一种高效稳定的甘蓝染色体制片新方法

介绍一种高效稳定的甘蓝根尖染色体制片新方法,该方法结合传统的压片法和去壁低渗法优点,制片取得了良好的结果:染色体中期分裂相多,染色体分散良好,形态特征清晰,背景干净.制片可应用于染色体核型分析、分带、荧光原位杂交,以及显微切割等细胞遗传学操作.     

褪黑素在果蔬采后的应用

褪黑素不仅是一种微量、高效的多功能吲哚类激素,还是一种多效的生物信号.褪黑素在植物生长、种子萌发、果蔬成熟衰老、各种生物和非生物胁迫等方面的应用已被广泛报道.随着褪黑素在采后果蔬应用上的普及,越来越多的研究表明其在提高采后果蔬品质和抗病能力方面发挥着积极作用.本文对褪黑素的生物合成、在果蔬采后保鲜、抗病以及与其它抗病信...     

生姜试管苗无土栽培研究

生姜是重要的经济作物,由于生姜长期采用老熟的根状茎进行无性繁殖,不仅繁殖系数低而且容易导致种性的退化,通过生姜的组织培养技术,不仅可以脱毒脱菌而且可以快速繁殖,有效解决生姜生产中的问题。通过对移栽于不同基质的生姜试管苗生理指标的测定,找出最适的移栽基质,从而为完善生姜组培苗的工厂化生产和应用提供理论依据。试验结果表明：生姜茎尖分生组织培养中,用HgC12(0.1%)消毒外植体的最佳消毒时间为10min;生姜试管苗最适移栽基质为珍珠岩:蛭石=1:1的混合基质。     

基于SRK和SCR序列的甘蓝自交不亲和系单倍型分析

采用RT-PCR和其他分子生物学方法,以甘蓝自交不亲和系E1和F1柱头cDNA为模板扩增SRKE1和SRKF1基因,以花药cDNA为模板扩增SCRE1和SCRF1基因.经序列比对首次证明E1和F1材料分别为S28和S7单倍型.经三维结构分析,预测SCRE1上C5-C6和C7-C8之间氨基酸序列决定SCRE1的单倍型特异性,SRKE1上TNNSFYSRLKVS序列决定了SRKE1的单倍型特异性,并对两者相对作用的关键氨基酸位点进行了分析.     

甘蓝短散布元件(SINE)对转基因表达效果的研究

采用PCR方法,从甘蓝基因组中克隆了一段短散布元件序列(Short Interspersed Nuclear Element,SINE),该SINE具有核基质结合区(matrix attachment region,MAR)的结构特征,将其构建到β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(uidA)的两侧翼,形成SINE调控的植物表达载体,采用农杆菌介导法,将含SINE序列和不含SINE序列的植物表达载体导入烟草中.对转基因植株进行GUS活性定量测定,结果表明,SINE表现出类似MAR的功能,可以提高外源uidA基因的表达水平,与不含SINE的转化植株相比,外源基因的平均表达水平提高了2倍,但转基因植株个体间表达水平存在较大的差异.     

用于转化甘蓝的胰岛素样生长因子Ⅰ的合成及MAR调控的表达载体构建

胰岛素样生长因子I(IGF-I)是一种多功能细胞调控因子，在神经损伤、糖尿病、生长迟滞、骨质疏松等疾病的治疗中具有广阔应用前景。IGF-I主要存在于人和动物血液中，但其含量很低，天然来源无法满足临床利用需要，利用基因工程方法生产IGF-I是解决这一问题的有效途径。我们根据甘蓝偏爱密码，对整个基因DNA序列进行了修改，并从烟草中克隆了一段核基质结合区(MAR)。构建了MAR调控的植物表达载体。     

甘蓝KAPP编码基因的克隆与序列分析

采用PCR、RT-PCR及其他分子生物学方法,以甘蓝基因组DNA、花蕾RNA和叶片RNA为模板,分别对甘蓝KAPP gDNA和KAPP cDNA进行扩增,分别获得3247bp的KAPP gDNA片段、1699bp的KAPP cDNA片段、1578bp的花蕾KAPP2 cDNA片段和1581bp的叶片KAPP2cDNA片段。对克隆的甘蓝KAPP gDNA和cDNA(结合报道的KAPPcDNA)进行比对表明,甘蓝KAPP基因包含11个内含子,均符合"GU-AG"剪接规则,并且克隆得到的KAPP cDNA序列与报道的KAPP cDNA序列有6处单个碱基的差异,但两者的氨基酸序列完全一致。然而花蕾KAPP2 cDNA、叶片KAPP2 cDNA片段与报道的KAPP cDNA序列相似性分别为85.2%和85.0%。这两个序列分别在590bp和593bp处较早出现一个无义突变引起的终止密码子。Blast分析表明,两基因编码的氨基酸序列与拟南芥KAPP氨基酸序列相似性最高,其次为甘蓝KAPP氨基酸序列。以已报道的8种植物KAPP的CDS及本实验所克隆的两个KAPP2序列构建分子进化树,获得序列与甘蓝KAPP序列聚为一支。结合比较作图及分子进化树,推测KAPP基因在甘蓝基因组上有两个拷贝,而笔者克隆到的KAPP2 cDNA序列是其中一个拷贝,是KAPP进化过程中突变失活的拟基因。     

甘蓝自交不亲和决定因子的体外表达和相互作用的检测

 S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)分别为甘蓝自交不亲和(self-incompatibility, SI)信号传导的雌雄决定因子。为了深入研究两者的作用机理和进行人工调控,本研究以结球甘蓝ZQ为材料,利用pET·NusA融合蛋白表达系统,将包含SRK胞外域和跨膜域的mSRK蛋白和SCR蛋白在大肠杆菌BL21中融合表达,经SDS-PAGE电泳检测表达出融合蛋白大小分别约为116 kD和74 kD。进一步将两融合蛋白进行体外相互作用的检测,结果表明mSRK与SCR蛋白能够相互结合形成稳定的复合体,这为下一步实现SRK-SCR复合体聚合与解离的人为调控提供了技术平台。     

甘蓝两种SRK短截蛋白的体外表达及其与THL1作用检测

 为探明S–位点受体激酶（SRK）上与类硫氧还蛋白1（THL1）作用的氨基酸区域以及两者间作用方式,依据SRK_E1上功能域分布构建了两种SRK_E1短截体原核表达质粒pGEX-SRK_E1A和pGEX-SRK_E1B,分别在大肠杆菌BL21中获得了可溶性表达。通过体外孵育检测蛋白质相互作用的方法对SRK_E1A、SRK_E1B与THL1相互作用进行了检测,结果表明SRK_E1A和SRK_E1B均可与THL1结合,明确了THL1与SRK相互作用并不依赖于SRK激酶活性。两类SRK等位序列间比对结果表明Cys在两类SRK间的保守性存在明显差异,推测两类SRK材料亲和性的差异可能与Cys保守性不同有关。     

甘蓝自交不亲和系花粉的离体保存*

甘蓝是十字花科芸苔属植物,其花粉为三核型花粉.甘蓝花粉保存体系的建立,可以(1)打破植物生长季节限制,随时提供材料;(2)节省贮存空间,便于运输和交流;(3)利于甘蓝自交不亲和相关基因的克隆,以及花粉、柱头识别反应机制研究;可以解决杂交育(制)种花期不遇问题,减少父本种植面积,为珍贵、稀有材料的种质保存提供新途径.