现代月季6个品种花粉超低温保存研究

【目的】为实现月季花粉长期保存,满足杂交育种和种质资源保存需要,本文以6个现代月季品种的花粉为试验材料,研究其超低温保存技术。【方法】用扫描电子显微镜观察比较6个品种花粉形态、干燥法测定花粉自然含水量、悬滴法检测花粉活力,筛选出适宜萌发培养液,在此基础上进行了液氮保存,并研究这些因素对超低温保存效果的影响。【结果】6个品种花粉悬滴培养的适宜萌发液为15%蔗糖+0.05%硼酸。不同品种新鲜花粉萌发率不同,春季采收的新鲜花粉萌发率为8.91%～27.07%,秋季为9.95%～24.32%,6个品种春季采集的花粉萌发率均高于秋季,但3个差异显著,3个差异不显著。不同品种新鲜花粉含水量不同,春季采收的花粉含水量为9.6%～11.9%;秋季为9.2%～11.5%,4个品种春、秋两季采收的花粉含水量没有显著差异,另外2个品种春季采收的花粉含水量分别显著高于或低于秋季花粉2.4%或1.6%,含水量变化值差异不大。超低温保存后花粉萌发率变化因品种和花粉采收季节而异,6个月季品种花粉经过液氮保存1个月后萌发率为10.36%～21.28%,为新鲜花粉的59.3%～133.9%。长球形的‘金凤凰’和‘希望’,超低温保存后花粉活力有所下降;而超长球形的‘金玛丽’、‘雨果’、‘伦特娜’和‘仙境’,超低温保存后萌发率基本保持稳定。花粉含水量与花粉超低温保存前后萌发率未显著相关。【结论】不同季节采收的自然成熟散粉的6个月季品种花粉均能实现超低温保存,秋季采收的花粉液氮保存后萌发率较新鲜花粉变化较小,但是春季采收的花粉萌发率更高,更适合超低温保存。超低温保存效果与品种、新鲜花粉萌发率、花粉形状和采收季节有关。     

密花石斛花粉的保存方法研究

研究了密花石斛花粉不同保存方法下的花粉寿命,并对密花石斛花粉的超低温保存技术程序进行了研究。 结果表明:1)密花石斛花粉采用室温（(27±2)℃）、冷藏（4℃）、冷冻（-20℃）保存,花粉寿命分别为5、23、17 d,超低温保存(-196℃)的花粉120 d后仍可检测到花粉萌发,且萌发率与新鲜花粉相同,超低温保存方法至少可以保存密花石斛花粉4个月;2)密花石斛花粉超低温保存的程序为新鲜花粉（含水量43.26%）直接投入液氮（LN）保存,需用时采用室温、自来水或水浴化冻即可。      

芍药花粉超低温保存前后氧自由基变化研究

花粉超低温保存后花粉活力因材料不同有很大差异,导致这种差异的原因尚不完全清楚。以液氮保存前后花粉萌发率变化不同的2个芍药品种为对象,研究了花粉在超低温保存前后活性氧及其膜脂过氧化的关系,以探讨超低温保存对它们的影响。结果表明,2个品种保存前后萌发率变化不同,但活性氧水平均无显著变化;2个品种的抗氧化酶活性均上升,抗坏血酸含量在冻存后也明显上升,而‘大红赤金’冻存前后无显著变化;同时,液氮保存前后‘大红赤金’的丙二醛含量和相对电导率均明显上升,而‘紫凤朝阳’无显著变化。以上表明,虽然这2个品种的活性氧水平均没有显著差异,但抗氧化系统已启动并清除了多余的活性氧,超低温保存对花粉的生理有一定影响。其中花粉生活力下降的‘大红赤金’发生了膜脂过氧且抗坏血酸含量无显著变化,表明抗坏血酸的作用可能更关键。     

