不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫效果评价及疫苗存留试验

用1 200 RID、6 000 RID和24 000 RID 3种不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫9头30日龄的断奶仔猪,检测试验猪的抗体消长和疫苗毒核酸在猪体内的存留时间,并用6头猪进行攻毒保护试验.结果表明:不同免疫剂量的试验猪其抗体水平的动态变化没有显著差异,免疫后21 d试验猪的猪瘟抗体均成阳性,63 d后至578 d猪瘟抗体阻断率仍然高于85％,应用荧光定量RT-PCR技术检测,猪瘟疫苗毒核酸在猪血液和扁桃体中的检出时间分别达28 d和42 d;免疫后370 d进行猪瘟强毒攻击后,免疫猪没有出现明显的临床症状,存活且不带毒.本研究证实,没有其他疫病和母源抗体的仔猪单次接种合理剂量的猪瘟活疫苗就能产生坚强的保护力,提出加强种猪场各种病原监测,淘汰病原阳性种猪,净化种猪群对提高猪瘟疫苗免疫效果,最终控制猪瘟具有重要意义.     

猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建

先将猪细小病毒(PPV)SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2;设计两对引物(分别引入Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个酶切位点)扩增猪圆环病毒二型(PCV2)SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-ORF2.B两质粒;经相应内切酶酶切后回收目的片段,插入PPV SC-1株VP2基因的Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个特异限制酶切位点处(分别对应于PPV VP2蛋白N端和C端1/3处),得到重组质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B.经鉴定后的质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B用Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ和ApaL Ⅰ三酶切,回收含VP2和ORF2基因的目的片段克隆至真核表达载体(pEGFP-C1),得到重组质粒pEGFP.VO.A和pEGFP.VO.B.脂质体法转染重组质粒于Cos7细胞后,采用荧光显微镜和电镜观察基因表达情况,结果仅在转染pEGFP.VO.A的样品中观察到了病毒样颗粒(VLPs).纯化VLPs免疫小鼠,结果显不能产生较好的细胞免疫和针对PPV和PCV2的特异性体液免疫,该结果表明研究中获得了PCV VP1-PCV2ORF2重组VLPs,同时也揭示PPV VPLs的N端1/3适于外源蛋白插入构建重组VLPs     

PRRSV感染致断奶仔猪肺脏和外周免疫器官的病理损伤

用PRRSV ATCC VR-2332株感染8头28日龄仔猪,同时设立2头健康对照猪.PRRSV单独感染猪分别于感染后7,17,25 d各剖杀2,3,3头,对照组于17,25 d各剖杀1头.剖杀后采集脾脏、肺脏和全身主要淋巴结(颌下淋巴结、肺门淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结)等免疫器官,用甲醛溶液固定,组织石蜡切片以观察显微病理变化.试验组猪的抗体和抗原检测结果均表明,感染后7 d血清PRRSV抗体和免疫器官组织PRRSV抗原部分呈阳性;剖检和石蜡切片结果均显示,试验猪于攻毒后,随着病程的发展,发生了不同程度的间质性肺炎及相应的显微病变,PRRSV单独感染能引起免疫器官以淋巴细胞及巨噬细胞变性坏死为特征的急性炎症变化,造成免疫损伤,进而引起免疫抑制.     

猪肺炎支原体MY-99株P46基因的序列分析

提取猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)MY-99株DNA,利用设计的一对引物扩增编码P46蛋白的基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体,挑取2个克隆株测序。测序结果表明,P46基因全长1134 bp,编码378个氨基酸,序列的182、381和734位有3个TGA,是编码色氨酸Trp的密码子。2个克隆株的测序结果与标准株232株的P46基因序列相比,其同源性分别为99.6%和99.2%。     

现场快速检测动物病原的解决方案

2013年,我国的畜牧业总产值已超过GDP的5％,然而这个与民生密切相关的产业却一直受到各种动物疾病的威胁,蒙受巨大损失。对于动物疫病的防控,无论是生产中的治疗、预防、管理还是政府的监控都必须依赖准确的诊断技术,但是面对目前复杂的疫病流行特点（隐性感染、混合感染、非典型症状、高变异）,传统的病理分析、     

猪肺炎支原体MY-99株P46基因的序列分析

提取猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae) MY-99株DNA,利用设计的一对引物扩增编码P46蛋白的基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体,挑取2个克隆株测序。测序结果表明,P46基因全长1134 bp,编码378个氨基酸,序列的182、381和734位有3个TGA,是编码色氨酸Trp的密码子。2个克隆株的测序结果与标准株232株的P46基因序列相比,其同源性分别为99.6%和99.2%。