高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒F株的分离鉴定

2012年2月,潍坊某猪场疑似发生高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)。病猪主要表现为呼吸困难,耳朵发绀,皮肤有弥漫性出血点;剖检发现淋巴结、肺脏出血严重。从病死仔猪脾、肺、淋巴结和脑组织中分离得到病毒。将该毒株在Marc-145细胞上盲传3代出现典型细胞病变,F3代病毒滴度为106.5TCID50/mL。RT-PCR检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性。用F3代毒株进行动物回归试验,结果符合高致病性PRRSV致病特征。上述结果证明该猪场发生的传染病为高致病性PRRS,并且利用Marc-145细胞成功分离到高致病性PRRSV,命名为F株。本研究为高致病性PRRSV致病特点及其疫苗研制提供物质基础。     

猪繁殖与呼吸综合征疑似病例实验室诊断

为确诊铜仁市郊区部分养猪场发生的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疑似病例,开展了临床症状与剖检病变观察和PRRS病原核酸与血清抗体检测,结果显示,患猪体温升高达41.5℃、咳嗽、打喷嚏、呼吸困难、耳和四肢皮肤发绀,妊娠母猪流产、产死胎或弱仔等;剖检可见肺淤血出血呈肉样变、脾边缘丘状出血或梗死、肾点状或块状出血呈雀斑肾、淋巴结出血呈大理石样变等;免疫猪群PRRSV抗体阳性率为44.1％,而未免疫猪群PRRSV抗体检出率为33.9％;采用PRRSV N基因特异性引物和PRRSV变异毒株检测试剂盒进行RT-PCR扩增,均可得到与预期大小相一致的特异性片段.以上结果表明,该次疫情是由高致病性PRRSV感染所致,且未免疫猪群普遍存在PRRSV隐性感染.     

猪圆环病毒病与传染性胸膜肺炎混合感染的诊断与分析

广西上思县某猪场育肥猪近期发生疫病,主要表现在病猪发热、咳嗽、呼吸困难、体表发绀和急性死亡等症状.剖检发现病猪气管内积聚血样粘液,肺脏充血肿大,全身淋巴结肿大出血,脾脏肿大等典型病变.结合猪群临床症状和实验室检测结果最终确诊该病例是由猪圆环病毒病和传染性胸膜肺炎混合感染引起的.     

辽西地区猪伪狂犬病的病理学特征及病毒组织嗜性

应用PCR方法结合病理剖检和组织学观察对辽宁省辽西地区猪伪狂犬病流行病例进行诊断和病理学观察。结果表明:该地区猪伪狂犬病表现多种病理类型,包括脑炎型、脑炎兼内脏型、母猪繁殖障碍型和公猪睾丸炎型4种;主要特征性剖检病变:脑炎,肺、肝、肾、脾、淋巴结的出血和灰白色坏死斑点;主要特征性组织病理变化:非化脓性脑炎,间质性肺炎,肺、肝、肾、脾、淋巴结的局灶性核碎裂性坏死和出血。患猪临床死亡率很高,其病理变化发生于脑和多种内脏器官,并呈现显著的坏死和出血变化,免疫组化试验显示该株伪狂犬病毒(PRV)可侵袭脑、肺、脾等多种器官,说明该地区的PRV流行毒株属于强毒株,可能出现新的变异而毒力增强。     

PRRSV、CSFV混合感染病例的实验室诊断

为确诊贵阳市某猪场疑似猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)死亡病例,对死亡猪进行剖检及实验室诊断。病理剖检可见,病死猪出现淋巴结肿大充血、肺部有坏死灶、胸腔有大量积液等病理变化;同时采集病理组织应用分子生物学和细菌学方法进行PRRSV(普通毒株和Nsp2变异毒株)、猪瘟病毒核酸检测和细菌分离鉴定。结果显示:该病例为PRRSV(普通毒株)、CSFV混合感染所致。     

1株临床高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与鉴定

本研究从江苏省某猪场患有明显呼吸道临床症状和高热死亡的仔猪肺脏组织中分离到一株病毒,经病毒生物学特性测定、血清学试验、病毒基因鉴定,确定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。人工猪体感染发病试验表明,该分离株可以引起商品仔猪出现明显临床症状和死亡,证实我国已经出现临床高致病性PRRSV毒株。     