6个铁线莲品种花粉保存方法

为了探究铁线莲花粉保存的最佳条件,研究比较了花粉采集时间(开花第1、2、3天)、干燥时间(12、24、48h)和保存温度(4、-20、-196℃)对花粉萌发率的影响。结果表明,花粉粒的平均直径均随着开花时间的延长而上升,且差异显著,其中‘蓝龙’花粉粒直径上升幅度最大为4.53μm,‘如梦’的上升幅度最小,为1.13μm。开花第2天采集的‘爱莎’、‘第一夫人’、‘冰美人’、‘亨利’和‘如梦’花粉萌发率最高,而开花第3天采集的‘蓝龙’花粉萌发率最高;‘第一夫人’、‘爱莎’和‘蓝龙’分别经过12~48h干燥后4℃保存的花粉相对存活率最高,分别为新鲜花粉的87.86%、71.27%和67.24%;‘亨利’、‘冰美人’和‘如梦’花粉干燥24h后-196℃保存的相对存活率最高,分别为新鲜花粉的59.65%、78.74%和69.33%。-20℃保存的铁线莲花粉相对存活率仅为0~56.85%。利用4和-196℃保存的花粉进行杂交验证试验,平均坐果率为70.7%~100%,初步明确了‘第一夫人’、‘爱莎’和‘蓝龙’花粉适合4℃保存,而‘亨利’、‘冰美人’和‘如梦’则适合液氮超低温保存,这为解决铁线莲品种间杂交的花期不遇问题奠定了基础。     

芍药花粉超低温保存4年后的生活力检测

为了探讨花粉长期保存的最佳方法,以及为芍药花粉库的建立提供依据,该文比较了冷冻保存（-20℃）和超低温保存（-196℃）芍药花粉的不同效果,检验了17个芍药品种花粉经超低温保存4年后的生活力。结果表明,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率普遍高于冷冻保存和对照,而大部分品种花粉经冷冻保存（-20℃）4年后萌发率明显降低。离体萌发试验表明,超低温保存芍药花粉的效果因品种而异,但绝大部分品种（94.1%）花粉保存效果良好（相对保持率＞50%）。初步人工授粉试验表明,超低温保存4年后的芍药花粉仍具有受精结实能力。      

花楸花粉超低温保存及再生

【目的】探讨花楸(Sorbus pohuashanensis)花粉超低温保存及再生的方法,以延长其花粉保存时间,为科研、生产提供理论和实践依据。【方法】分别设置不同培养基配方、不同光照、不同采集时间处理,进行花楸花粉离体萌发试验,测定各试验处理的花粉萌发率;设置不同冷冻方式和化冻方式处理,测定两种方式不同处理的花粉萌发率;制备不同含水率的花粉,分别测定其在超低温保存前、后的萌发率。【结果】(1)培养基为100g·L~(-1)蔗糖+100 mg·L~(-1)硼酸的处理,花粉萌发率最高,达72.42%;(2)黑暗处理花粉萌发率为77.24%,比光照处理高8.96个百分点;(3)一天中,10∶00和14∶00采集的花粉,其活力显著高于其他时间采集的花粉;(4)-20℃预冷冻培养30min后投入液氮保存24h的处理效果最好,花粉萌发率达43.15%;(5)超低温保存后40℃水浴解冻5min处理比其他解冻方式处理的花粉活力高,萌发率为35.70%;(6)花楸花粉超低温保存最适含水率为7.72%,此含水率下花粉超低温保存后萌发率最高,为31.53%。【结论】花楸花粉采用超低温技术保存24h后仍具有活力,黑暗条件、花粉采集时间、花粉萌发培养基、花粉含水率、冷冻与化冻方式均会对花楸花粉超低温保存效果产生显著影响。     

黄帝陵古侧柏花粉生活力及其保存方法的研究

以黄帝陵千年古侧柏花粉为试验材料,用离体萌发法测定花粉的生活力,研究不同保存方法对花粉萌发率的影响,探讨花粉含水量、投入方式、化冻方式对超低温保存效果的影响。结果表明:古侧柏花粉在9%蔗糖+0.01%硼酸的培养基中离体培养4 d萌发率最高。90 d内,随着保存时间的延长,室温（20℃）保存的花粉迅速失活,低温（0℃、-20℃）保存的花粉萌发率呈逐渐下降趋势,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率最高且保持效果最好,为古侧柏花粉长期保存的适宜方法。在超低温保存中,花粉以未经干燥、直接投入液氮、37℃恒温水浴化冻5 min保存效果最好;花粉含水量、投入方式、化冻方式之间交互效应显著。     

