右旋糖苷修饰酵母蔗糖酶条件的筛选及修饰酶性质的研究

以低分子右旋糖苷(Dextran)为修饰剂,选用L16(45)正交试验方案,研究了不同修饰条件对酵母蔗糖酶(Yeast invertase)化学修饰效果的影响以及修饰前后酶的性质变化.结果表明,pH 5.0、20 ℃、反应8 h为最佳的修饰条件.与天然酶相比,修饰酶的酶比活力、糖含量、酶活力回收率分别提高56.7%、35.05%和14.61%,蛋白含量下降22.66%,氨基修饰率为39.55%.酶学性质研究表明,修饰后酶的最适pH在4.0～5.0范围内,最适温度55～60 ℃,在pH 3.5缓冲液中稳定性上升,在pH 6.5缓冲液中稳定性下降,在60 ℃缓冲液中稳定性下降.动力学研究表明,修饰后酶的Km和vmax均上升,光谱分析表明,修饰后酶的构型构象均发生变化.     

聚乙二醇修饰对木瓜凝乳蛋白酶酶学及药物生物学性质的影响

采用活化的单甲氧基聚乙二醇（mPEG-5000）对木瓜凝乳蛋白酶（Cp）进行了共价修饰,修饰产物经毛细管电泳检测与分析表明：主产物为平均每分子Cp偶联3—4个mPEG。长链的低修饰度修饰酶．以此修饰酶为研究对象,进行了Cp在修饰前后的主要酶学、药物生物学性质的比较研究．结果表明：Cp经mPEG,修饰后,Kn^app（酪蛋白为底物）有所增加,但与Cp相比,mPEG1修饰酶的pH稳定性、热稳定性以及抗胰蛋白酶的水解能力却均有增强;药代动力学结果还显示,mPEG1-Cp的体内活性半衰期延长,修饰酶体内半衰期是原酶的1．6倍,表明mPEG1修饰酶具有更好的临床应用前景．     

酸酐修饰脂肪酶的研究

[目的]研究酸酐修饰对脂肪酶催化性能的作用。[方法]采用琥珀酸酐、丙酸酐和乙酸酐对Novozym 435脂肪酶进行了修饰,优化修饰条件,并对修饰后Novozym 435的催化性能进行测定。[结果]酸酐修饰可显著提高Novozym 435脂肪酶的水解活性。琥珀酸酐修饰Novozym 435酶活为79.3 U/g,相对于未修饰酶酶活（63.9 U/g）,提高了24%;丙酸酐修饰后酶活为85.6 U/g,提高了33.9%;而乙酸酐修饰后酶活为84.0 U/g,提高了31.4%。而且酸酐修饰后酶的热稳定性、pH稳定性和耐有机溶剂的能力也都有很大提高。[结论]酸酐修饰是一种有效的提高脂肪酶催化性能的重要方法。     

多聚半乳糖醛酸酶及其化学修饰酶的酶学性质

探明多聚半乳糖醛酸酶特别是其化学修饰酶的酶学性质,以期发现比天然酶酶学性质更佳的酶.该研究以水溶性低分子量壳寡糖作为修饰剂对已纯化的多聚半乳糖醛酸酶(PG)进行化学修饰,得到化学修饰酶(COS·PG),然后分析PG和COS-PG的酶学性质如酶比活力、最适pH、最适温度、pH稳定性、温度稳定性等.结果显示:修饰后,化学修...     

邻苯二甲酸酐修饰脂肪酶的性能研究

采用邻苯二甲酸酐(PA)对猪胰脂肪酶(PPL)进行了修饰.初步表征了修饰酶PA-PPL,考察了PA-PPL的最适反应条件和对酸碱、热的稳定性.结果表明:在试验条件下,PA对PPL的修饰度为30%;尽管修饰酶PA-PPL与猪胰脂肪酶PPL催化水解的最适反应pH和最适反应温度相同,但与PPL相比,PA-PPL的水解活性提高...     

拟除虫菊酯类农药半抗原合成及酶联免疫分析

酶联免疫分析(ELISA)是农药残留检测的一种重要方法,具有方便快速、特异灵敏等优点.主要介绍了拟除虫菊酯类农药半抗原的合成方法,对拟除虫菊酯分子的环丙烷、氰基和芳香环进行修饰;对拟除虫菊酯水解产物进行修饰;增加一个连接臂作为半抗原.同时介绍了酶联免疫分析的研究进展,对拟除虫菊酯类农药半抗原的合成及酶联免疫分析进行了讨论和展望.酶联免疫分析在拟除虫菊酯类农药的残留检测中将起到越来越重要的作用.     

