猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

从天津市郊县某猪场发病仔猪脑中分离到一株病毒。该病毒接种鸡胚绒毛尿囊膜有白色的痘斑出现,接种PK-15和BHK-21细胞出现典型的细胞病变,毒价(TCID50)为10-6/mL,且能被PRV阳性血清中和;将病毒给家兔注射后出现典型的伪狂犬病症状并导致死亡。通过上述试验结果证明,该分离毒株为伪狂犬病毒。     

鸡新城疫超强病毒株的分离鉴定与免疫研究

从重庆市发病地区分离到一株鸡新城疫病毒,经流行病学调查、鸡胚接种、细胞培养、血凝与血凝抑制试验及动物实验鉴定,证明为一株超强新城疫病毒.病料接种鸡胚2～3天死亡,接种的鸡胚成纤维细胞,48～72h出现细胞病变,分离的病毒能凝集鸡红细胞,HA效价6～7log2,该凝集特性被标准新城疫血清所抑制,动物实验接种的小鸡2～6天死亡.流行地区鸡注射由分离病毒制备的油乳剂疫苗,不再表现临床症状,可有效地控制该病的流行.     

一种新的丹顶鹤病毒病的研究

本病是在我国发现的尚未见报道的丹顶鹤病毒性传染病。患鹤肝脏肿大。实验表明,人工感染雏鹅和成年鹅能引起发病和死亡;该病毒还可致死鹅胚、鸭胚和鸡胚,并能在鹅胚和鸭胚成纤维细胞上产生细胞病变。该病毒有囊膜,呈球形,大小约为130-180nm,无囊膜颗粒为95-105nm在CsCl里浮密度为1.29-1.34g/cm#+3,沉降系数为83.4s,对pH3.0敏感,而对pH5.0有抵抗力,1克分子MgCl#-2溶液对病毒无保护作用。该病毒不凝集禽类及动物红细胞。中和试验表明本病毒与小鹅瘟病毒、新城疫病毒、鸡马立克氏病病毒、法氏囊病病毒、鸭瘟病毒、小鸭肝炎病毒和猪瘟病毒没有抗原关系。     

贵州新城疫分离物的形态学观察与细胞病变效应

贵州新城疫病毒分离物能够在鸡胚成纤维细胞上表现生长，引起特征性的细胞病变效应。本试验用鸡胚成纤维细胞增殖病毒，观察细胞病变；同时采用血凝试验、间接荧光抗体试验检测感染细胞的病毒抗原。结果表明，接种病毒的细胞24h即可观察到细胞病变——合胞体巨细胞的形成；培养上清液和感染细胞的血凝效价分别达到2^3和2^6；用间接荧光抗体试验在细胞浆中观察到特异性黄绿色荧光；电镜观察到大多数病毒粒子呈球彤．直径100-150nm．囊膜清晰．可见柱状紧密排列的纤突结构．     

一种鹅病毒病病原的形态观察和理化特性的测定

为更好地了解鹅病毒病病原的形态和理化特性,用鸡胚尿囊液(EVF4)进行试验：用2种红细胞(1种用甲醛醛化,另1种不醛化)进行吸附和纯化,最终得到EVF4-1和EVF4-2,并用电镜观察,进行血凝和血凝抑制试验,毒力及理化特性测定。结果表明：该病毒形态近似球形,有囊膜,直径大小为120～220nm;其血凝效价从高到低依次为鹅、豚鼠、山羊、牛、兔、猪、鸡、鸭、人的“O”型红细胞,对小白鼠红细胞不凝集;血凝抑制试验时,发现能被相应的血清和鸡新城疫血清所抑制;对ELD50为10^-5.3,鸡胚平均死亡时间为96h;对乙醚、氯仿敏感;胰蛋白酶不敏感;不耐酸,对热较敏感。     

鸡新城疫超强病毒株的分离鉴定与免疫研究

从重庆市发病地区分离到一株鸡新城疫病毒,经流行病学调查,鸡胚接种,细胞培养,血凝与血凝抑制试验及动物实验鉴定,证明为一株超强新城疫病毒。病料种鸡胚２￣３天死亡,接种的鸡胚成纤维细胞,４８￣７２ｈ出现细胞病变,分离的病毒能凝集鸡药细胞,ＨＡ效价６￣７ｌｏｇ２,该凝集特性被标准新城疫血清所抑制,动物实验接种的小鸡２￣６天死亡。流行地区鸡注射由分离病毒制备的油乳剂疫苗,不再表现临床症状,可有效地控制该病     