中原牡丹不同品种花粉活力及授粉特性研究

以21个中原牡丹品种为试材,对花期及花粉活力进行了观察和测定,选择花粉活力高(花粉萌发率50%)的中原牡丹品种与‘凤丹’进行授粉结实试验,并对21个授粉组合的结实特性,如结实率、单果种子数及单粒重等进行统计。试验结果表明,不同中原牡丹品种之间花粉生活力存在显著差异,‘粉蓝盘’品种花粉活力最高,花粉萌发率达到91.3%,‘春红娇艳’只有3.6%。从中选出9个萌发率高的中原牡丹品种作为授粉品种对‘凤丹’进行授粉,从结实率和单果种子数两个结实特性指标来看,鸦片紫、紫菊、大红宝珠、粉蓝盘、葛巾紫、红宝石等品种作为授粉品种表现要优于凤丹自然授粉。     

不同低温保存对雪花梨花粉萌发的影响

针对梨树生产与科研中各品种间存在花期不遇和授粉树配置不合理,从而影响梨树授粉的问题,研究了不同低温保存方法对雪花梨花粉萌发率和萌发速度的影响。结果表明：2002～2004年雪花梨花粉萌发率3 a平均为84.1%,与胎黄梨（91.0%）无显著差异,但显著〉鸭梨（66.3%）和金坠梨（44.7%）。雪花梨花粉在室温（20～22℃）条件下保存1个月,萌发率迅速降为5%,保存5个月后萌发率降为0;在冰箱（2～3℃）条件下只能保存5个月,保存1 a后萌发率（11.2%）降低明显;在冰柜（-18℃）条件下保存3 a仍能保持较高的萌发率（56.3%）,冰柜保存是雪花梨花粉较适宜的保存方法。雪花梨花粉在23～25℃发芽培养基中4 h即全部萌发,低温保存1 a后萌发时间较新鲜花粉增加1倍,生产上授粉时应先对贮存花粉进行加湿处理,使花粉充分吸水,以保证花粉迅速发芽,确保授粉效果。     

4种栽培玫瑰花粉生活力研究

采用离体培养的方法测定了4种栽培玫瑰花粉的生活力,并考察了不同浓度蔗糖溶液对花粉萌发率的影响以及不同冷藏时间下花粉活力的变化情况。结果表明,不同玫瑰品种的花粉萌发率差异显著,‘紫枝’、‘北京单瓣白’的花粉萌发率相对较高,最高萌发率超过40%;‘平阴一号’、‘西湖一号’的花粉萌发率较低,最高萌发率仅为10%～20%。培养基中蔗糖浓度对各品种萌发率的影响差异显著;冷藏花粉的生活力随冷藏时间的延长明显下降。     

芍药与牡丹远缘杂交花粉萌发与花粉管生长行为观察

以探明牡丹与芍药远缘杂交结实率低的原因为目标,以芍药‘朱砂判’为母本,以牡丹‘凤丹白’、‘岛大臣’、‘正午’、‘姚黄’为父本,并以芍药品种‘Kansas’为对照父本进行人工杂交,采用培养液培养法测定父本花粉萌发率,用苯胺蓝染色法,在荧光显微镜下观察父本花粉在母本柱头上萌发及花粉管生长的过程。结果显示:‘朱砂判’在开花第4天为最佳授粉期;离体状态下花粉萌发率由高到低为‘Kansas’、‘岛大臣’、‘凤丹白’、‘姚黄’、‘正午’;‘岛大臣’及‘Kansas’作父本的组合花粉管能够到达子房,其他组合花粉管都未到达子房,并观察到一些异常的花粉管形态,花粉管生长过程中还伴随着一系列胼胝质反应。表明受精前障碍是影响牡丹与芍药组间远缘杂交的主要原因之一。      

