Dot—PPA—ELISA联合检测猪PRV.Brucella和Chlamydia抗体方法的建立和应用研

首次将Ｄｏｔ－ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ用于联合检测猪衣原体、伪狂犬病毒和布氏杆菌抗体,并进行了较大规模的田间猪血清检测。实验对制作诊断膜片的工艺流程和关键材料做了细致研究,并进行同步监测、分析。确定了本方法的最佳反应条件和阳性标准。联合诊断膜片（简称膜片）具有良好特异性、灵敏性和稳定性。诊断膜片在４℃保存８个月、室温（１５～２５℃）保存２个月、３７℃保存１个月灵敏性,特异性不变。１：６４、１：１２８、１：６４为联合检测猪伪狂犬病、衣原体病和布氏杆菌病抗体的阳性标准。结果表明,Ｄｏｔ－ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ联合检测法操作方便、快速,结果客观,易于判读,诊断膜片便于寄送、保存,性能稳定、可靠,并能同时检测多种疫病等优点,适宜应用于猪衣原体病、伪狂犬病和布氏杆菌病抗体的联合检测。     

应用Dot-PPA-ELISA检测猪布氏杆菌病抗体的研究

本试验以布氏杆菌SAT为对照试验,建立了Dot-PPA-ELISA检测猪布氏杆菌病抗体的方法,该法检测的猪IgG含量可达6.992×10     

微量干血纸McAb ElisA竞争法检测猪瘟抗体

用抗ＨＲｐ－ＳＦＶＭｃＡｂ建立了ＥｌｉｓＡ竞争方法。对７２份注射兔化疫苗后的猪微量于血纸浸出液和血清进行检测，结果表明该法具有特异、敏感、快速和简便等特点，与ＳＰＡ－ＥｌｉｓＡ检测结果呈现显著正相关，互相一致，它正确反映了猪群注射疫苗后的免疫水平，因此该法可用于免疫监测。     

PP333对水稻叶片衰老过程中内源GA4和ABA含量的调节作用

ＰＰ_（３３３）对水稻叶片衰老过程中内源ＧＡ_４和ＡＢＡ含量的调节作用俞炳杲，严景华（南京农业大学农业与生命科学学院，南京２１００９５；安徽农学院）ＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮＯＦＰＰ_（３３３）ＯＮＥＮＤＯＧＥＮＯＵＳＧＡ_４ＡＮＤＡＢＡＬＥＶＥＬＳＩＮＲＴＣ...     

鸡传染性支气管炎（IB）诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒,收集尿囊液,用１％胰蛋白酶处理制备ＩＵＢＶ血凝抗原,建立了血凝－血凝抑制检测ＩＢＶ抗体的方法,其特异性强,操作简便。另外,本试验建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法用于检测ＨＢＶ,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗ＩＢＶ抗体,经ＰＰＡ－ＤＡＢ－Ｈ２Ｏ２显色,其检测结果与双抗体夹心ＥＬＩＳＡ的检测结果一致。     

抗原捕捉间接ELISA检测IBDV—vero细胞毒方法的建立

建立了检测用ｖｅｒｏ细胞增殖ＩＢＤＶＸ,Ｎ毒滴度的抗原捕卟间接ＥＬＩＳＡ法,并与常规ＴＣＩＤ５０测定法作了比较,结果表明,ＡＣＩ－ＥＬＩＳＡ法测定的Ｐ／Ｎ值与ＴＣＩＤ５０呈明显的正相关,与Ｘ,Ｎ毒的相关系数分别为０．９６６８,０．９３８。ＡＣＩ－ＥＬＩＳＡ法可用于ＩＢＤＶ－ｖｅｒｏ细胞毒的定量监测     

稻褐飞虱成虫的羽化节律

稻褐飞虱成虫的羽化节律戴华国杨亦桦吴小毅（南京农业大学植物保护学系，南京２１００９５）ＡＤＵＬＴＥＭＥＲＧＥＮＣＥＲＨＹＴＨＭＯＦＢＲＯＷＮＰＬＡＮＴＨＯＰＰＥＲＮＩＬＡＰＡＲＶＡＴＡＬＵＧＥＮＳ（ＨＯＭＰＴＥＲＡ：ＤＥＬＰＨＡＣＩＤＡＥ）ＤａｉＨ...     

