滴鼻免疫疫苗对SPF鸡气管功能影响的研究

为研究疫苗滴鼻免疫对鸡气管功能的影响,本研究对SPF鸡滴鼻免疫新城疫疫苗后气管纤毛摆动速率、气管形态结构和黏液分泌进行了研究。80只7日龄SPF鸡随机分为对照组和试验组,每组40只,试验组SPF鸡滴鼻免疫新城疫弱毒疫苗,对照组滴鼻生理盐水;于免疫后的第0、2、4和6天,每组每次随机剖杀10只鸡,应用红细胞示踪法测定气管纤毛摆动速率,采集气管制备石蜡组织切片进行HE和奥新蓝pH 2.5和pH 1.0染色。结果发现,疫苗免疫后的第0和2天试验组SPF鸡纤毛摆动速率较对照组升高,但差异不显著(P0.05);滴鼻免疫后SPF鸡气管结构完整,无明显损伤;滴鼻免疫后试验组SPF鸡气管酸性黏液分布容积在免疫后的第0和2天显著高于对照组(P0.05),而后明显降低,于免疫后的第6天又有所升高,但差异不显著(P0.05);硫酸化黏液分布容积在免疫后的第0和2天显著升高(P0.05),而后降低并与对照组相一致。结果表明,新城疫疫苗滴鼻免疫后前两天SPF鸡气管黏液分泌增多,而后恢复到正常水平,疫苗的免疫对气管形态结构和纤毛的摆动速率无明显影响。     

甘保罗病弱毒疫苗对法氏囊及新城疫HI抗体滴度的影响

我场于1999年10～12月进行了甘保罗病(传染性法氏囊病，IBD)弱毒冻干疫苗免疫后对法氏囊及新城疫HI抗体滴度影响试验，结果如下。一、试验鸡及疫苗：1天龄雏鸡200羽，试验组及对照组各100羽雏鸡，饲料由我场饲料场提供。疫苗为英特威公司的IBD D－78冻干弱毒疫苗。其他免疫如新城疫、鸡痘、传支等免疫疫苗均由英特威公司提供。免疫程序为：4天龄时传支＋新城疫疫苗点眼；7天龄时鸡痘疫苗刺种；14天龄时新城疫弱毒疫苗点眼，新城疫油乳剂灭活疫苗1／2羽份胸肌注射；17天龄时IBD弱毒疫苗滴鼻。二、IBD冻干疫苗免疫后对法氏囊重量影响IB…     

B亚群禽白血病病毒对鸡新城疫疫苗免疫效力的影响

为研究B亚群禽白血病病毒(ALV-B)对新城疫疫苗免疫效力的影响,将50只SPF鸡随机分为2组,试验组鸡接种ALV-B,对照组鸡注射等量生理盐水,7 d后2组全部滴鼻免疫新城疫病毒(NDV)LaSota疫苗,试验期8周。结果显示,与对照组相比,当试验组的鸡感染ALV-B后,再免疫LaSota疫苗时,NDV抗体水平、IFN-γ和IL-2浓度以及外周血CD4⁺和CD8⁺的T淋巴细胞百分比均显著降低(P<0.05)。试验组鸡的肝脏、脾脏、法氏囊均发生肿瘤性组织学病变,其中肝脏超微组织学病变中可同时见到ALV-B和LaSota病毒。综合上述研究证明ALV-B可显著降低LaSota疫苗的免疫应答效果,两种病毒有共感染的现象。     

