为MS+IAA0.2mg/L+NAA0.1mg/L。     

2种基因型大白菜高效子叶离体不定芽再生研究

以2个优质大白菜材料德高早熟长江5号(DG)和双耐(SN)的子叶为外植体,研究了不同激素配比、苗龄和AgNO3浓度对子叶不定芽再生的影响,建立了2种大白菜的子叶不定芽高效再生体系,为进一步有效的利用基因工程技术改良大白菜品种奠定了基础.结果表明:与6-BA相比,TDZ对诱导子叶不定芽再生更有效.在单独附加细胞分裂素(6-BA或TDZ)的MS培养基上,不能诱导子叶不定芽的分化.DG在MS+ 1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/LNAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为73.80％,最适苗龄为6d,平均再生系数为4.27.SN在MS+1 mg/L TDZ +0.4 mg/L NAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为59.09％,最适苗龄为6d,再生系数为4.03.     

银白杨下胚轴高频离体再生体系的建立和优化

【目的】建立银白杨(Populus alba)下胚轴高频再生体系,为银白杨遗传转化和推广利用奠定基础。【方法】以银白杨下胚轴为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,探讨苗龄、接种方式及不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖质量浓度等对银白杨下胚轴不定芽分化和生根的影响。【结果】适宜银白杨下胚轴不定芽分化的最佳培养基为:MS+AgNO33.5 mg/L+蔗糖35 g/L+琼脂6.0 g/L+IBA 0.3 mg/L+TDZ 1.5 mg/L,用该培养基培养银白杨下胚轴外植体,其分化率为98.63%,平均每个外植体形成的不定芽为23.81个。银白杨下胚轴外植体不定芽未经愈伤组织而直接产生于下胚轴的表皮或近表皮等表层细胞。3~7 d苗龄银白杨下胚轴诱导不定芽分化能力无显著差异,诱导率均达到95%以上,7 d后随着苗龄的增加,不定芽分化、诱导能力快速下降,苗龄为11 d时不定芽分化率只有52.28%。不同切段下胚轴不定芽再生能力由强到弱表现为:上部切段(靠近子叶端的下胚轴部分)>中部切段>下部切段。以正插(形态学下端插入培养基)方式接种的外植体不定芽再生能力显著大于反插(形态学上端插入培养基)和平放的。【结论】优化了银白杨的组织培养体系,初步找到了影响银白杨下胚轴诱导分化及植株再生的主要因子。     

提高甘蓝型油菜离体培养再生频率的研究

以甘蓝型油菜为材料,研究了不同外植体、基因型以及Ag+和赤霉素(GA3)等对甘蓝型油菜离体再生的影响,建立了甘蓝型油菜高频率的离体再生体系.不同基因型品种以4 d苗龄的无菌苗子叶作为外植体,培养在MS培养基上并附加BA 3.0 mg/L,NAA 0.15 mg/L,GA3 1.00 mg/L,AgNO₃2.5mg/L,在23～25 ℃、16 h光照(2 00O～3 000 lx)下培养27 d以上即可实现不同基因型品种子叶外植体高频率芽的再生.     

白菜类作物子叶高频再生体系的建立

以大白菜品种北京80号、油青矮脚45天菜心、四季菜心王的带柄子叶为外植体,研究不同基因型、苗龄、激素组合、预处理条件及琼脂质量浓度对不定芽再生的影响。结果表明,北京80号的最佳培养基为MS+5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2mg/L AgNO3,再生频率为83.6%;油青矮脚45天菜心和四季菜心王的最佳培养基为MS+0.2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+2 mg/L AgNO3,再生频率分别为73.1%和83.2%。3个基因型的带柄子叶在0.5～1mg/L 2,4-D中预处理3d,再生频率达84%以上。4～5d苗龄的外植体诱导不定芽效果较好。琼脂的质量浓度以12g/L为宜。通过不定芽继代培养和生根驯化建立白菜类作物较高再生频率的再生体系。     