ABC—Dot—ELISA快速检测食品中单核白细胞增多症李氏杆菌

本实验采用ＡＢＣ一Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测食品中单核白细胞增多症李氏杆菌。该法可检出在蛋白胨增菌液中接种的单核白细胞增多症李氏杆菌．其敏感性可达１０４个／ｍｌ，比Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ约高１０—１００倍．特异性检测表明，其不与沙门氏菌、小肠结肠耶氏菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌发生交叉反应，但与葡萄菌和大肠杆菌有交叉反应．该法在２６ｈ内可报告结果，比常规法快３—５ｄ。对２３１份各种食品进行检测，检出４１份，经生化试验复检，３８份为单核白细胞增多症李氏杆菌，阳性率１６．４５％，假阳性率７．３２％，常规法的检出率１７．３１％。两种方法比较，结果相差不显著（Ｐ＞０．０５）。进行３次重复性试验，结果完全相同。实验结果表明，该法操作简便快速，具有较高的特异性和敏感性，可在２６ｈ报告结果，适于对大批样品进行快速检测，便于基层推广使用．     

分泌抗BVDV McAb杂交瘤细胞株的建立

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）感染ＭＤＢＫ细胞,将感染细胞培养物冻融后离心取上汪经ＰＥＧ沉淀浓缩抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清抗体效价高遥免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合,产生杂交瘤细胞,用间接ＥＬＩＳＡ法检测杂交瘤细胞生长孔上清,筛选阳性杂交瘤细胞株。以有限稀法克隆２－３次,得到８ 泌抗ＢＶＤＶ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。８株ＭｃＡｂ对ＢＶＤＶ,猪瘟均呈阳性反应。杂交     

ABC─Dot─ELISA快速检测食品中沙门氏菌

本试验采用生物素—亲和素酶复合物—斑点酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ—Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ）检测食品中沙门氏菌。该法可检出ＩＳＣ液中接种的沙门氏菌。其敏感性可达１０４—１０５千个／Ｌ，比常规免疫酶法和免疫荧光法提高１０—１００倍。特异性检测表明，其与大肠杆菌、变形杆菌、产气杆菌未发生交叉反应。该法在２４ｈ内可报告结果，比常规法至少快３—４ｄ。对２００份食品检样进行检测，检出１９份，检出率９．５％，与常规法检测结果平行比较，漏检率仅为０．５％，结果相差不显著（Ｐ＞０．０５）。进行３次重复性试验，结果完全相同。试验结果表明，该法操作简便、敏感、快速，具有较高的特异性，适于对大批样品进行快速检测。     

猪乙型脑炎新型协同凝集试验与酶联免疫吸附试验(ELISA)方法的比较

用新型SPA(Staphylococcal Protein A)协同凝集试验对88份猪血清进行了乙型脑炎病毒(JEV)抗体检测,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行了对比,两种方法检测结果为:ELISA检测阳性率为62.5%(55/88),SPA阳性率为68.18%(60/88),二者阳性符合率为90.0%(54/60),总符合率为86.3%(76/88).对8份SPF猪血清进行检测,两种方法检测结果均为阴性.结果表明,SPA与ELISA检测乙型脑炎结果符合,前者更为简便和实用.     

布氏杆菌病检测技术的研究进展

综述了检测布氏杆菌病的新老方法。布氏杆菌病(Brucellosis)在全球引起巨大的经济损失,对人危害严重,基因苗即将为其防制提供保障。认为,细菌学检验和凝集试验测将淘汰;沉淀试验和补体结合试验不理想;放射免疫试验不能广泛运用;变态反应主要用于绵羊,也用于山羊的筛检,不作山羊个体的诊断依据。竞争酶联免疫吸附试验尚无诊断标准。间接酶联免疫吸附试验是一种先进、快速、可靠的新方法,但不能区别疫苗抗体与致病株抗体。PCR可检1pg的布氏杆菌DNA,应用细菌DNA检测是最可靠的方法。最近建立的荧光探针分析可在野外快速准确地诊断,可用于家畜和野生动物的检测。     

Dot-ELISA快速检测鱼类运动性气单胞菌的研究

制备了引起常见鱼病的６株运动性气单胞菌的兔抗血清，建立了检测运动性气单胞菌的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法。该法能检出含１０７菌细胞／ｍＬ的菌悬液及１０个菌细胞／ｍＬ增菌２０ｈ的培养物，与运动性气单胞菌群内的菌株，均呈现明显的阳性反应，不与鲁克耶尔森氏菌、荧光假单胞菌、鳗弧菌等１０株对照菌发生影响检测结果的交叉反应。应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ与常规分离法分别对人工感染的４０份样本进行检测，其阳性数分别为３３和３４，两法符合率为９７％。经Ｘ２检验表明，两法检测结果间有显著意义的一致性（Ｐ＜０．０５），但前者可在２４ｈ内报告结果。应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ又对８株鱼源菌检定，结果与细菌学检查相符。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有快速、敏感、特异、实用的优点，可用于引起常见鱼病的运动性气单胞菌群的检测。     

布鲁氏杆菌LPS抗原制备及其免疫原性测定

采用热酚水法提取布鲁氏杆菌脂多糖,分离、纯化并SDS-PAGE银染鉴定。纯化的细菌内毒素免疫小鼠,通过斑点ELISA测定血清抗体效价,检测细菌内毒素免疫原性。采用热酚法能获得较高纯度的细菌内毒素,其免疫原性较高,斑点ELISA测血清效价达到1∶1 000 000,与全菌免疫原性接近。本研究为制备布鲁氏杆菌单克隆抗体和建立布鲁氏杆菌病快速诊断方法奠定研究基础。     