放线菌产纤维素酶的化学修饰

[目的]提高纤维素酶的使用价值。[方法]首先通过对放线菌进行活化、选择及液体发酵生产纤维素酶,经离心后得到粗酶液。然后利用不同浓度的甲醇、聚乙二醇(PEG)、乙酰丙酮、巯基乙醇(ME)4种修饰剂对纤维素酶进行化学修饰。最后分别测定了修饰前后的酶活力,并进行比较。[结果]与修饰前相比,乙酰丙酮和ME修饰后的酶活力基本不变,但甲醇和PEG的修饰导致酶活力明显降低。[结论]乙酰丙酮和ME的修饰对纤维素酶活性中心影响较小,而甲醇和PEG的修饰对纤维素酶的活性中心影响较大。     

EDTA和金属离子对酵母蔗糖酶天然酶和修饰酶酶活力的影响及其作用机理研究

以不同浓度EDTA、Mn2+、Zn2+和Fe2+为效应物,以蔗糖为底物,研究EDTA和金属离子对酵母蔗糖酶(Yeast invertase)天然酶和修饰酶催化活性的影响。结果表明:EDTA对天然酶和修饰酶均有抑制作用。Mn2+对天然酶和修饰酶有激活作用;Zn2+和Fe2+对天然酶有抑制作用,对修饰酶有激活作用。动力学分析显示,经5 mmol/L EDTA、Mn2+、Zn2+和Fe2+处理后,天然酶和修饰酶的Km和Vmax值均发生变化。光谱分析显示,经不同浓度EDTA和Fe2+处理后,天然酶和修饰酶的构型构象发生变化;经不同浓度Mn2+和Zn2+处理后,天然酶和修饰酶的构型构象基本上没有发生变化。     

罗非鱼碱性磷酸酶的化学修饰

采用PMSF、PCMB、NBS、TNBS、SUAN、DTT、IAc、BrAc等化学修饰剂在一定的条件下选择性修饰罗非鱼ALP,研究罗非鱼ALP分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系.结果表明:PMSF、NBS等两种化学修饰剂能显著抑制酶的活力,而PCMB、TNBS、SUAN、DTT、IAc、BrAc等对酶的活力影响不大.说明对丝氨酸残基、色氨酸残基的化学修饰后对酶的活力影响很大,而酶分子中的其他功能基团不在酶的活性中心,修饰后对酶的活力影响不大.     

木瓜凝乳蛋白酶的单链单甲氧基聚乙二醇修饰产物的检测与分析

在底物保护下,采用三聚氰氯活化的单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)对木瓜凝乳蛋白酶(Cp)进行了共价修饰,反应混合物经毛细管电泳(CE)分析及Sephadex G-75分离纯化获得修饰度为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1长链的修饰纯酶(mPEG1-Cp)．以三硝基苯磺酸(TNBS)法与CE法作对比测定了该修饰酶的平均氨基修饰度;以-ELISA法检测mPEG1-Cp的抗原性;用紫外吸收光谱和荧光发射光谱对mPEG1-Cp进行了结构的测定分析．结果表明：Cp的mPEG1修饰产物经毛细管电泳检测为多组分体系,最大产物峰为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1的低修饰度修饰酶,其相对分子质量为40712～46044;该修饰酶抗原抗体结合能力完全消失,体内活性半衰期是原酶的1．6倍,同时酶活力保持在36．5％;紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析表明:mPEG1-cp结构有轻度的改变．     

Selective phagocytosis: a new concept in protein catabolism

The clearance of different metabolic products derived from two plasma proteins, prothrombin and fibrinogen, was studied with the aid of the isolated, perfused rat liver. Active thrombin and fibrin were rapidly cleared by the Kupffer cells. Inactive thrombin and a partially degraded fibrin molecule were also cleared but at much slower rates. This difference in clearance rates suggests the presence of a high degree of selectivity in the clearance of altered plasma proteins.     

Research about Preparation of Porcine Thrombin

A rapid, simple, and reproducible method for the preparation of porcine thrombin was investigated.Porcine prothrombin was isolated by carrying out isoeiectric precipitation. Porcine thrombin was prepared from pro-thrombin which was activated by the prothrombinase complex containing Factor Xa, Factor V, Ca^2 and phospholipids.Factor Xa and Factor V were isolated by DEAE-cellulose chromatography respectively. They were both identified bySDS-PAGE. Yields and specific activity of porcine thrombin were 107μg per milliliter plasma and 4 U per milligram protein.     

猪凝血酶的亲和层析纯化及其酶原的激活研究

采用柠檬酸钡作吸附剂、ＥＤＴＡ溶解的方法从猪血浆提取凝血酶原，建立了凝血酶原激活的简单方法。并以环氧氯丙烷活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ为载体，采用１－乙基－３－（３－二甲氨丙基）碳二亚胺进行肝素的固定化，将固定化肝素用于猪凝血酶的亲和层析纯化。结果表明，通过一步亲和层析将猪凝血酶粗品提纯了８．２倍，获得了比活超过１１００Ｕ／ｍｇ的凝血酶，收率为６０％。     

