黄帝陵古侧柏花粉生活力及其保存方法的研究

以黄帝陵千年古侧柏花粉为试验材料,用离体萌发法测定花粉的生活力,研究不同保存方法对花粉萌发率的影响,探讨花粉含水量、投入方式、化冻方式对超低温保存效果的影响。结果表明:古侧柏花粉在9%蔗糖+0.01%硼酸的培养基中离体培养4 d萌发率最高。90 d内,随着保存时间的延长,室温（20℃）保存的花粉迅速失活,低温（0℃、-20℃）保存的花粉萌发率呈逐渐下降趋势,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率最高且保持效果最好,为古侧柏花粉长期保存的适宜方法。在超低温保存中,花粉以未经干燥、直接投入液氮、37℃恒温水浴化冻5 min保存效果最好;花粉含水量、投入方式、化冻方式之间交互效应显著。     

现代月季6个品种花粉超低温保存研究

【目的】为实现月季花粉长期保存,满足杂交育种和种质资源保存需要,本文以6个现代月季品种的花粉为试验材料,研究其超低温保存技术。【方法】用扫描电子显微镜观察比较6个品种花粉形态、干燥法测定花粉自然含水量、悬滴法检测花粉活力,筛选出适宜萌发培养液,在此基础上进行了液氮保存,并研究这些因素对超低温保存效果的影响。【结果】6个品种花粉悬滴培养的适宜萌发液为15%蔗糖+0.05%硼酸。不同品种新鲜花粉萌发率不同,春季采收的新鲜花粉萌发率为8.91%～27.07%,秋季为9.95%～24.32%,6个品种春季采集的花粉萌发率均高于秋季,但3个差异显著,3个差异不显著。不同品种新鲜花粉含水量不同,春季采收的花粉含水量为9.6%～11.9%;秋季为9.2%～11.5%,4个品种春、秋两季采收的花粉含水量没有显著差异,另外2个品种春季采收的花粉含水量分别显著高于或低于秋季花粉2.4%或1.6%,含水量变化值差异不大。超低温保存后花粉萌发率变化因品种和花粉采收季节而异,6个月季品种花粉经过液氮保存1个月后萌发率为10.36%～21.28%,为新鲜花粉的59.3%～133.9%。长球形的‘金凤凰’和‘希望’,超低温保存后花粉活力有所下降;而超长球形的‘金玛丽’、‘雨果’、‘伦特娜’和‘仙境’,超低温保存后萌发率基本保持稳定。花粉含水量与花粉超低温保存前后萌发率未显著相关。【结论】不同季节采收的自然成熟散粉的6个月季品种花粉均能实现超低温保存,秋季采收的花粉液氮保存后萌发率较新鲜花粉变化较小,但是春季采收的花粉萌发率更高,更适合超低温保存。超低温保存效果与品种、新鲜花粉萌发率、花粉形状和采收季节有关。     

桃叶卫矛花粉超低温保存

研究桃叶卫矛花粉萌发所需蔗糖和硼酸的最佳浓度、培养时间、培养环境以及花粉日活力的变化,分析不同含水量和不同解冻方式对花粉超低温保存效果的影响。结果表明:桃叶卫矛花粉培养基中蔗糖和硼酸最适浓度配比为100 g/L蔗糖+150 mg/L硼酸;最适培养环境和培养时间为室温条件下光照培养2 h;1 d中花粉活力最高的时间为16:00;经超低温(-196℃)保存后,含水量为4.14%的花粉经室温化冻30 min后,萌发率最高。     

密花石斛花粉的保存方法研究

研究了密花石斛花粉不同保存方法下的花粉寿命,并对密花石斛花粉的超低温保存技术程序进行了研究。 结果表明:1)密花石斛花粉采用室温（(27±2)℃）、冷藏（4℃）、冷冻（-20℃）保存,花粉寿命分别为5、23、17 d,超低温保存(-196℃)的花粉120 d后仍可检测到花粉萌发,且萌发率与新鲜花粉相同,超低温保存方法至少可以保存密花石斛花粉4个月;2)密花石斛花粉超低温保存的程序为新鲜花粉（含水量43.26%）直接投入液氮（LN）保存,需用时采用室温、自来水或水浴化冻即可。      