鸡传染性支气管炎病毒豫北株的分离与鉴定

[目的]分离与鉴定鸡传染性支气管炎病毒。[方法]从豫北某蛋鸡场疑似鸡传染性支气管炎的病鸡中采集气管分泌物、肾脏等组织分离病毒,进行血凝试验、NDV干扰试验,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对HN07的纤突蛋白S1基因进行扩增、克隆和序列测定。[结果]结果表明,分离到1株病毒,经连续鸡胚传代后,出现侏儒胚和蜷缩胚;血凝试验中,尿囊液无血凝性,而经胰酶处理后有血凝性;NDV干扰试验中,分离的尿囊液明显干扰NDV的增殖;病毒回归试验中病毒可引发接种鸡37.5%死亡;RT-PCR检测试验中,扩增到了约为1.7 kb的目的片段。DNAstar软件分析表明,测定基因具有IBVS1基因的共有分子特征,而且分离株HN07和HD株S1的同源性最高,核苷酸同源性为93.6%。[结论]分离的病毒株HN07为鸡传染性支气管炎病毒。     

叶下珠抗新城疫病毒活性成分的筛选

[目的]筛选中草药叶下珠中的抗病毒活性成分,为开发治疗禽类病毒性疾病的新药提供条件。[方法]分别用75％乙醇（E）和纯净水（PF）煎煮叶下珠全草,再分别以石油醚（PE）、乙酸乙酯（EA）、正丁醇（BU）萃取其活性成分。将萃取物分别接种鸡胚成纤维细胞（CEF）,观察其对NDV病变的抑制作用;分别接种鸡胚,观察其对NDV血凝效价的影响;分别接种鸡,统计鸡群的死亡率,评价其免疫保护效果。[结果]E-PE、E-BU组萃取物均能明显抑制NDV在CEF细胞上的病变和显著抑制NDV在鸡胚内的增殖（P〈0.05）,以E-BU较好;E-PE、E-BU组的鸡只存活率均极显著高于利巴韦林对照组和生理盐水对照组（P〈0.01）,以E-PE组保护率较高。[结论]叶下珠水提取物效果较差;醇提取物E-PE组和E-BU组能有效抑制NDV病毒病变及其在鸡胚内增殖,对NDV的免疫保护效果较好。     

一株鸭源H9亚型禽流感病毒在鸡胚上传代及繁殖规律的研究

对一株从发病鸭体内分离到的H9亚型禽流感病毒株[A/Duck/NanJing/1/1999(H9N2),简称NJ01]进行了传代及繁殖规律的研究。将其在10日龄SPF鸡胚上传至15代,测定血凝价及平均死亡时间。取第3 (E3)、5(E5)、10(E10)、15(E15)代次的毒种稀释至不同浓度,接种10日龄、11日龄SPF鸡胚及非免疫鸡胚,对收获毒液量及血凝价(HA)、病毒含量(ELD_(50))进行比较。同时对接种10~(-4)稀释的第3代毒种死亡鸡胚各组织所含病毒的HA进行测定。结果显示,NJ01株经传代其平均死亡时间为53～64 h,HA为9～11 log_2；E3、E5、E10、E15毒种的ELD_(50)分别为10~(8．83)/0．1 ml、10~(9.0)/0．1 ml、10~(8.33)/0．1 ml、10~(8.32)/0．1 ml；将E3毒种稀释至10~3、10~4、10~5倍接种鸡胚,对病毒繁殖收获量有一定的影响,平均死亡时间延长,经10~(-4)稀释后接种11日龄SPF鸡胚的病毒繁殖效果最好；死亡鸡胚以尿囊液和尿囊膜所含病毒的HA最高,达9～10 log_2,肝、肺及其他组织HA较低,为1～5 log_2。     