生长抑素和皮质抑素双表达DNA疫苗免疫杂交水牛育成牛的促生长效果研究

试验旨在探究生长抑素（SS）和皮质抑素（CST）双表达DNA疫苗免疫杂交水牛育成牛的促生长效果,并对其安全性进行验证。将鉴定正确的pVGS/2SS-2A-S/CST-asd质粒电转入减毒猪霍乱沙门氏菌C500构建生长抑素和皮质抑素双表达活载体疫苗。将16头6~12月龄杂交水牛育成牛随机分为低（TL）、中（TM）、高（TH）剂量组及PBS对照组（NC）,每组4头,试验组和对照组分别用双表达疫苗和PBS进行鼻腔免疫,初免时每天09：00和15：00免疫2次,连续免疫3 d,2周后以相同程序加强免疫1次,对免疫后不同时期的增重效果和免疫应答水平等进行监测。免疫应答结果显示,各剂量组免疫后均引起了免疫应答,TL组在初免后2周产生的SS抗体水平高于TM和TH组,而TM组SS抗体阳性率最高,为100%,优于TL （75%）和TH组（50%）;初免后2周产生的CST抗体水平则呈现完全相反的趋势,抗体水平随免疫剂量下降呈下降的趋势;初免后7周SS抗体和CST抗体水平和阳性率整体呈下降趋势,但也有部分牛出现抗体升高趋势;免疫因子检测结果显示,初免后2周TL和TM组IL-4水平极显著高于对照组（P<0.01）,而免疫后7周对照组的IL-4水平显著高于TL组（P<0.05）,与其他各组之间差异均不显著（P>0.05）;对照组INF-γ水平在初免后2周显著高于TL和TM组（P<0.05）,免疫后7周对照组显著高于TL组（P<0.05）,与其他各组之间差异均不显著（P>0.05）;对比抗体阳性组和阴性组发现,初免后2周抗体阳性组的IL-4水平极显著高于阴性组（P<0.01）,初免后7周则显著低于对照组（P<0.05）,而抗体阳性组INF-γ在初免后2和7周均显著低于阴性组（P<0.05）。增重效果检测显示,初免后2周各试验组平均日增重均显著高于对照组（P<0.05）,而在其他各时期各组之间差异均不显著（P>0.05）,抗体阳性组仅在初免后2周显著高于阴性组（P<0.05）。激素检测结果显示,各试验组生长激素（GH）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在初免后2周均极显著高于对照组（P<0.01）,而初免后7周TL组GH和IGF-1水平显著低于对照组（P<0.05）,其他各组之间均差异不显著（P>0.05）;抗体阳性组的GH和IGF-1水平在初免后2周极显著高于阴性组（P<0.01）,而初免后7周则极显著低于阴性组（P<0.01）。安全性检测结果显示,各时期采集的水样、土样、粪样中均未检测到目的片段,证实了疫苗的安全性。本试验结果表明,双表达疫苗免疫后机体能产生良好的免疫应答,能提高育成牛的平均日增重,且对环境未产生安全性问题。     

生长抑素和皮质抑素双表达DNA疫苗免疫杂交水牛犊牛的促生长效果研究

试验旨在探究生长抑素（SS）和皮质抑素（CST）双表达DNA疫苗免疫杂交水牛犊牛的促生长效果及疫苗本身的安全性。将鉴定正确的pVGS/2SS-2A-S/CST-asd质粒电转入减毒猪霍乱沙门氏菌C500构建SS和CST双表达活载体疫苗,喷鼻免疫杂交水牛犊牛后观察其对犊牛生长性能的影响。选取体重相近的2~6月龄杂交水牛犊公牛24头,随机分为低（TL）、中（TM）、高（TH）剂量组和PBS对照组（NC）,每组6头,初次免疫（简称初免）持续3 d,间隔2周后用相同剂量加免一次。结果显示,初免后2周便可产生抗SS和CST抗体,以TL组最佳,表现为更高的抗体水平和阳性率,7周时各试验组阳性率呈下降趋势;TL和TM组的平均日增重在初免后2和7周均高于对照组,但各组间差异均不显著（P>0.05）,而抗体阳性组（P）的平均日增重在0~2周显著高于阴性组（N）（P<0.05）。相关激素的检测结果显示,在初免后2和7周,试验组生长激素（GH）和胰岛素生长因子1（IGF-1）的水平均高于对照组,且以TL组表现最佳,除初免后7周GH与对照组无显著差异外,其余均极显著高于对照组（P<0.01）;初免后2周抗体阳性组极显著高于阴性组（P<0.05）。细胞因子检测结果显示,在初免后2周,试验组白细胞介素4（IL-4）含量高于对照组,且TL和TM组均极显著高于对照组（P<0.01）,尤以TL组最高,免疫后7周TL和TH组均显著高于对照组（P<0.05）,而免疫后2周对照组免疫干扰因子γ（INF-γ）含量极显著高于试验组（P<0.01）,免疫后7周对照组INF-γ含量显著低于TL和TH组（P<0.05）;阳性组IL-4水平在免疫后2周、INF-γ水平在免疫后7周均显著高于阴性组（P<0.05）,其他各组间差异不显著（P>0.05）。对血清中血糖（GLU）、总蛋白（TP）、总胆固醇（CH）和尿素氮（BUN）水平进行测定发现,除免疫后2周总蛋白含量TL组显著高于对照组外（P<0.05）,其他指标各组间差异均不显著（P>0.05）。对免疫后的水样、土样和粪样进行目的基因扩增发现,在PCR灵敏度范围内均未检测到,证实了疫苗的安全性。由上述结果可知,疫苗免疫后能取得良好的免疫效果,使机体产生显著的免疫应答,以低剂量组效果最佳,且没有对环境产生不良影响。     

