牦牛血清转铁蛋白的制备及应用--转铁蛋白在无血清细胞培养中的应用

观察了牦牛血清转铁蛋白对无血清细胞培养基中SP2／0细胞株和CHO细胞株生长的影响。支持细胞的培养实验结果：牦牛血清转铁蛋白促SP2／0细胞生长的最大增值浓度为96．0个／ml，倍增时间为22．72h；促CHO细胞生长的最大值浓度为78．6个／ml，细胞倍增时间为19．73h。结果表明，在无血清细胞培养基中加入牦牛血清转铁蛋白能使CHO，SP2／0细胞株正常地生长，繁殖及传代。     

羔羊血清促细胞生长效果的研究

为研究羔羊血清促细胞生长的效果,用羔羊血清以及羔羊与新生牛混合血清来培养VERO、BHK-21细胞,同时培养SP2/0-Ag14细胞并进行计数。结果表明：羔羊血清促细胞生长效应明显低于新生牛血清,但是与牛血清以不同比例混合后,促细胞生长效应有明显的提高,比例在4∶6和5∶5时,促细胞生长能力与牛血清接近。因此,在细胞培养过程中,把羔羊血清和新生牛血清按1∶1混合使用,既可降低成本,又具有良好的促细胞生长效果,使羔羊血清得到了充分利用,并产生一定的经济效益和社会效益。     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞，通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力，进而对血清质量作出评价。结果表明，自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96)，并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05)，具有较好的重复性；而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

不同批次新生牛血清对MDCK细胞培养效果的研究

为筛选适宜MDCK细胞生长的最佳血清，分析6个批次新生牛血清在两种培养方式即贴壁静置培养条件下MDCK细胞的生长状态、平均集落形成率及微载体悬浮培养条件下MDCK细胞的生长状态、生长速率、生长动力学情况。结果表明6组新生牛血清贴壁静置培养的MDCK细胞，平均集落形成率最大的为第Ⅴ组，最小的为第Ⅰ组，由大到小依次为第Ⅴ、Ⅵ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅰ组；微载体悬浮培养条件下的MDCK细胞，最大增殖密度从大到小依次为第Ⅳ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅴ、Ⅱ、Ⅰ组，平均倍增时间由大到小依次为第Ⅵ、Ⅴ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅰ组。因此，通过对不同批次血清贴壁静置培养的MDCK细胞生长状态、平均集落形成率及微载体悬浮培养的MDCK细胞生长状态、生长动力学评价，筛选出适宜细胞生长的新生牛血清批次为第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组，而第Ⅰ组新生牛血清对细胞生长的促进效果不明显，细胞生长状态不佳。     

PRRSV NVDC-JXA1株在Marc-145细胞上增殖条件的优化

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NVDC-JXA1株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、病毒吸附时间、收毒时间和病毒冻融次数等条件。结果表明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量80 mL/L,细胞接种密度150 000个/mL,pH7.0条件下生长状态最好;PRRSV NVDC-JXA1株的最佳接种剂量为400 TCID50/mL,病毒吸附时间为30 min,收毒时间为接种后72 h,在-20℃冻融3次,PRRSV NVDC-JXA1株增殖效果最好。该结果为NVDC-JXA1株PRRSV疫苗的生产提供了依据。     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞,通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力,进而对血清质量作出评价。结果表明,自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96),并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05),具有较好的重复性;而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

兽用生物制品生产用牛血清质量标准研究——牛血清对Sp2/0细胞增殖试验研究

为制定兽用生物制品生产用牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准,将处于对数生长期的Sp2/0细胞分散,配制成50万/mL细胞悬液,用含10%不同牛血清的MEM营养液,在96孔细胞培养板上作对倍稀释,在5%CO2培养箱37℃培养48 h,计数每种血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率。结果表明,胎牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为20%-26%,犊牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为12%-18%。以胎牛血清作为标准参考血清计算不同牛血清对Sp2/0细胞的相对克隆形成率,3批胎牛血清的相对克隆形成率均在80%以上,6批有效期之内的新生牛血清的相对克隆形成率为50%左右。因此,将兽用生物制品生产用胎牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于80%;新生犊牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于50%。     