野生小花碧冬茄外植体器官分化与植株再生研究

[目的]为野生小花碧冬茄组织快繁技术提供依据,文中研究了组培条件下,不同浓度的6-BA、NAAI、BA处理对野生小花碧冬茄外植体器官分化和植株再生的影响。[方法]以野生小花碧冬茄无菌种子获得的试管苗为材料,筛选其成苗培养和生根培养最适激素组合。[结果]成苗培养中,较高浓度的6-BA配合较低浓度的NAA有利于外植体形成丛生芽,而高水平的NAA会引起愈伤组织的大量产生。对野生小花碧冬茄而言,芽分化最佳培养基组合为MS+蔗糖30 g/L+琼脂粉5 g/L+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L;愈伤组织最佳培养基组合为MS+蔗糖30 g/L+琼脂粉5 g/L+NAA 0.4 mg/L+6-BA 1.0 mg/L;生根最佳培养基组合为1/2MS+蔗糖30 g/L+琼脂粉5 g/L+IBA 1.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L。[结论]明确野生小花碧冬茄芽分化、愈伤组织和生根培养的理想激素配比,初步建立了野生小花碧冬茄的高效再生体系。     

TDZ和6-BA对芜菁离体再生过程中内源激素水平的不同影响(英文)

为研究外源TDZ和6-BA对芜菁离体再生过程中内源激素的影响来阐明TDZ在促进芜菁离体再生方面比6-BA更为有效的原因,采用不同浓度的TDZ和6-BA分别配合不同浓度NAA诱导芜菁带柄子叶离体再生.结果表明:适合芜菁带柄子叶离体再生的外源激素浓度组合分别是TDZ 4·0 mg·L-1+ NAA1·0 mg·L-1和6-BA5·0 mg·L-1+ NAA1·0 mg·L-1;在这2种组合诱导下的不定芽再生率分别是80·4 %和30·2 %.分别测定在这2种外源激素组合诱导下带柄子叶外植体内源生长素(IAA)、玉米素(Z)、赤霉素(GAs)和脱落酸( ABA)的绝对含量,并计算IAA/ABA和IAA/Z之间的相对含量.结果表明:TDZ 4·0 mg·L-1+ NAA1·0 mg·L-1的激素组合诱导带柄子叶外植体产生内源IAA和Z的水平峰值显著高于6-BA5·0 mg·L-1+ NAA1·0 mg·L-1的激素组合;而在2种外源激素组合诱导条件下,内源GAs和ABA的含量差异不显著;IAA的绝对含量左右了IAA/ABA和IAA/Z的变化趋势.综合内源激素的绝对含量和相对含量,TDZ比6-BA更好地诱导芜菁分化效果的关键因素是由于TDZ诱导外植体产生了更高水平的IAA含量和IAA/ABA比值.TDZ和6-BA诱导产生不同水平的内源Z和IAA/Z的作用还不明确.     

甘蓝型油菜花茎高效再生体系研究

研究了甘蓝型油菜花茎外植体高效诱导不定芽的再生体系,结果表明:以含有2,4-D(0.5￣1.0mg/L)的培养基对外植体进行预培养,以及在分化培养基中加入AgNO3(2￣6mg/L),可显著降低外植体褐化坏死的频率,提高了不定芽的发生频率及其再生能力;6BA(2.5mg/L)与NAA(0.1mg/L)配合使用有利于提高不定芽发生频率;再生的不定芽90%可长根。     

激素TDZ对促进白菜下胚轴不定芽再生的效应分析

以华阳三号(HY)大白菜和苏州青(SZQ)小白菜下胚轴为外植体，MS为基本培养基，将TDZ与NAA配置不同激素浓度组合，观察TDZ对下胚轴不定芽再生的影响，并对各组合的培养效果进行了比较。结果表明，TDZ能较好地促进大白菜下胚轴不定芽再生，在MS 0．5mg／LTDZ 0．5mg／L NAA的培养条件下，HY的不定芽再生频率达到45％，且再生周期短，芽点多，再生芽正常，可以满足植物遗传转化需要。TDZ很难诱导SZQ小白菜下胚轴不定芽再生，只能诱导产生大量愈伤组织。     