N-氨甲酰谷氨酸对奶牛超排效果及血液指标的影响

本研究旨在探讨饲喂N-氨甲酰谷氨酸（NCG）对奶牛超数排卵效果及血液生化指标的影响。选取荷斯坦育成牛16头，随机分为2组，每组8头，对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮的基础上饲喂20 g/（d·头）的NCG，采用连续4 d递减注射FSH法测定NCG饲喂时间对供体牛超排效果的影响，分别在3次超排处理的第0、5、9天采集尾根静脉血测定激素指标及血清生化指标。结果表明，①NCG饲喂20 d时（第1次超排），试验组头均回收胚数、可用胚数、退化胚数、未受精卵数与对照组相比差异均不显著（P>0.05）；NCG饲喂50 d时（第2次超排），试验组头均回收胚数显著高于对照组（P<0.05）；NCG饲喂80 d时（第3次超排），试验组头均可用胚数显著高于对照组（P<0.05）；综合考虑3次超排效果，试验组头均回收胚数显著高于对照组（P<0.05）。②NCG饲喂时间对供体牛血清中促卵泡素、促黄体素、孕酮、雌二醇的浓度均无显著影响（P>0.05），说明NCG饲喂时间对奶牛生殖激素的分泌无影响或为次要影响因素，超排效果的变化与生殖激素变化无明显的关联作用。③NCG饲喂时间对供体牛血清中谷草转氨酶的浓度无显著影响（P>0.05）；在NCG饲喂13 d时，试验组供体牛血清中葡萄糖浓度显著高于对照组（P<0.05）；在NCG饲喂34 d时，试验组供体牛血清中尿素氮浓度显著低于对照组（P<0.05）；在NCG饲喂43和69 d时，试验组供体牛血清中一氧化氮浓度显著高于对照组（P<0.05）。综合考虑，在重复3次超排时，每头供体牛每天饲喂20 g NCG，可提高3次连续超排的回收胚数4.98枚及可用胚数1.8枚，进而降低胚胎的生产成本。     

禽传染性支气管炎脂质体、壳聚糖/DNA疫苗免疫效果比较研究

将制备的禽传染性支气管炎脂质体／DNA疫苗和壳聚糖／DNA疫苗，分别以肌肉注射（i．m）和滴鼻、点眼（i．n）两种途径免疫健康雏鸡，以裸DNA疫苗为对照，采用流式细胞仪（FACS）及间接ELISA分别对免疫鸡外周血中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数及特异性IBV血清抗体IgG的动态变化进行检测，并于免疫后35d进行攻毒，结果显示：（1）CD4^＋T淋巴细胞数，所有试验组在免疫后1～3周左右均高于对照组（P〈0．01或P〈0．05），各试验组间，脂质体／DNA疫苗肌肉注射途径在免疫后10d后高于壳聚糖／DNA疫苗，但仅在第15天差异显著（P〈0．05），而滴鼻、点眼途径则相反；（2）所有试验组CD8^＋T淋巴细胞数仅在免疫后第15天与对照组差异显著（P〈0．05），各试验组间无显著差异；（3）所有组间特异性IBV血清抗体IgG动态变化差异不显著；攻毒后脂质体／DNA疫苗肌肉注射组无鸡只死亡，其他试验组有4％或8％死亡率，均显著低于对照组（12％）。由此可见，脂质体和壳聚糖均为DNA疫苗良好的佐剂或载体，且脂质体／DNA疫苗肌肉注射的免疫效果优于壳聚糖／DNA疫苗。     

禽副粘病毒2型对SPF鸡免疫功能的影响

7日龄 SPF鸡经滴鼻、点眼感染 PMV- 2 ,可引起轻微的呼吸道症状 ,病理组织学观察可见气管黏液分泌亢进和轻微的淋巴细胞浸润 ;感染 PMV- 2后的 1天 ,2天 ,3天… 11天 ,定位采取气管、肺、肝、脾、肾、心、大脑、法氏囊、盲肠扁桃体等组织 ,检查病毒的分布规律 ,结果表明 ,PMV- 2在法氏囊、气管、肺、胸腺、脾、肾、大脑中均有分布 ;SPF雏鸡感染 PMV - 2后 ,接种鸡新城疫克隆 30疫苗 ,免疫后 5 - 30天 ,每 5天 1次检测血清中 ND的 HI抗体效价 ,结果表明 ,PMV- 2感染组比对照组的 HI抗体效价平均低 2 log2 ,统计结果显示差异极显著。雏鸡感染 PMV - 2后对新城疫疫苗的免疫应答有影响 ,从而可能抑制机体的免疫功能 ,危害养鸡生产。     