不同生长时期牛血清对细胞培养效果的影响

[目的]为了检测不同生长时期的牛血清的细胞培养效果,从而在今后的实验中更加合理地选择牛血清进行细胞培养。[方法]实验采用两组采自不同年龄段的牛血清对Sp2/0—Ag14细胞进行培养,并对细胞生长的细胞数量、细胞形态等定期进行测定及观察并绘制出细胞生长曲线,计算出细胞倍增时间,以比较两组牛血清细胞培养的效果。实验分为两组:一组为3月龄采血的牛血清(A组),另一组为14日龄采血的牛血清(B组)。[结论]结果表明,应用两组牛血清培养的Sp2/0—Ag14细胞的培养倍增时间分别为A组牛血清17.8h和B组牛血清17.1h;表明B组牛血清的细胞培养效果优于A组牛血清。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4-F112株在Marc-145细胞上最佳增殖条件的研究

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HuN4-F112株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、收毒时间和病毒液冻融次数等条件。结果证明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量8%、细胞接毒密度1.5×105个/mL、pH7.1条件下生长状态最好;PRRSV HuN4-F112株的最佳接种剂量为3.0×105 TCID50/mL,收毒时间为接种后70～72小时,在-18℃冻融3次,PRRSV HuN4-F112株增殖效果最好。该结果为HuN4-F112株PRRSV疫苗的生产提供了依据。     

新生牛血清促细胞生长活性检测方法的建立与应用

牛血清是医药生物技术产品中重要的原辅材料之一,做好牛血清的质量控制是提高生物制品质量的重要环节。本研究通过应用PK15、BHK21和ST三种兽用生物制品研制中常用的细胞作为载体,选用国内同等价位5个不同厂家生产的新生牛血清作为比较对象,采用细胞倍增时间测定法、细胞克隆形成率测定法、细胞三次连续传代培养法、MTT比色法和微量终点稀释法五种血清质量鉴定的方法进行比较,检测新生牛血清的促细胞生长活性,最终确定了MTT比色法作为便捷高效快速筛选新生牛血清的检测方法。     

牦牛胎儿成纤维细胞的分离培养

采用30d胚龄左右的牦牛胚胎，用2种不同的消化液消化后，将所得的牦牛胎儿成纤维细胞（yakembryonicfibroblasts，YEF）培养于不同血清含量的RPM11640培养液中，并接种于2种不同材质的培养瓶表面，对YEF的分离方法、培养所需胎牛血清（FBS）添加量和不同基质表面对YEF生长的影响进行了研究。结果表明，含150mL／LFBS的RPMI1640培养基最适合YEF生长，可传代27次以上；经用RPMI1640和D-Hank’S液配制的2．5g／L胰蛋白酶消化，所得的YEF的细胞活率差异不显著（P〉0．05），其原代细胞在含100mL／L胎牛血清的RPMI1640培养液中的贴壁率差异极显著（P〈0．01）；不同生长基质对YEF的形态没有显著影响。     

牛血清中蛋白组分初步分析及其对细胞培养的影响

为探讨牛血清中蛋白组分对细胞培养的影响,应用凝胶过滤层析对不同牛血清进行初步组分分析,并应用MTT比色法衡量不同牛血清的促细胞生长作用.结果表明,蛋白组分大小相对较为一致的新生牛血清、商品血清1、2、5(一个波峰)与蛋白组分差异较大的成年牛血清、商品血清3、4(两个或者两个以上波峰)的促细胞生长作用相比较差异显著(P相似文献   

几种动物血清作为CEF培养天然培养基的比较研究

测试了６种不同动物血清作为鸡胚成纤维细胞（ＣｈｉｃｋｅｎＥｍｂｒｙｏＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＣＥＦ）培养天然培养基的效果。其结果为：所试各血清对ＣＥＦ均具有促细胞贴壁作用。胎牛血清、鸡血清、兔血清促细胞生长作用较强，２４ｈ可使ＣＥＦ长满单层；胎牛血清支持细胞生存期最长（２０ｄ），其次是成牛血清和山羊血清（１７ｄ）。     