文心兰组织培养初步研究

以文心兰花梗为材料,采用不同激素配比、光照强度、培养基分别进行愈伤组织诱导、芽分化诱导和幼苗形成试验。结果表明,在添JJIINAA1．Omg／L＋6-BA0．2mg／L＋TDZ0．3mg／L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g／L的培养基上,愈伤组织的诱导率最高,可达70．O％;在250lx的散射光条件下,文心兰花梗愈伤诱导率达到最高;在6-BA0．4mg／L＋NAAO．2mg／L激素组合条件下,从愈伤组织分化出幼苗的形成率和商品化率可达到最佳效果;中、低无机盐浓度且全量的基本培养基较利于幼苗分化;当分化形成的幼苗株高为1-2cm时利于壮苗生根,生根苗在适宜条件下移栽,成活率可达99．O％以上。因此,采用适合的激素配比、光照强度、基本培养基对花梗进行愈伤组织诱导、分化芽和幼苗,同样可以实现文心兰的大量繁殖。     

白玉龙火龙果不同外植体的离体培养

【目的】研究白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节的不定芽诱导及茎段增殖技术,为白玉龙火龙果的品种改良及快繁育苗提供技术支持。【方法】以白玉龙火龙果种子培育的无菌苗为材料,采用正交试验设计分析不同培养基、不同植物生长调节剂与浓度及其组合对白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节不定芽诱导及茎段增殖与生根的影响。【结果】白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节均能直接诱导不定芽发生。其中,16个正交处理均能诱导子叶节不定芽发生,其最优诱导培养基为WPM+0.50 mg/L TDZ+0.50 mg/L CPPU+0.05 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,诱导率为87.1%~100.0%;子叶仅1个处理未能诱导出不定芽,最高诱导率为36.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.50 mg/L TDZ+0.05mg/L CPPU+2.00 mg/L 6-BA+0 mg/L NAA;下胚轴仅5个处理能诱导出不定芽,最高诱导率仅3.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.05 mg/L TDZ+2.00 mg/L CPPU+1.00 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA。茎段去顶处理有利于腋芽的诱导萌发,去顶处理的最大增殖系数为4.2,不去顶处理的最大增殖系数为3.1,其最优增殖培养基为WPM+0.50 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA。NAA处理能促进茎段生根,适宜的生根培养基为1/2MS+0.1~0.5 mg/L NAA,生根率达100.0%。【结论】不同基本培养基、植物生长调节剂与浓度及其组合均能诱导白玉龙火龙果子叶、下胚轴和子叶节不定芽发生及茎段芽增殖和不定根产生。其中,不定芽诱导以子叶节最易诱导发生,其次为子叶,下胚轴较难;茎段芽增殖和不定根诱导均较容易。     

矮牵牛茎尖诱导分化研究

[目的]推动矮牵牛组培的产业化,达到使其苗木生产快速、经济的目的。[方法]共配制5种MS培养基,选择无污染、生长健壮的矮牵牛茎尖作为外植体,进行诱导分化单因素试验,研究不同浓度的NAA对矮牵牛外植体诱导成活率的影响,进而选择适合矮牵牛诱导成活的最佳培养基。[结果]培养基中NAA浓度的差异对外植体成活率的影响较大。NAA浓度为0.5mg/L的培养基为最佳诱导成活培养基,NAA浓度为0.7及0.3mg/L的培养基对矮牵牛的作用仅次于NAA浓度为0.5mg/L的培养基,但NAA浓度为0.1及0.9mg/L的培养基处理效果不是十分理想。筛选出矮牵牛组培最佳诱导分化培养基为MS＋NAA0.5mg/L＋6-BA0.3mg/L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g/L。[结论]研究结果可为矮牵牛的组织培养提供参考。     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。