玉蝉花花粉生活力检测和超低温保存研究

[目的]研究花粉超低温保存方法,对于解决植物杂交育种花期不遇问题以及实现种质资源的保存等都具有重要的现实意义。[方法]以鸢尾属植物观赏价值很高的耐寒种玉蝉花为研究对象,对其花粉悬滴法活力检测离体培养基筛选和超低温保存方法进行研究。[结果]玉蝉花花粉活力检测较适合的液体萌发培养基配方为蔗糖150 g/L+H_3BO_3200 mg/L+CaCl_2150 mg/L+Fe_2(SO_4)350 mg/L+KNO350 mg/L+MgSO_4·7H_2O 100 mg/L;超低温保存要采集活力较高的初花期花粉,较适宜含水量为15.0%~20.0%,超低温保存后选用自来水水冲化冻,花粉萌发率由保存前的56.04%提升到保存后的60.53%;玉蝉花花药也可作为超低温保存材料,保存后采用自来水水冲化冻其花粉萌发率为54.11%。[结论]保存后的花粉活力符合花粉使用活力要求,可用于指导实践。     

甘蓝自交不亲和系花粉的离体保存

盛花期甘蓝花粉低温和超低温保存前脱水至花粉含水量为9.93%～14.18%时,保存效果最好;不脱水或过度脱水的效果均差.花粉于4℃下保存,活力仅维持1个月左右;而在-20℃,-70℃下保存,保存时间虽可适当延长,但萌发率逐渐降低.-196℃(液氮)下保存6个月后,甘蓝花粉仍有很高的萌发率.预冻处理可提高花粉保存效果,-20℃中预冻的效果最佳,萌发率达38.17%.此外,在室温化冻、水浴化冻和缓慢复苏3种解融方式中,水浴化冻的花粉萌发率最高(36.37%).     

小黑麦花粉干燥法超低温保存技术研究

为了满足种质资源保存、交换及杂交育种工作的需求,对小黑麦花粉活力及影响小黑麦花粉超低温保存效果的因素进行了研究。结果表明,采用TTC染色法测定小黑麦花粉的活力,结果相对准确,且其适合的浓度为0.1%;采用硅胶干燥处理3 h后,小黑麦花药相对含水量为34.5%,比较适合超低温保存,且保存前后花粉活力保持稳定,其活力相对保持率为92.3%;超低温冷冻保存5 d后,采用不同的化冻方式进行化冻,结果发现自来水冲洗化冻后小黑麦花粉活力相对较高,说明自来水冲洗化冻是简便适合的化冻方式。     

不同贮藏方式对4种桉树花粉活力影响的研究

[目的]研究不同贮藏方式对4种桉树花粉活力的影响,探索出适宜桉树花粉贮藏的低温条件和贮藏方式。[方法]以尾叶桉、尾叶桉×巨桉、巨桉和邓恩桉花粉为试验材料,对其进行常温、低温、低温冷冻和超低温冷冻贮藏,并对不同贮藏时间内的花粉活力进行检测。[结果]适合桉树花粉萌发的最佳培养基为20%蔗糖+6%琼脂+0.1‰硼酸;贮藏方式和贮藏时间对花粉活力有显著影响,常温真空贮藏,尾叶桉和巨桉花粉贮藏30d后,萌发率降至10%以下,尾叶桉×巨桉和邓恩桉花粉贮藏50d后,花粉萌发率降至10%以下,低温冷冻和超低温冷冻贮藏1年的桉树花粉萌发率仍保持在35%以上;不同的解冻方式对花粉萌发率有显著影响,以38℃水浴3min化冻效果最好。[结论]实际工作中选用低温冷冻贮藏花粉,可以得到既经济又高效的收益。     

日本牡丹品种花粉超低温保存

为解决杂交育种工作中的时空不遇,延长花粉寿命,本文对23个日本牡丹品种花粉进行了超低温保存研究。对新鲜花粉及超低温保存花粉离体萌发率测定结果表明:不同日本牡丹品种新鲜花粉生活力存在差异,23个品种中,‘大藤锦’花粉萌发率最高,达到60.89%,而‘岛大臣’最低,仅3.49%;室温条件下,日本牡丹品种花粉寿命仅15d左右,而超低温保存可以使日本牡丹品种花粉寿命至少延长至2年。经超低温保存2年,花粉仍然具有较高的萌发率,有的甚至超过保存前水平,因此超低温保存技术可用于日本牡丹品种花粉的长期保存。     