猪圆环病毒、猪高致病性蓝耳病混合感染

2007年8月,淮安市清河区某猪场发生以发热、咳嗽、呼吸困难、皮肤出血和急性死亡 为特征的急性传染病,经临床诊断、病理剖检、实验室检验,确诊为猪圆环病毒Ⅱ型、猪高致病性蓝耳病急性混合感染.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒湖北株的分离与鉴定

为了探明猪高热综合征的原发病原,对采自湖北省患有明显呼吸道临床症状和高热死亡的仔猪组织病料进行病毒分离,结果分离到3株病毒。经电镜观察、免疫荧光试验、RT-PCR鉴定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。病毒基因序列分析表明,其GP5及NSP2基因与高致病性PRRSV毒株有97%~99%的同源性。人工猪体感染发病试验表明,该分离株均可引起仔猪出现明显临床症状和死亡,证实湖北省已经出现临床高致病性PRRSV毒株。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株的致病性研究

为了解PRRSV安徽分离株的致病性,用从安徽省某发病猪场的病死仔猪组织中分离到的SCH07毒株接种40日龄健康仔猪,对其进行临床症状、病理剖检、病理组织学观察及抗体检测,结果表明：该毒株能引起仔猪高热、呼吸困难等明显临床症状和肺脏、淋巴结肿大、出血等剖检变化,病理组织学观察可见显著的间质性肺炎等病变,攻毒后第7天试验组仔猪血清中首次检测到抗体,并有一头在第15天死亡,证实安徽省已经出现临床高致病性PRRSV毒株。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染的诊断

本实验对从南宁市郊县某养猪场送检的病猪进行了病理剖检及微生物学检查。病猪消瘦、皮肤苍白、腹股沟淋巴结肿大、肺出血等，运用建立的PCR方法检查病猪的淋巴结、肺、脾等器官组织，发现PCV—2和PRRSV均为阳性，从而证实PRRSV和PCV—2在猪体内的混合感染。     

不同毒力猪繁殖与呼吸综合征病毒对仔猪肺和外周免疫器官损伤的研究

为研究不同毒力的PRRSV对仔猪肺脏和外周免疫器官损伤的差异,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4株)和PRRSV经典株(CH-1a株)感染35日龄健康的断奶仔猪,并在感染后0 d、3 d、7 d、10 d和14 d各迫杀3头,检测肺、颌下淋巴结、肠系淋巴结、腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏的病毒载量及病理变化情况,同时检测血清中抗PRRSV的抗体水平。结果表明:感染后3 d肺脏及各免疫器官可检测到病毒,HuN4感染组病毒载量比CH-1a感染组病毒载量高1 000倍;HuN4感染组病毒载量峰值出现在感染后10 d,而CH-1a感染组维持着较低水平的病毒载量。组织病理学检测显示HuN4感染组淋巴结内淋巴细胞显著减少,呈空泡状;CH-1a感染组淋巴结内淋巴细胞轻度减少,呈星隙状。本实验表明HuN4株比CH-1a株对肺和外周免疫器官造成更严重的损伤。     

PRRSV感染致断奶仔猪肺脏和外周免疫器官的病理损伤

用PRRSV ATCC VR-2332株感染8头28日龄仔猪,同时设立2头健康对照猪.PRRSV单独感染猪分别于感染后7,17,25 d各剖杀2,3,3头,对照组于17,25 d各剖杀1头.剖杀后采集脾脏、肺脏和全身主要淋巴结(颌下淋巴结、肺门淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结)等免疫器官,用甲醛溶液固定,组织石蜡切片以观察显微病理变化.试验组猪的抗体和抗原检测结果均表明,感染后7 d血清PRRSV抗体和免疫器官组织PRRSV抗原部分呈阳性;剖检和石蜡切片结果均显示,试验猪于攻毒后,随着病程的发展,发生了不同程度的间质性肺炎及相应的显微病变,PRRSV单独感染能引起免疫器官以淋巴细胞及巨噬细胞变性坏死为特征的急性炎症变化,造成免疫损伤,进而引起免疫抑制.     