H9N2亚型猪流感病毒的增殖及毒力测定

目的将H9N2亚型猪流感病毒(H9N2-SIV)进行增殖并测定其毒力。方法采用鸡胚尿囊腔增殖法,将病毒接种于10日龄SPF鸡胚进行增殖,血凝(HA)试验测定病毒液效价,Reed-Muench法测定病毒的鸡胚半数感染量(EID50)和小鼠半数致死量(MLD50)。结果经过增殖后,H9N2-SIV血凝效价为1∶256,EID50=10-6.5·0.1mL-1,MLD50=10-2.32·0.l mL-1。结论 H9N2-SIV可以作为进一步试验用病毒。     

麻鸡疫病病原的分离与鉴定

通过对致麻鸡发病的病毒毒株的分离,经电镜观察、血液凝集试验、病毒中和试验、动物回归试验、鸡胚接种试验等结果表明,病毒粒子呈球形,表面有囊膜,直径100~450 nm,能凝集鸡红细胞,血凝反应能被新城疫标准阳性血清抑制,能致4周龄鸡发病死亡,MDT为38.2 h,ICPI为1.68,IVPI为2.33。病毒对氯仿、胰酶及酸敏感,能被二价镁离子保护,在4℃放置30 min,其感染力无影响,但对热敏感。以上试验结果表明,病毒为新城疫强毒株。     

鸡包涵体肝炎病毒内蒙古毒株的分离与鉴定

本试验利用鸡包涵体肝炎自然病例的肝组织，通过SPF鸡胚连续传代和鸡胚肾细胞培养，分离到一株鸡包涵体肝炎病毒HA株。该病毒的核酸型为DNA、无束膜、对乙醚、氯仿具有抵抗力；且其对酸有抵抗力，对热敏感。电镜观察发现，病毒粒子呈球形，直径约80－100nm。有2、3、4、5、8型的标准阳性血清进行中和试验，证明HA株为血清型2型。回归试验表明HA株具有较强的致病性。     

鸭肝炎病毒形态及接种鸡胚引起的病理变化观察

本文研究应用免疫电镜技术观察DHV形态,并对DHV接种鸡胚引起的病理变化进行观察。 DHV颗粒为球形,无囊膜,直径约为15～20毫微米。 将DHV接种10天龄鸡胚,接种后于一定的时间间隙,直至鸡胚死亡,取鸡胚的肝和脑分别制样,用光学显微镜和电子显微镜观察其病理变化。在光镜下,可见肝窦淋巴细胞浸润,肝细胞变性和坏死,肝脏充血出血,大脑脑软膜淋巴细胞浸润和大脑毛细血管充血。肝脏的电镜检查,可见肝细胞间隙有很多泡囊,肝细胞胞浆出现电子密度很高的颗粒状物和空泡,核固缩,最后,核膜皱曲和破裂,细胞膜裂开,细胞器减少或消失。脑的电镜观察,可见脑神经细胞的内质网扩张形成小圆泡,核膜皱曲和破裂。细胞膜也破裂,细胞器溢出。 在肝组织的狄斯隙中可见病毒样颗粒,在靠近细胞膜的胞浆中发现病毒样颗粒被包在由膜围成的泡囊中。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病原特性与多肽分析

从患传染性腺胃病的病鸡中分离到４株病毒,其中Ｈ９５株在ＳＰＦ鸡胚上已稳定传代。病料及Ｈ９５传代后的鸡胚尿囊液经工和ＣｓＣｌ密度梯度离心后的纯化物,电镜下为大小８０－１６０ｎｍ、有囊膜的病毒颗粒、囊膜表面有纤突,呈冠状形态。病毒在ＣｓＣｌ中的浮密度为１．１９－１．２３ｇ／ｃｍ＾３,对热和氯仿敏感,而酸,能抵抗１％胰酶,无直接血凝性,经卵磷脂酶Ｃ处理后的病毒则能凝集鸡红细胞,能干扰新城疫病毒在鸡胚上的     

鸡传染性支气管炎(IB)诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒（IBV）,收集尿囊液,用1％胰蛋白酶处理制备IBV血凝抗原,建立了血凝—血凝抑制（HA—HI）检测IBV抗体的方法,其特异性强、操作简便。另外,本试验建立Dot—ELISA方法用于检测IBV,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗IBV抗体,经PPA—DAB—H_2O_2系统显色,其检测结果与双抗体夹心ELISA的检测结果一致。两种诊断方法的建立为临床上检测病原和监测抗体提供了便捷的手段。     