贵州主栽樱桃品种的花粉量及其低温保存效果

【目的】为比较贵州主栽樱桃品种花粉量及其花粉的保存方法,以期为杂交育种和授粉树的选择提供参考。【方法】以贵州主栽的2个中国樱桃及4个甜樱桃品种为材料,用纤维素酶解法测定其花粉量,花粉离体培养法测定比较了不同发育时期、干燥时间、保存温度及预冻解冻方式对花粉萌发率的影响。【结果】中国樱桃单花花粉量显著低于甜樱桃,且中国樱桃大花蕾期的花粉活力最高,随着保存时间的延长,花粉萌发率逐渐降低。采后1周内未经干燥的花粉,在4℃保存效果最佳,萌发率达50.98%,而-196℃保存花粉萌发率最低(27.11%),其原因可能是花粉含水量较高导致水分结晶而引起花粉结构破坏;长期保存以25℃干燥30 min后,保存在-196℃下效果最佳,保存16周后萌发率仍达11.14%;未经干燥的花粉,在-80℃保存后室温解冻30min效果最佳,萌发率达17.01%。【结论】人工授粉时应采集大花蕾期花粉,如需在采后1周内授粉,可将花粉保存于4℃;长期保存则应经25℃干燥30 min后保存于-196℃,室温解冻30 min,可达最佳效果。     

榆叶梅和海棠花粉萌发率的测定及超低温保存方法

研究了榆叶梅和海棠花粉萌发所需的最佳蔗糖浓度和温度;分析了不同贮藏方法和不同解冻温度对花粉萌发率的影响。结果表明：榆叶梅和海棠的花粉适宜发芽温度为20℃,培养基的适宜蔗糖浓度为10％;超低温(-196℃)保存后的萌发率最高;超低温保存中海棠花粉以自来水冲洗解冻效果最好;榆叶梅花粉则以室温下解冻效果最好。     

甘蓝自交不亲和系花粉的离体保存

盛花期甘蓝花粉低温和超低温保存前脱水至花粉含水量为9．93％-14．18％时,保存效果最好;不脱水或过度脱水的效果均差。花粉于4℃下保存,活力仅维持1个月左右;而在-20℃,-70℃下保存,保存时间虽可适当延长,但萌发率逐渐降低。-196℃(液氮)下保存6个月后,甘蓝花粉仍有很高的萌发率。预冻处理可提高花粉保存效果。-20℃中预冻的效果最佳,萌发率达38．17％。此外,在室温化冻、水浴化冻和缓慢复苏3种解融方式中,水浴化冻的花粉萌发率最高(36．37％)。     

杜仲花粉形态、贮藏及萌发性研究

【目的】研究杜仲花粉的形态、萌发及贮藏特性,以期有效地开展杜仲杂交育种和多倍体育种工作。【方法】以不同方式收集、不同含水率及不同温度下贮藏的各种杜仲花粉为试材,采用培养基法进行花粉萌发试验,利用电镜扫描技术对花粉萌发过程中的形态特征进行观察,并研究了培养基中蔗糖质量浓度、琼脂含量与培养温度、培养时间等因素对杜仲花粉萌发的影响,以及贮藏时间、贮藏温度与花粉含水率等因素对花粉贮藏特性的影响。【结果】干燥的杜仲花粉粒呈长椭圆形,赤道面观为卵形,极面观为三角形,极轴长32~38μm,赤道轴长20~22μm,远极面有3个复合萌发沟,在花粉萌发过程中只有一个萌发沟中生长的花粉管延伸;杜仲花粉萌发的适宜培养基及培养条件为:培养基含100 g/L(新鲜花粉)或200 g/L(干燥贮藏花粉)蔗糖和5 g/L琼脂,于25℃下培养;贮藏期不同的杜仲花粉,其最佳萌发培养时间有差异;树体成熟花粉与室内水培花枝成熟花粉,在贮藏和萌发性方面无明显差异;随着贮藏时间的延长,杜仲花粉的生活力下降,含水率6%的花粉在4℃下的有效贮藏期限为6个月;4~-20℃的低温有利于杜仲花粉贮藏;杜仲花粉贮藏的适宜含水率为6%。【结论】杜仲花粉最适的贮藏温度是4~-20℃,含水率为6%左右,采集即将成熟花枝水培是获得杜仲花粉切实可行的途径。     