经鸡胚感染的ALV-J对新城疫弱毒疫苗免疫的抑制作用及疫苗株对病毒载量的影响

为了解经鸡胚感染携带J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的雏鸡体内ALV-J对新城疫(ND)弱毒疫苗(La Sota株)免疫的抑制作用以及疫苗免疫后增强ALV-J对雏鸡致病作用的可能性,随机选择50个SPF鸡胚经卵黄囊接种模拟ALV-J感染,同时选取等量SPF鸡胚以相同方式接种PBS作为对照。出雏后于接毒组和对照组各取20只SPF鸡在7日龄时免疫ND弱毒疫苗(La Sota株)。2～6周龄时,记录各组鸡的体重和免疫器官指数,并对雏鸡的NDV抗体水平和血液ALV-J病毒载量进行动态检测。结果显示,感染ALV-J的SPF鸡5、6周龄时体重显著低于PBS对照组(P0.05),而感染ALV-J再免疫新城疫弱毒疫苗后SPF鸡体重进一步降低(P0.05);与PBS对照组相比,6周龄时感染ALV-J的SPF雏鸡胸腺萎缩和脾脏肿大(P0.05),免疫新城疫弱毒疫苗后胸腺和脾脏损伤加剧(P0.05);3、4周龄时感染ALV-J再免疫ND弱毒疫苗组的雏鸡NDV抗体水平极显著低于仅免疫ND弱毒疫苗组(P0.01);4周龄时免疫弱毒疫苗后的SPF鸡血液中ALV-J病毒载量高于未免疫组(P0.01)。研究表明,感染ALV-J的雏鸡在免疫ND弱毒疫苗(La Sota株)后增强了ALV-J对SPF雏鸡的致病作用,提示净化种源的重要性。     

氨基酸副产物对青贮饲料发酵品质及消化率的影响

试验旨在研究氨基酸副产物（amino acid by-products,ABP）对全株红高粱和全株甜玉米发酵品质及消化率的影响,并通过扫描电镜（SEM）探讨ABP对青贮饲料发酵品质及消化率的作用机制。试验设无添加剂的对照组和添加2.0% ABP的试验组Ⅰ、2.0% ABP与饲用菌混合添加的试验组Ⅱ,分别进行红高粱和甜玉米的发酵试验,检测其发酵品质及消化率。结果表明：①试验组Ⅰ红高粱和甜玉米青贮pH降至3.90和3.28,感官评定均属于优质青贮饲料。②对于红高粱青贮,与对照组相比,试验组干物质（DM）含量略有提高,但差异不显著（P>0.05）,粗蛋白质（CP）含量显著高于对照组（P<0.05）,试验组Ⅱ纤维成分略低于对照组,但差异不显著（P>0.05）;各试验组乳酸和乙酸含量显著高于对照组（P<0.05）,试验组Ⅱ丁酸含量显著低于其余组（P<0.05）;试验组干物质和中性洗涤纤维（NDF）消化率均高于对照组,但差异不显著（P>0.05）,酸性洗涤纤维（ADF）消化率显著高于对照组（P<0.05）。③对于甜玉米青贮,各试验组干物质和纤维含量均低于对照组,但差异不显著（P>0.05）,粗蛋白质含量显著高于对照组（P<0.05）;试验组Ⅰ乳酸含量显著高于其余组（P<0.05）,试验组Ⅱ乙酸含量显著高于其余组（P<0.05）,而各试验组丁酸含量显著高于对照组（P<0.05）;试验组各养分消化率均低于对照组但高于未发酵原料,其中干物质和酸性洗涤纤维消化率差异显著（P<0.05）。④SEM结果表明,青贮过程中ABP通过破坏红高粱表面蜡质层促进饲用菌的黏附,并降解其细胞壁纤维成分而改善了青贮发酵品质并提高消化率;但ABP对青贮甜玉米蜡质层及细胞壁纤维结构破坏作用不明显。综上,添加ABP可提高红高粱青贮的发酵品质和养分消化率,但对甜玉米青贮的作用不大。     