干热改性葛根淀粉成膜工艺的研究

[目的]研究干热改性葛根淀粉的最优成膜工艺参数,为干热改性葛根淀粉膜的工业化应用提供理论依据。[方法]以透光率、水蒸气透过系数、溶解度等为评价指标,通过研究改性淀粉用量、甘油浓度和干燥温度对干热改性葛根淀粉膜特性的影响,确定最优成膜工艺参数。[结果]干热改性葛根淀粉膜的最优成膜工艺参数为改性葛根淀粉质量分数5.0%,甘油添加量1.5%,烘干温度80℃。[结论]该研究可为葛根淀粉的深度开发利用提供参考。     

凝血酶及其相关编码基因的文本挖掘分析

[目的]对凝血酶及其相关基因进行文本挖掘分析。[方法]通过PubMed以"Thrombin"AND"gene"为检索策略检索相关文献,汇集了1980年以来的该主题文献,运用MMTx对这些文献进行处理,并设计相关Java算法程序,从处理结果中提取语义类型为"Patho-logic Function"的病理功能概念和"gene or genome"基因类概念形成共句距阵,最后通过统计学软件SPSS16,对文本挖掘数据进行统计聚类分析。[结果]通过文本挖掘处理,系统的了解和归类了凝血酶编码基因与相应病理功能的关系。[结论]通过文献反查,说明该研究中的文本挖掘有效。     

The structure of a complex of recombinant hirudin and human alpha-thrombin

The crystallographic structure of a recombinant hirudin-thrombin complex has been solved at 2.3 angstrom (A) resolution. Hirudin consists of an NH2-terminal globular domain and a long (39 A) COOH-terminal extended domain. Residues Ile1 to Tyr3 of hirudin form a parallel beta-strand with Ser214 to Glu217 of thrombin with the nitrogen atom of Ile1 making a hydrogen bond with Ser195 O gamma atom of the catalytic site, but the specificity pocket of thrombin is not involved in the interaction. The COOH-terminal segment makes numerous electrostatic interactions with an anion-binding exosite of thrombin, whereas the last five residues are in a helical loop that forms many hydrophobic contacts. In all, 27 of the 65 residues of hirudin have contacts less than 4.0 A with thrombin (10 ion pairs and 23 hydrogen bonds). Such abundant interactions may account for the high affinity and specificity of hirudin.     

电化学法测定废水中对苯二酚的研究

[目的]研究循环伏安法制备的聚对氨基苯磺酸修饰电极测定废水中对苯二酚含量的效果。[方法]利用循环伏安法制备聚对氨基苯磺酸修饰电极,研究其对对苯二酚的电催化作用,并探索其催化机理。[结果]对氨基苯磺酸修饰电极对对苯二酚有明显的电催化作用,将该电极用于对苯二酚的定量测定,发现其氧化峰电流与对苯二酚的浓度在1．0×10^-6～8．0×10^-5mol／L范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0．9894,检测限为5．0×10^-7mol／L。其最佳测量条件：采用pH值5．59的磷酸缓冲溶液为支持电解质,电压范围为-0．1—0．3V。该修饰电极可将邻苯二酚和对苯二酚很好地分开。[结论]建立了一种电化学法测定废水中对苯二酚的方法,该方法简便、快捷、准确、灵敏度高。     

环境意识与生物科技创新采用——以台湾农民种植基因改造木瓜为例

以基因改造木瓜为例,探讨分析农户环境意识对种植基因改造木瓜作物的影响．调查数据显示：农民环境意识对基因改造木瓜的特性认知有不同的影响;在基因改造木瓜不同特性前提条件下,农户环境意识与种植基因改造木瓜的意愿有显著性关系．     

酚醛树脂的改性

用ＤＳＣ分析技术研究了改性树脂的固化过程，确定了最佳固化温度。且发现随甲醛／苯酚的用量摩尔比增加。固化温度有下降的趋势；对改性树脂进行了力学性能测试，同时与普通酚醛树脂进行了比较。结果表明，实验合成的改性树脂的粘结性及柔性性较普通酚醛树脂有明显改善。     

蓝藻伪空胞的测定及其前处理方法(英文)

[目的]探讨蓝藻伪空胞的测定及其前处理方法。[方法]改进了测定伪空胞的毛细管压力法,对改进后的装置进行了检测限和精密度测试,并研究了2种浓缩方法和2种保存方法对3种蓝藻细胞数量和伪空胞含量的影响。[结果]改进后的蓝藻伪空胞测定装置其检测限达到0.0018μl/ml藻液,同一样品测定结果相对标准偏差小于1%。采用过滤和离心2种浓缩方法时,分散单细胞的微囊藻细胞损失都大于50%,其中小群体的微囊藻采用离心的方法细胞损失较小,而丝状的颤藻采用过滤的方法损失较小;这2种方法对伪空胞含量的影响均可忽略。3种蓝藻在直接冷藏和添加鲁哥试剂保存7d后,其细胞浓度和单位细胞的伪空胞含量均未发生明显改变,其中对于伪空胞,直接冷藏的损失更小;对于自然水体样品,宜添加鲁哥试剂进行保存。[结论]为研究蓝藻浮力调节机制及其暴发机理提供了理论依据。