刺槐花粉生活力测定方法及贮藏特性

【目的】探索刺槐花粉生活力测定方法及其贮藏特性,为刺槐生产及育种提供参考依据。【方法】以刺槐花粉为试材,使用培养基萌发试验法测定其生活力,并研究不同浓度Ca2＋、不同贮藏条件及时间对刺槐花粉萌发的影响。【结果】刺槐花粉在琼脂8.0 g/L＋蔗糖20.0 mg/L＋硼酸2.0 mg/L的培养基中萌发率高达30.25%;适当浓度的Ca2＋能促进花粉萌发和花粉管伸长,当Ca2＋浓度为1.6×10-4mg/L时,花粉萌发率高达40.25%,花粉管伸长最快;适宜刺槐花粉贮藏的条件依次为-80℃、4℃、-23℃和常温;花粉在-80℃贮藏32d后,萌发率仍达15.30%。【结论】适合刺槐花粉萌发的培养基为：琼脂8.0 g/L＋蔗糖20.0 mg/L＋硼酸2.0 mg/L;培养基中添加低浓度外源钙能促进刺槐花粉萌发和花粉管生长;于超低温真空冷冻条件下贮藏的刺槐花粉保持活力时间更长。     

芍药花粉超低温保存4年后的生活力检测

为了探讨花粉长期保存的最佳方法,以及为芍药花粉库的建立提供依据,该文比较了冷冻保存（-20℃）和超低温保存（-196℃）芍药花粉的不同效果,检验了17个芍药品种花粉经超低温保存4年后的生活力。结果表明,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率普遍高于冷冻保存和对照,而大部分品种花粉经冷冻保存（-20℃）4年后萌发率明显降低。离体萌发试验表明,超低温保存芍药花粉的效果因品种而异,但绝大部分品种（94.1%）花粉保存效果良好（相对保持率＞50%）。初步人工授粉试验表明,超低温保存4年后的芍药花粉仍具有受精结实能力。      

青脆李花粉生活力及贮藏性研究

【目的】探索不同因素对青脆李花粉生活力及萌发率的影响。【方法】以青脆李花粉为试材,通过TTC法研究了不同发育阶段、干燥方式、贮藏条件、贮藏时间4个因素对青脆李花粉生活力的影响,并采用培养基萌发法观察花粉萌发过程及植物生长调节剂对花粉萌发的作用。【结果】青脆李盛花期花粉生活力,明显高于初花期和末花期;室内自然阴干的花粉生活力平均高于干燥器干燥的花粉生活力;常温、0、4及-18℃条件下贮藏的花粉平均生活力随温度降低呈升高趋势;花粉生活力随贮藏时间的增长逐渐减弱,-18℃贮藏30d的花粉生活力可达35.3%;6-BA对花粉萌发有抑制作用,适宜浓度的2,4-D(20mg/L)可促进花粉萌发。【结论】盛花期花粉自然阴干是花粉的最佳采集方式,而长时间贮藏则以低温保存为宜。     