白虎定喘口服液药效研究

为验证新兽药白虎定喘口服液的药效作用,进行了鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）鸡胚增殖抑制试验、气管纤毛运动试验及SPF雏鸡人工感染IBV疗效试验。将试验药液与等量IBV液混合作用后,接种11日龄SPF鸡胚,37℃孵育168 h,取存活鸡胚肾脏进行IBV的RT-PCR检测,结果表明,药物组168 h鸡胚存活率为80%,阳性对照组为20%,两组间差异显著（P<0.05）;试验药物组RT-PCR检测无目的条带出现,而阳性对照组有目的条带出现。40日龄SPF鸡连续用药3 d后,气管内注入0.02 mL墨汁,测量1 min内墨汁移动的距离,结果表明药物组墨汁移动距离极显著大于生理盐水对照组（P<0.01）。17日龄SPF鸡用IBV-M41滴鼻,0.3 mL/只,24 h后开始灌服药液,1 mL/kg,连用5 d,结果表明,试验药物组与攻毒对照组在临床症状计分、痊愈率上均存在显著差异（P<0.05）;试验组气管黏膜组织切片未见明显病变,而阳性对照组有明显病理变化。以上试验结果表明,白虎定喘口服液对IBV具有较好的体外抑制作用,可显著促进气管纤毛的运动,对鸡传染性支气管炎（IB）具有较好的临床防制效果。     

Study on Efficacy of Baihu Dingchuan Oral Liquid

In order to verify the effect of Baihu Dingchuan oral liquid of new veterinary drugs,the effects of infectious bronchitis virus (IBV) on the proliferation inhibition test, tracheal cilia movement test and SPF chickens infected with IBV were tested.The test solution was mixed with an equal amount of IBV solution,inoculation of 11-day-old SPF chicken embryo,incubation at 37℃ for 168 h.RT-PCR was performed to detect IBV in kidney of live chick embryo.The results showed that the survival rate of 168 h chicken embryo was 80% in the drug group,but the positive control group was 20%, and there was significant difference between two groups (P<0.05). In the test drug group, no band was detected by RT-PCR, but the target band appeared in the positive control group.After 40 days old SPF chickens were administered continuously for 3 days, 0.02 mL of ink was injected into the trachea. The distance of ink movement in 1 min was measured. The results showed that the migration distance of ink was extremely significantly higher than that of saline control group (P<0.01).In the 17-day-old SPF chickens, IBV-M41 was infused into the nasal mucosa with 0.3 mL. After 24 h, 1 mL/kg was administered for 5 days. The results showed that there were significant differences in clinical symptom score and cure rate between the test drug group and the control group (P<0.05). There was no significant pathological changes in the tracheal mucosa of the experimental group, but the pathological changes in the positive control group were significant. The above results showed that Baihu Dingchuan oral liquid had good inhibitory effect on IBV in vitro, which could promote the movement of tracheal cilia, and had good clinical control effect on infectious bronchitis.     

复合益生菌发酵饲料对雪峰乌骨鸡日粮表观消化率及肉品质的影响

本试验旨在研究复合益生菌发酵饲料对雪峰乌骨鸡日粮表观消化率及肉品质的影响。本试验采用单因素试验设计，选用健康、体重相近的17周龄母鸡600只，随机分为5组，每组6个重复，每个重复20只。其中对照组饲喂基础日粮，试验组分别以25%、50%、75%、100%复合益生菌发酵饲料替代基础日粮饲喂，试验期35 d。试验结果表明：①25%、50%发酵料替代组显著提高乌骨鸡对饲料中粗蛋白质（CP）、粗脂肪（EE）表观消化率（P<0.05），75%替代组与对照组差异不显著（P>0.05）。②与对照组相比，75%和100%替代组乌骨鸡屠体率显著增加（P<0.05），25%替代组乌骨鸡胸肌率显著增加（P<0.05），但各试验组腹脂率无显著变化（P>0.05）。③各试验组显著降低胸肌pH_{24 h}及蒸煮损失（P<0.05），显著提高胸肌亮度（L^*）和红度（a^*）（P<0.05），100%替代组滴水损失显著下降（P<0.05）。④50%、75%及100%发酵饲料替代组肌肉DM和CP含量显著升高（P<0.05）；50%、100%发酵饲料替代组显著提高肌肉中蛋氨酸（Met）、苯丙氨酸（Phe）、丝氨酸（Ser）、精氨酸（Arg）含量（P<0.05）。结果提示，在本试验条件下，所用复合益生菌发酵饲料能提高日粮养分表观消化率、改善肉品质，但添加比例与效果相关性不明显，以100%替代组效果最佳。     

禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc基因表达及凋亡的影响

【目的】 探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】 以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500 μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】 ①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】 REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。     

不同来源传染性支气管炎病毒诱导SPF鸡发病的免疫机制研究

试验旨在探讨不同来源的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)诱导SPF鸡发病的免疫机制。选用140只1日龄SPF白来航鸡,随机分为4组,3组攻毒组通过滴鼻点眼途径分别接种鸡源IBV强毒株、鸡源IBV弱毒株和野鸡源IBV毒株3个毒株,对照组以同种方式接种等量灭菌的磷酸盐缓冲液。在感染后12 h、36 h、72 h、7 d和14 d,每组随机选取5只进行剖检,并分别采集法氏囊、肾脏和气管组织,剩余鸡用于观察临床症状、发病及死亡情况。应用实时荧光定量PCR检测攻毒后不同时间点采集的各组织中IBV的病毒载量、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及部分细胞因子(白细胞介素(interleukin,IL)和干扰素(interferon,IFN))表达量的变化。结果显示,感染不同来源IBV毒株之后仅鸡源IBV强毒株感染组SPF鸡出现抑郁、翅膀下垂、甩头等典型的临床症状,且在感染后5~10 d共有7只死亡,死亡率为20%。病理剖检发现,感染鸡源IBV强毒株的鸡肾脏肿大、尿酸盐沉积和有花斑样病变,而感染野鸡源IBV毒株、鸡源IBV弱毒株和对照组的鸡无明显的眼观病变。实时荧光定量PCR结果显示,在鸡源IBV强毒株组的法氏囊、肾脏和气管3个组织中均检测到病毒。对照组和野鸡源IBV毒株组中均未检测到病毒,鸡源IBV弱毒株组只在部分组织中检测到病毒。在感染后72 h,鸡源IBV强毒株组与其他各组相比,TLR1、TLR2、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15基因在法氏囊中的表达量均显著升高(P<0.05),IL-6和IFN-β参与更强烈的抗病毒免疫反应;在感染后7 d,鸡源IBV弱毒株组与其他各组相比,肾脏中TLR2、TLR3、TLR15、TLR21、IL-6和IL-18基因表达量均显著升高(P<0.05)。野鸡源IBV感染后36 h法氏囊组织中IFN-γ基因表达量显著上调(P<0.05)。综上所述,3个IBV毒株中仅鸡源IBV强毒感染引起SPF鸡典型临床发病症状与可视组织病变,且可提高SPF鸡组织中免疫相关因子的基因表达量。本研究结果揭示,不同来源的IBV对SPF鸡的不同致病性与其感染诱导的免疫反应不同有关。     

中兽药复方组合与抗生素防治肉鸡呼吸道疾病的协同效应

为探讨中兽药复方组合与抗生素防治肉鸡呼吸道疾病的协同效应,本研究在规模化鸡场两栋鸡舍内分别随机选取100只3日龄白羽肉鸡,分为两组（Ⅰ组和Ⅱ组）：Ⅰ组饮水添加抗生素,Ⅱ组在添加抗生素基础上的不同阶段分别饲喂中兽药玉屏风口服液（3~7 d）、射干地龙颗粒（10~16 d）、双黄连口服液（22~25 d）、麻杏石甘口服液（27~31 d）。分别于8日龄免疫鸡传染性支气管炎活疫苗、新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗和新城疫-禽流感二联灭活疫苗,免疫后1、7、14、21、28 d采集血清和气管组织,检测新城疫、禽流感（H9）、传染性支气管炎疫苗的抗体水平,观察气管组织病理变化,计算免疫器官指数和平均日增重。结果显示,Ⅱ组的成活率较Ⅰ组提高了1.23%,Ⅱ组末体重与平均日增重极显著高于Ⅰ组（P<0.01）,分别提高了561.25和16.63 g/d;Ⅱ组病鸡呼吸道症状较Ⅰ组轻,病程短,肝脏和心脏无明显病变,脾脏指数在36 d显著高于Ⅰ组（P<0.05）。免疫后21 d,Ⅱ组新城疫、传染性支气管炎和禽流感（H9）疫苗的抗体水平达到最高,显著高于Ⅰ组（P<0.05）;免疫后28 d,Ⅱ组新城疫抗体水平极显著高于Ⅰ组（P<0.01）。综上所述,4种清热解毒、止咳平喘、清肝利胆的中兽药复方组合使用与抗生素促生长和预防肉鸡呼吸道疾病具有协同效应。     