牛病毒性腹泻病毒地方株的分离与鉴定

从河南省不同地区规模化肉牛场牛病毒性腹泻 (BVD)疑似病例中采集病料 ,将处理好的 6份病料接种MDBK细胞 ,并盲传 4代 ,得到了 2株可产生细胞病变的病毒。 2株病毒的TCID50 分别为 10 - 5.59和 10 - 5.51;琼脂扩散试验表明 ,2株病毒均能与牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)OregonC2 4 标准阳性血清反应 ,出现沉淀线 ;中和试验表明 ,2株病毒均能被BVDV标准阳性血清中和 ,中和指数分别为 10 3.30 和 10 3.16 ;电镜观察到圆形 ,直径为 4 0～ 6 0nm ,有囊膜 ,囊膜表面有突起的病毒粒子 ,与BVDV颗粒基本一致。因此 ,确定分离的 2株病毒均为BVDV ,分别将其命名为HN - 1株和HN - 2株。     

鸡产蛋下降综合症（EDS—76）Z16毒株的分离和鉴定

从５个爆发产蛋下降综合的鸡场收集８０个样品中，分离到５株具血凝性的病毒，命名为ＣＡＶ－Ｚ１６、Ｚ２、Ｗ４、Ｔ１和Ｔ３株。病毒大小７０－８０ｎｍ，无囊膜，二十面体对称；对氯仿不敏感，ＰＨ３－５下稳定，５０～６０℃１小时不被实例灭活；在ＤＥＦ细胞上繁殖能被ＩＵＤＲ抑制；经血凝抑制试验、琼扩试验和微量中和试验证实与ＡＶ－１２７株属同一血清型，鉴定为ＥＤＳ－７６病毒。ＣＡＶ－Ｚ１６株能在鸭胚上繁殖，致死鸭     

用反向遗传8质粒系统构建流感H1N1重组病毒

为了建立用于流感病毒拯救的反向遗传操作系统,用RT-PCR方法扩增得到A型流感病毒流行株A/shanghai/7/99的HA和NA基因,将其克隆到pGEM-T载体上并测序,挑选阳性克隆分别用BsmBⅠ、BsaⅠ酶切,连接到以BsmBⅠ酶切的双向转录/表达载体pAD3000上,获得重组质粒pAD-HA和pAD-NA,分别与含A/PR/8/34流感病毒7个基因的阳性质粒共转染COS-1细胞,拯救了重组病毒R-HA-PR8和R-NA-PR8,说明构建的重组质粒pAD-HA和pAD-NA是正确的,将pAD-HA和pAD-NA与含A/PR/8/34流感病毒6个基因的阳性质粒共转染COS-1细胞,培养48 h后吸取上清液及COS-1细胞,接种10日龄SPF鸡胚,孵育96 h后,收获鸡胚尿囊液进行血凝和血凝抑制试验。结果显示,鸡胚尿囊液中重组病毒H1N1的血凝效价和血凝抑制效价均为29,鸡胚半数感染剂量为10-8.5~10-9。病毒的成功拯救为进一步深入研究流感病毒的基因功能以及流感新型疫苗的研发奠定了基础。     

禽脑脊髓炎病毒的鉴定

对分离到的AEV毒株进行氯仿、乙醚、温度敏感性试验等理化性质及血凝性质的鉴定,表明该毒株理化件质稳定,无血凝性;电镜下观察接毒鸡胚的超薄切片可看到AEV病毒颗粒,大小在25～30 nm.参照AEV的基因序列设计了一对引物,对该病毒进行了特异性扩增,得到了目的片段.证明该分离病毒为AEV毒株,暂定名为AEV HD.     

鸡包涵体肝炎病毒内蒙古毒株的分离与鉴定

本试验利用鸡包涵体肝炎自然病例的肝组织，通过SPF鸡胚连续传代和鸡胚肾细胞培养，分离到一株鸡包涵体肝炎病毒HA株．该病毒株的核酸型为DNA、无束膜、对乙醚、氯仿具有抵抗力；且其对酸有抵抗力，对热敏感。电镜观察发现，病毒粒子呈球形，直径约80～100nm。用2、3、4、5、8型的标准阳性血清迸行中和拭验，证明HA株为血清型2型。回归试验表明HA株具有较强的致病性。