黄百香果花粉离体培养基筛选及贮藏试验

【目的】分析不同配方培养基及贮藏条件对大果型黄百香果花粉离体萌发效果的影响,为大果型黄百香果花粉活力鉴定、人工辅助授粉及杂交育种提供理论依据。【方法】采集花瓣刚好完全展开大果型黄百香果花朵的花粉,采用L_(25)(5~4)正交试验设计,筛选适宜其离体培养的蔗糖、硼酸、硝酸钙浓度及pH;利用最适宜花粉离体培养基,开展花朵不同采样时间、花粉离体贮藏湿度和温度对花粉活力影响试验,确定适宜大果型黄百香果花粉的离体贮藏条件。【结果】正交试验分析结果表明,影响大果型黄百香果花粉萌发率的因素排序为硝酸钙蔗糖硼酸pH,确定花粉离体萌发的最适培养基为100.00 g/L蔗糖+0.02 g/L硼酸+0.40 g/L硝酸钙,培养基pH 5.0。在最适培养基中,大果型黄百香果花粉的萌发率为85.55%;于11:30—17:30采集大果型黄百香果花粉的萌发率均在80.00%以上,其中,开花后3 h(16:30)花粉的活力最强,显著高于除13:30和15:30外的其他时间采集花粉的萌发率(P0.05,下同)。花粉贮藏试验结果表明,平铺在硫磺纸上自然风干处理3～48 h的花粉萌发率均显著高于同时间段密封于离心管中常温贮藏和平铺在硫磺纸上置于干燥器中贮藏处理,其中在硫磺纸上自然风干贮藏48 h的花粉萌发率仍达34.28%;自然风干5 h后密封于离心管中4℃贮藏24 h的花粉萌发率为61.49%,显著高于自然风干5 h后密封于离心管中-20℃贮藏24 h的花粉萌发率(55.22%)。【结论】大果型黄百香果花粉离体萌发最适培养基为100.00 g/L蔗糖+0.02 g/L硼酸+0.40 g/L硝酸钙及pH 5.0;当天采集花朵的花粉自然风干5 h后密封于离心管4℃贮藏其萌发效果最佳。     

库车小白杏的组织培养及玻璃化法超低温保存试验初探

[目的]采用玻璃化法对杏资源茎尖进行超低温保存.超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存的最好方法,保存后的材料遗传上较为稳定.[方法]以库车小白杏为试材,对茎尖(外植体)组织培养的培养基及激素浓度做了初步选择.[结果]选择MS +0.5NAA +0.2 6 -BA激素配方可使杏的茎尖最易形成愈伤材料,而选择MS +0.1 NAA +0.1 6- BA +0.1GA激素配方可使由茎尖获得的愈伤材料最易分化出根.[结论]用玻璃化法对组织培养获得的愈伤材料结合不同的低温保存时间、脱水处理时间与化冻方法进行比较试验可知,预冻温度- 30℃、玻璃化液保护剂脱水60 min、40℃水浴5 min解冻,可使超低温保存的材料复活率最高.     

人胚胎干细胞不同冷冻保存方法的比较

【目的】比较人胚胎干细胞不同冷冻保存方法的复苏率,建立高效的冷冻保存方法。【方法】利用慢速冷冻、开放式和密闭式玻璃化冷冻3种方法保存人胚胎干细胞克隆,比较这3种方法的复苏效率,并通过免疫组化染色检测复苏后细胞的OCT-4表达。【结果】开放式快速冷冻方法的克隆复苏率为(97.5±5.0)%,密闭式快速冷冻方法的克隆复苏率为(96.7±5.8)%,均极显著高于慢速冻存方法(25.7±4.1)%。解冻后的胚胎干细胞克隆仍然保持胚胎干细胞的特性。【结论】开放式和密闭式玻璃化冻存方法能够高效保存人胚胎干细胞。     

‘保罗兰’睡莲花粉离体萌发及花粉管生长的研究

【目的】研究不同培养基组分、不同培养时间对‘保罗兰’睡莲花粉萌发和花粉管生长的影响,为睡莲杂交育种提供科学的依据。【方法】采用花粉离体萌发法,用显微镜观察花粉离体萌发情况。【结果】20和40 mg/L的硼酸(H_3BO_3)处理均能促进花粉萌发,适宜浓度的蔗糖和低浓度的Ca~(2+)处理能显著提高花粉的萌发率;睡莲花粉在培养的4 h之内,花粉萌发率上升较快,4～6 h萌发率趋于稳定。花粉管生长在前2 h生长较快,2～6 h生长趋于稳定。【结论】10%蔗糖+20 mg/L或40 mg/L H_3BO_3+20 mg/L氯化钙(CaCl_2)是‘保罗兰’睡莲花粉最适萌发培养基组分,最佳镜检时间为4 h。