The effect of a killed porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) vaccine treatment on virus shedding in previously PRRSV infected pigs

Two experiments were conducted to investigate if virus shedding could be reduced following a killed porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) vaccination (KV) of PRRSV infected pigs. In experiment 1, PRRSV infected pigs were vaccinated with KV on days 14 and 28 following infection. Viremia and serum neutralizing (SN) antibody were compared to infected pigs with no KV. The second experiment was conducted in an identical manner. In addition to viremia and SN antibody, virus in oropharyngeal scrapings and interferon gamma (IFN-gamma) producing cells were monitored. Magnitude and duration of viremia were not different between KV vaccinated and non-vaccinated groups. No virus was detected in oropharyngeal scraping from any pig, nor was there a difference in the detection of viral RNA. In both experiments, however, increases in SN titer and number of IFN-gamma producing cells were observed. The SN titer was significantly higher in KV vaccinated groups than in non-vaccinated group on days 42 and 42-56 following infection in experiments 1 and 2, respectively. The number of IFN-gamma producing cells was slightly higher in KV vaccinated groups than in non-vaccinated group on days 42 and 63. These observations suggest that KV had no effect on virus shedding. However, previously infected pigs responded immunologically to KV, as demonstrated by increases in SN antibody titers and IFN-gamma producing cells.     

应用灭光定量RT-PCR方法检测PRRSV变异株在仔猪体内动态分布

为进一步了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株(HuN4株)在体内的动态分布规律和特点,探讨病毒对组织器官的嗜性,本研究将HuN4株和细胞传代致弱毒株HuN4-F65人工感染40日龄健康仔猪,分别于感染后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d和28 d各迫杀2头,并应用建立的荧光定量RT-PCR方法对脑、颌下淋巴结、扁桃体、肺脏、肝脏和十二指肠等组织及血清中的PRRSV进行定量检测.结果显示:感染后HuN4组各器官病毒载量比HuN4-F65组高100倍,病毒栽量峰值期出现在感染后7 d,随后呈下降趋势.HuN4株在仔猪体内分布广泛,在21 d的试验期内持续存在,并且各器官的病毒载量呈正态分布规律;而HuN4-F65株血清病毒载量较低,并且集中在单核巨噬细胞相对密集的扁桃体和颌下淋巴结,与HuN4株主要嗜性器官肺脏相比发生了改变.     

PRRSV缺失变异毒株HB-2(sh)/2002在人工感染仔猪组织中的分布与定位

用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HB-2(sh)/2002滴鼻感染30日龄健康仔猪,分别于3、7、14、28、42天宰杀,用免疫组化法对呼吸道,泌尿道,生殖道和消化道的主要器官以及脑和主要淋巴器官中的病毒抗原进行了定位分析。结果表明,在各个时间段,病毒抗原阳性率最高的器官为呼吸道、消化道沿途的淋巴结,组织中的阳性细胞多数为巨噬细胞和树突细胞,从个别猪的脑、心肌、肝和呼吸道上皮的细胞检测到阳性信号,同时发现该毒株主要在巨噬细胞和呼吸道腺上皮细胞复制。     

感染PRRSV弱毒株后仔猪病毒血症和抗体产生规律

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒株在仔猪体内的增殖及其诱导抗体产生的规律。本试验将PRRSV CH-1R弱毒株肌肉注射免疫9头45日龄健康仔猪,于免疫后0,7,14,28,35和42 d通过前腔静脉采取新鲜血液,利用实时荧光定量PCR方法检测PRRSV在猪体内的增殖,ELISA方法检测抗PRRSV抗体,并利用基于PAM细胞建立的中和试验检测中和抗体。结果显示:PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后7 d病毒在100%仔猪体内开始复制,免疫后7～14 d时100%仔猪出现病毒血症,且病毒拷贝数达到最高,28～35 d时56%仔猪病毒血症消失,42 d时67%仔猪病毒血症消失;ELISA检测发现免疫后7～14 d仔猪均未产生抗PRRSV抗体,28 d时44%仔猪开始产生抗PRRSV抗体,42 d时78%仔猪抗PRRSV抗体水平达到最高,有2头猪在0～42 d一直未检测到抗PRRSV抗体;利用基于PAM细胞上建立的检测中和抗体的方法检测,免疫后7～14 d均未产生中和抗体,28 d时仅有22%仔猪产生低水平的中和抗体,35 d时78%仔猪产生中和抗体,且在42 d时其中和抗体水平达到最高。结果表明,PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后病毒血症在7～14 d达到高峰,免疫接种后28～42 d大部分仔猪病毒血症逐渐消失,即病毒增殖随时间呈递减趋势;抗PRRSV抗体及中和抗体均在免疫接种后28 d开始出现且在42 d抗体水平达到顶峰,即抗体水平随时间呈递增趋势。抗PRRSV的ELISA抗体与中和抗体水平呈正相关,而抗PRRSV中和抗体水平与病毒增殖呈负相关,但是有33%仔猪体内一直存在病毒,表明PRRSV CH-1R弱毒株免疫仔猪后,可诱导较低水平的抗体免疫保护反应,同时也可引起较低水平的病毒血症。     