梅花基因组DNA提取的方法学研究

设计 4种方法 :“简易CTAB法”、“预先去杂 CTAB法”、“简易SDS法”和“预先去杂 SDS法” ,提取梅花‘南京红须’、‘南京红’和‘粉皮宫粉’叶片的基因组DNA。分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和限制酶酶切反应鉴定表明 :“预先去杂 SDS法”尽管提取DNA得率最低 ,却是唯一能够从梅花叶片提取到高质量基因组DNA的方法 ;嫩叶的提取效果好于成熟叶。A2 6 0 A2 80 比值偏高和降解是所获低质量DNA表现的两个主要现象。RNaseA的再次消化无法降低A2 6 0 A2 80 。     

6个非洲菊品种的花粉特性及其离体萌发

为研究不同条件下的花粉特性及其离体萌发，笔者通过测定6个非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)品种的花粉形态、花粉数量和花粉活力，明确花粉特性和不同条件下的花粉活力；利用spss 23.0软件进行花粉大小、形态指数和花粉数量的系统聚类分析。结果表明:6个非洲菊品种的花粉形态、花粉数量和花粉活力均存在差异。‘玲珑’的花粉粒最大，‘大雪菊’的花粉粒最小；‘云南红’花粉数量最多，‘玲珑’花粉数量最低；用花粉离体萌发法测定不同时期（初开、半开、盛开期）和不同温度下（5, 15, 25, 35 ℃）的花粉活力范围分别为2.75%～33.54%和0.37%～34.62%。系统聚类法以花粉粒粒长和花粉粒直径聚类，在组间距离为25处，6个非洲菊品种被划分为二大类，第一大类包括‘大雪菊’、‘拉丝’、‘香槟’、‘云南红’和‘紫霞’，第二类中的‘玲珑’单独聚成1类。     

ROS诱导的氧化应激和细胞程序性死亡对超低温保存后花粉生活力的影响

[目的]超低温保存后花粉生活力呈多种变化情况,已有研究表明活性氧(ROS)是超低温保存后花粉生活力变化的主要原因之一.因此,本研究探讨液氮冻存后花粉生活力与ROS诱导的氧化应激和细胞程序性死亡间的关系,以进一步揭示ROS在超低温保存后花粉生活力变化中的作用机制.[方法]以芍药'粉玉奴'的花粉为材料,对比分析超低温保存不...     

根据花粉形态探讨中国栽培牡丹的起源

该文对中国栽培牡丹各品种群48个代表品种的花粉形态进行了扫描电镜观察,结果表明:中国栽培牡丹的花粉形态具有较明显的多样性.在此基础上,结合形态分析,提出了绝大多数栽培牡丹起源于多个野生原种的观点.矮牡丹、紫斑牡丹、杨山牡丹是最主要的起源种,卵叶牡丹的作用较小.杂交是中国栽培牡丹最重要的起源方式.少数栽培牡丹是单种起源的,它们直接起源于紫斑牡丹或杨山牡丹.四川牡丹未参与中国现有栽培牡丹的起源.最后讨论了花粉形态对品种分类和鉴定的价值及不同制样方法对花粉粒形状的影响.     

根据花粉形态探讨中国栽培牡丹的起源

该文对中国栽培牡丹各品种群 4 8个代表品种的花粉形态进行了扫描电镜观察 ,结果表明 :中国栽培牡丹的花粉形态具有较明显的多样性 .在此基础上 ,结合形态分析 ,提出了绝大多数栽培牡丹起源于多个野生原种的观点 .矮牡丹、紫斑牡丹、杨山牡丹是最主要的起源种 ,卵叶牡丹的作用较小 .杂交是中国栽培牡丹最重要的起源方式 .少数栽培牡丹是单种起源的 ,它们直接起源于紫斑牡丹或杨山牡丹 .四川牡丹未参与中国现有栽培牡丹的起源 .最后讨论了花粉形态对品种分类和鉴定的价值及不同制样方法对花粉粒形状的影响