| 猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建 |
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| 引用本文： | 朱玲,郭万柱,蒋清蓉,徐志文,熊丁杰,张博,王印,赵玲.猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建[J].农业生物技术学报,2010,18(3):431-436. |
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| 作者姓名： | 朱玲 郭万柱 蒋清蓉 徐志文 熊丁杰 张博 王印 赵玲 |
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| 作者单位： | 四川农业大学动物生物技术中心,雅安,625014 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，"长江学者和创新团队发展计划"创新团队项目，四川省教育厅重点实验室项目 |
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| 摘 要： | 先将猪细小病毒(PPV)SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2;设计两对引物(分别引入Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个酶切位点)扩增猪圆环病毒二型(PCV2)SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-ORF2.B两质粒;经相应内切酶酶切后回收目的片段,插入PPV SC-1株VP2基因的Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个特异限制酶切位点处(分别对应于PPV VP2蛋白N端和C端1/3处),得到重组质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B.经鉴定后的质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B用Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ和ApaL Ⅰ三酶切,回收含VP2和ORF2基因的目的片段克隆至真核表达载体(pEGFP-C1),得到重组质粒pEGFP.VO.A和pEGFP.VO.B.脂质体法转染重组质粒于Cos7细胞后,采用荧光显微镜和电镜观察基因表达情况,结果仅在转染pEGFP.VO.A的样品中观察到了病毒样颗粒(VLPs).纯化VLPs免疫小鼠,结果显不能产生较好的细胞免疫和针对PPV和PCV2的特异性体液免疫,该结果表明研究中获得了PCV VP1-PCV2ORF2重组VLPs,同时也揭示PPV VPLs的N端1/3适于外源蛋白插入构建重组VLPs
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| 关 键 词： | 猪细小病毒 猪圆环病毒2型 病毒样颗粒 重组 |
Discovery of Candidate Site in Virus-like Particles(VLPs)of Porcine Parvovirus(PPV)for Inserting Foreign Protein and the Construction of the Recombinant VLPs Contained the ORF2 Protein of Porcine Circovirus Type 2(PCV2) |
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| Zhu Ling,Guo Wanzhu,Jiang Qingrong,Xu Zhiwen,Xiong Dingjie,Zhang Bo,Wang Yin,Zhao Ling.Discovery of Candidate Site in Virus-like Particles(VLPs)of Porcine Parvovirus(PPV)for Inserting Foreign Protein and the Construction of the Recombinant VLPs Contained the ORF2 Protein of Porcine Circovirus Type 2(PCV2)[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2010,18(3):431-436. |
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| Authors: | Zhu Ling Guo Wanzhu Jiang Qingrong Xu Zhiwen Xiong Dingjie Zhang Bo Wang Yin Zhao Ling |
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