葡萄籽粕替代玉米对种鸡产蛋高峰后期生产性能、鸡蛋品质及新城疫抗体水平的影响

试验旨在研究葡萄籽粕对种鸡产蛋高峰后期生产性能、鸡蛋品质及新城疫抗体水平的影响。选取产蛋率、体重相近,健康状态良好的64周龄罗曼灰父母代种鸡810只,随机分为6组,每组5个重复,每个重复27只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂葡萄籽粕替代基础日粮中3%、4.5%、6%、7.5%、9%玉米的试验日粮（分别为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组）。预试期7 d,正试期30 d。探讨日粮中添加不同水平的葡萄籽粕对种鸡产蛋高峰后期生产性能、鸡蛋品质及新城疫抗体水平的影响及其作用机理。结果表明：葡萄籽粕能够明显抑制种鸡产蛋高峰后期生产性能降低,对于日均产蛋量,试验Ⅲ组极显著高于对照组（P<0.01）,试验Ⅰ、Ⅱ组显著高于对照组（P<0.05）;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组产蛋率较对照组分别提高了12.38%、14.76%、18.09%（P<0.05）,各试验组蛋鸡的日均采食量、料蛋比及破软蛋率与对照组相比差异不显著（P>0.05）;葡萄籽粕处理组鸡蛋的哈氏单位、蛋黄重及蛋壳强度均高于对照组,但随葡萄籽粕添加量的增加没有表现出规律性变化;葡萄籽粕能够降低鸡蛋胆固醇含量（P<0.01）;并能够提高种鸡新城疫HI抗体水平（P>0.05）。综上,在种鸡产蛋高峰后期日粮中以葡萄籽粕替代玉米,可提高种鸡生产性能和新城疫抗体效价,改善鸡蛋品质,降低鸡蛋中胆固醇含量,且以替代6%的玉米效果较好。     

新型滴鼻灭活鹦鹉热衣原体疫苗的免疫效力评价

【目的】 探究由霍乱弧菌菌影(Vibrio cholerae ghosts,VCG)和纳米壳聚糖凝胶(Gel)组合制作的一种新型灭活衣原体疫苗复合佐剂是否可增强鹦鹉热衣原体原体(elementary body,EB)灭活抗原诱导动物机体产生的免疫应答。【方法】 将60只7日龄SPF鸡随机分为4个组,分别为:EB＋VCG＋Gel组、EB＋VCG 组、Gel组和EB组。通过滴鼻途径免疫鸡群,免疫2次,每次间隔14 d,免疫后检测鸡血清中IgG抗体水平、淋巴细胞增殖指数、CD4^＋/CD8^＋T 细胞比例、细胞因子(白介素-4(IL-4)、IL-10、IL-12和干扰素-γ(IFN-γ))含量及攻毒后鸡喉头排菌量和肺脏的病理损伤程度。【结果】 与Gel和EB组相比,EB＋VCG＋Gel和EB＋VCG组IgG 抗体水平、淋巴细胞增殖指数、IFN-γ含量和CD4^＋/CD8^＋T细胞比值显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。此外,与Gel和EB组相比,攻毒后第12天,EB＋VCG＋Gel组喉头排菌量极显著降低(P<0.01),攻毒后第7天,肺脏损伤评分极显著降低(P<0.01)。【结论】 壳聚糖凝胶、VCG、灭活衣原体 EB 组合构成的新型滴鼻衣原体疫苗经鼻腔接种动物后可刺激动物机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,阻断鹦鹉热衣原体经呼吸道途径传播,防止鹦鹉热衣原体从动物向人群传播。     

Study on the Growth Promoting Effect of Crossbred Buffalo Calves Immunized with DNA Vaccine of Co-expression of Somatostatin and Cortistatin