PRRSV持续性感染猪群抗体动态观察及对猪瘟疫苗免疫的影响

为了解在PRRSV持续性感染猪群中的抗体动态,对蓝耳病阳性猪场育肥猪、经产母猪、后备母猪及仔猪每周采血1次,分离血清,用RT-PCR方法检测PRRSV,ELISA试剂盒检测抗PRRSV抗体并检测猪瘟疫苗免疫后的抗体水平.结果表明,在猪群康复后PRRS抗体水平呈下降趋势,并逐渐趋向于稳定,当整个猪群再次表现临床症状时,抗体逐渐上升至一定水平,但抗原检出率较低;猪瘟疫苗免疫后抗体水平上升依然很快,免疫效果较好.     

猪瘟合并猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)感染

2004年初以来，杭州地区的几个规模化猪场陆续发生仔猪腹泻、保育猪呼吸困难的疾病，剖检见肺部呈橡皮样，全身淋巴结水肿，部分猪脾脏边缘梗死等，发病率、死亡率较高。设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）的特异性引物，进行RT—PCR或PCR检测；运用伪狂犬病（PR）鉴别试剂盒检测PR，运用免疫荧光法检测猪瘟（HC），并进行了细菌分离培养，通过全面检查认为，这几个猪场发生了猪瘟合并猪PRRSV、PCV2感染。     

猪FcγRⅢ双抗体夹心ELISA方法的建立及其在PRRSV感染猪中的初步应用

利用自行制备的FcγRⅢ多克隆抗体作为捕获抗体,鼠源抗FcγRⅢ特异性单克隆抗体作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠Ig G作为检测系统,建立了检测可溶性FcγRⅢ(s FcγRⅢ)水平的双抗体夹心ELISA方法。利用建立的该ELISA方法对感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)血清进行检测,结果显示,猪感染PRRSV后,血清中s FcγRⅢ的水平明显增高,因此s FcγRⅢ的水平可能作为PRRSV感染的预警标志。该研究结果为进一步阐释FcγRⅢ在PRRSV感染中发挥的作用奠定了基础。     

A modified live PRRSV vaccine and the pathogenic parent strain induce regulatory T cells in pigs naturally infected with Mycoplasma hyopneumoniae

Rhodococcus equi is an important respiratory pathogen of young foals for which a vaccine has long been sought. Two major impediments to effective vaccination are the functionally immature type I immune responses of neonatal foals and early exposure to the bacterium via the environment. Despite these obstacles, it appears that under specific circumstances foals can develop a protective immune response. In this study we investigated the protective mechanisms behind oral inoculation of foals with virulent R. equi bacteria. Two foals receiving an oral inoculum demonstrated accelerated development of R. equi specific cytotoxic T lymphocytes (CTL) as evidenced by significant lysis of R. equi infected, ELA-A mismatched cells at 3 weeks of age. As in a previous study, CTL were not detected until 5-6 weeks of age in two control foals. At each time point the ability of foal peripheral blood mononuclear cells (PBMC) to produce IFN-γ following stimulation with live R. equi or extracted cell wall lipids was similar to that of an adult horse control and between foals, regardless of treatment. These results provide a potential mechanism of protection which has previously been shown to occur following oral inoculation, and suggest that the early detection of CTL may be a useful marker for induction of protective immunity.