标记抗体染色法检查布氏杆菌的研究

为了建立一种快速、简便、敏感、特异地检测动物病理材料中布氏杆菌的方法,选用四种标记抗体法,对5种共15个生物型的布氏杆菌,以及大量与流产有关或常常污染病理材料的对照细菌,分别进行了纯菌、感染实验动物及牦牛组织材料的染色检查,并与柯氏染色法及细菌分离培养法进行了比较。结果表明,四种方法对于各种材料中的布氏杆菌(粗糙型犬布氏菌除外)均呈阳性反应,而绝大多数对照菌均呈阴性反应。其中尤以SPA法染色背景更为清晰,非特异性反应更少。这些方法既简便、快速,检出率也较高。对于布氏杆菌病的诊断和疫情监测,是很有价值的。     

奶牛布鲁氏菌病病原PCR检测方法的建立

为了弥补血清学和细菌学方法检测和诊断奶牛布鲁氏菌病存在的不足,根据编码牛种布鲁氏菌31KDa外膜蛋白基因的核苷酸序列设计了1对PCR引物,通过对影响PCR扩增条件的优化,建立了快速检测奶牛布鲁氏菌病病原的PCR方法。特异性检测表明,在同一反应条件下,该引物对引起奶牛布鲁氏菌病的牛种、羊种、猪种布鲁氏菌制备的模板DNA均能扩增出384bp目的基因片段,而对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、马流产沙门氏杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌制备的模板分别进行扩增均呈阴性。敏感性检测显示,最低可检出1.5pg的模板DNA。结果表明:本试验所建立的奶牛布鲁氏菌病病原PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性。     

基于RBT与SAT控制奶牛布氏杆菌病的效果分析

为了解虎红平板凝集试验(RBT)初筛、试管凝集试验(SAT)确诊并捕杀阳性者对奶牛布氏杆菌病(Brucellosis)的控制效果,2009-2010年,持续监测12个感染程度各异的新建奶牛群。结果表明,当牛群初始感染率较低时,借助RBT与SAT能在较短时期内有效控制并净化布氏杆菌病;但在牛群感染率较高的情况下,上述手段不能有效控制感染扩散。减毒活疫苗模拟感染试验进一步证实,RBT和SAT阳性结果的出现严重滞后于牛群真实感染,这可能是其不能有效防控布氏杆菌病扩散的重要原因。     

Development of a recombinant pB602L-based indirect ELISA assay for detecting antibodies against African swine fever virus in pigs

African swine fever (ASF), caused by the African swine fever virus (ASFV), is a devastating disease of domestic and wild pigs. There is no effective vaccine, and the control of the disease relies mainly on surveillance and early detection of infected pigs. Previously, serological assays, such as ELISA, have been developed mainly based on recombinant structural viral proteins of ASFV, including p72, p54, and p30. However, the antibodies against these proteins do not provide efficient protection against ASFV infection in pigs. Therefore, new serological assays that can be applied for clinical diagnosis and evaluating serological immune response in vaccinated pigs are still required. In this study, we expressed and purified a recombinant pB602L protein. The purified pB602L protein was then used as an antigen to develop an indirect ELISA assay. This assay has no cross-reaction with the anti-sera against the 15 most common pig pathogens in China, such as classical swine fever virus, pseudorabies virus, and porcine parvovirus. This assay and a commercial ELISA kit were then used to detect 60 field pig serum samples, including an unknown number of anti-ASFV sera. The coincidence of the two assays was 95%. Furthermore, the pB602L-based ELISA was employed to test the antibody responses to the seven-gene-deleted ASFV strain HLJ/18-7GD in pigs. The results showed that the antibody levels in all vaccinated pigs, starting from the 10th day post-inoculation, have increased continuously during the observation period of 45 days. Our results indicate that this pB602L-based indirect ELISA assay can be employed potentially in the field of ASFV diagnosis.     

斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病

[目的]探讨斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病的可行性,为制备诊断猪蛔虫病试剂盒提供参考依据。[方法]采用猪蛔虫的重组蛋白AS16抗原和胶体金标记葡萄球菌蛋白A（SPA）,根据免疫渗滤原理,建立抗猪蛔虫抗体的斑点金免疫渗滤检测法。[结果]斑点免疫金渗滤法检测1200份猪血清样本中猪蛔虫抗体,检出阳性率为25.00%,而琼脂扩散试验（AGP）阳性检出率为15.00%。[结论]斑点金免疫渗滤检测法具有操作简便,灵敏度高,特异性强的优点,可用于猪蛔虫病的快速检测。     

猪囊尾蚴病特异诊断试验研究

Improved ELISA法诊断猪囊尾蚴病不仅特异性强、检出率高,没有交叉反应。还具打反应时间短、操作简便、被检血量[0.01ml-30~x/3]极低、采血方便、诊断结果易于眼观判定等优点。诊断抗原的研制打破常规法,可在短时间内研制出高纯度、高效价的抗原。本法已在我国9省70多县(旗、市)推广,诊断了80多万头猪,深受基层欢迎。