The purpose of this study was to investigate the growth promoting effect and the safety of the vaccine in crossbred buffalo calves immunized with somatostatin and corticostatin co-expression DNA vaccine.The identified plasmid of pVGS/2SS-2A-S/CST-asd was electroporated into attenuated Salmonella Choleraesuis C500 to construct the co-expression live vector vaccine of somatostatin and corticostatin,and evaluate the effect on the growth performance of the crossbreds buffalo after nasal immunization.Twenty four 2-6 months of age crossbred buffalo calves with similar body weight were randomly divided into 4 groups immunized with the vaccine in low dosage group (TL),middle dosage group (TM),high dosage group (TH) and negative control group (NC).Immunization was performed once a day for 3 consecutive days,and a booster was given 2 weeks late.The results showed that the antibody of SS and CST could be produced on 2 weeks after the primary immunization,and TL group was the best,showing higher antibody level and positive rate.At 7 weeks,the positive rate of experimental group showed a downward trend.The daily gain of each experimental group was higher than that of control group at 2 and 7 weeks after the primary immunization,but there was no significant difference between experimental groups (P>0.05),while the average daily gain of antibody positive group (P) was significantly higher than that of negative group (N) at 2 weeks (P<0.05).The results of related hormones showed that the levels of growth hormone (GH) and insulin growth factor 1 (IGF-1) were higher in experimental groups at 2 and 7 weeks after the primary immunization.In each experimental group,TL group showed the best performance,both extremely significantly higher than that of control group except GH level at 7 weeks after the primary immunization (P<0.01),antibody positive group was also significantly higher than negative group (P<0.05).Cytokine test results showed that the interleukin 4 (IL-4) level in experimental groups at 2 weeks after the primary immunization was higher than that of control group,and the IL-4 level in TL and TM groups was extremely significantly higher than that of control group (P<0.01),especially in TL group.The IL-4 level in TL and TH groups at 7 weeks after the primary immunization was significantly higher than that of control group (P<0.05).At 2 weeks after the primary immunization,the level of immune interferon γ (INF-γ) in control group was extremely significantly higher than that of experimental groups (P<0.01),but at 7 weeks after immunization was significantly lower than that of TL and TH groups (P<0.05).The levels of IL-4 and INF-γ in antibody positive group were significantly higher than that of negative group at 2 and 7 weeks after the primary immunization (P<0.05),respectively,and there was no significant difference among other groups (P>0.05).The levels of blood glucose (GLU),total protein (TP),total cholesterol (CH) and urea nitrogen (BUN) in serum showed that except that the level of total protein in TL group at 2 weeks after the primary immunization was significantly higher than that of control group (P<0.05),there was no significant difference of other indexes among each group (P>0.05).In order to confirm the safety of the vaccine,the genes of water,soil and fecal samples after immunization were amplified,which were not detected in PCR sensitivity range.The results indicated that the vaccine could achieve a good immune effect,make the body produce a significant immune response,and the effect of the low dosage group was the best.The vaccine did not cause adverse effects on the environment.     

3种添加剂对91~115日龄清远麻鸡生长性能、抗氧化性能和肉品质的影响

本研究旨在探究3种不同添加剂对91~115日龄清远麻鸡生长性能、抗氧化能力、肌肉品质、肌肉感官评定及风味物质含量的影响。试验采用单因素随机分组设计,选用1 200只91日龄清远麻鸡母鸡分为4个组,每组10个重复,每个重复30只鸡,饲养周期25 d。对照组饲喂基础饲粮（CON）,3个处理组分别在基础饲粮中添加纳米铜复配预混剂（NC）、灵芝孢子粉复配预混剂（GLS）和大豆异黄酮预混剂（SI）。试验结束后,采集试验鸡血浆、空肠黏膜及胸肌样品,测定血液与空肠的抗氧化能力、胸肌肉质性状及风味物质含量。结果显示,与对照组相比,①3种添加剂对91~115日龄清远麻鸡的生长性能及胴体性状均无显著影响（P>0.05）;②3种添加剂组试验鸡胸肌亮度（L^*）值显著降低（P<0.05）、pH显著提高（P<0.05）,GLS组胸肌滴水损失显著降低（P<0.05）;③使用蒸的方式烹饪时,SI组肌肉的色泽与外形评分显著提高（P<0.05）,GLS组肌肉在蒸和煮的烹饪方式下多汁度均显著提高（P<0.05）;④NC与SI组试验鸡肌肉中肌苷酸与谷氨酸含量显著提高（P<0.05）,SI组肌内脂肪含量也显著提高（P<0.05）;⑤NC组试验鸡血浆谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-Px）活性及SI组试验鸡空肠GSH-Px活性均显著提高（P<0.05）,GLS组试验鸡空肠丙二醛（MDA）含量显著降低（P<0.05）。综上,在本试验条件下,3种添加剂对91~115日龄清远麻鸡生长性能与胴体品质没有显著影响,但可提高肉鸡抗氧化能力,改善其肉品质,提高肌肉感官特性,其中NC与SI可增加肉中风味物质含量,效果更优。