小白鼠乳腺上皮细胞的体外培养及形态学变化

以无菌手术法取健康妊娠期、泌乳期昆明小白鼠的乳腺组织，用胰蛋白酶、胶原酶1分段消化法获得小鼠乳腺细胞。生长培养液为DMEM／F12，含10％胎牛血清，添加胰岛素（5μg／mL）、EGF（5ng／mL）、氢化可的松（1μg／mL）、青霉素（200IU／mL）及链霉素（0．1mg／mL）。从乳腺组织中获得的细胞直接放入-80℃冰箱中进行冻存，冻存液为DMEM／F12，含20％胎牛血清、10％DMSO。用倒置显微镜观察细胞形态，发现乳腺组织消化后即可获得呈圆饼状的上皮细胞；培养过程中，乳腺上皮细胞的形态以鹅卵石型和多角型为主，增殖可形成乳头状结构，称之为乳球体，大量增殖后形成圆顶型结构。细胞核呈圆形或椭圆形，在传代过程中，乳腺上皮细胞可形成岛屿状的闭合型细胞群，边界清晰，细胞之间结合紧密，细胞间呈拉网结构。结果表明：获得典型上皮细胞形态的小鼠乳腺细胞原代培养物，从泌乳期小鼠获得的乳腺上皮细胞传至第1代时无法长成单层；而从妊娠期小鼠获得的乳腺上皮细胞传至第3代时才无法长成单层；冻存后复苏的乳腺细胞在培养过程中仍然具有典型的上皮细胞形态，并且增殖旺盛。     

猪血管内皮细胞体外生长特性的研究

试验以体外分离培养的猪血管内皮细胞为材料，研究了细胞的生长曲线、不同基础培养基对细胞生长的影响及胰岛素在生长液中的适宜含量。结果表明，传代猪血管内皮细胞接种后有ld左右的滞留期，然后细胞进入对数生长期，可持续2d，第5d进入平台期，第8d细胞开始脱落死亡；与MEM相比，M-199更适合于用作培养猪血管内皮细胞的基础培养基；在不用贴附基质和内皮细胞生长因子(ECGF)的条件下，生长液中加入胰岛素，可明显促进细胞的生长和增殖，胰岛素的最适用量为8μg／mL。     

培养基对MDCK细胞贴壁率的影响

为确定培养基种类对犬肾细胞(MDCK)贴壁率的影响,用DMEM、MEM、M199和RPMI1640四种培养基加10%新生牛血清后分别以10个/cm2的密度接种培养MDCK细胞,培养14 d计数每种培养基培养后形成的细胞集落数,并计算贴壁率。结果表明,四种培养基对MDCK细胞均能形成明显的细胞集落,贴壁率分别为78.56%、60.23%、41.13%和39.61%,以DMEM培养基培养MDCK的贴壁率最高。     

IBRS—2传代细胞制备的几点体会

IBRS- 2传代细胞较常用的 BHK- 2 1传代细胞在工业化转瓶培养大生产中难培养。经过一段时间的传代实验 ,选择对其适应的营养液和对消化时间的掌握 ,使该细胞传代稳定 ,细胞形态清晰 ,2～ 3d形成致密单层 ,在大生产中可广泛采用。1　材　料1 .1　 IBRS- 2细胞种　由中国兽药监察所提供。1 .2　 MEM干粉　由美国 Hyclone公司提供。1 .3　血清　来源杭州、郑州 ,均为经滤过除菌的犊牛血清。1 .4　胰酶 - EDTA　由中国科学院新疆化学研究所生化试剂厂提供 ,并经钴 60辐射处理 ,本厂配制。1 .5　 Na HCO3 溶液、抗生素、L -谷胺酰氨　…     

60Coγ-射线辐照新生牛血清对BHK21培养细胞的影响

目的:研究新生牛血清(newborn calf serum NBCS)γ-射线辐照后对BHK21细胞培养的影响。方法:用20kGyγ-射线辐照NBCS后培养BHK21细胞,通过连续传代培养和低密度生长曲线比较辐照前后的细胞生长效果。结果:NBCS辐照后连续传代培养10代,每代细胞生长良好,48 h内形成致密单层,与辐照前没有明显区别。NBCS辐照前后低密度培养BHK21细胞第5代平均最大增殖密度为51.35×104/ml、51.20×104/ml、倍增时间21.89 h、22.59 h;第10代为52.25×104/ml、52.73×104/ml和21.95 h、21.62 h,生长曲线基本一致。结论:NBCS 20kGyγ-射线辐照后不影响BHK21细胞的培养效果。     

鸡肠上皮细胞的分离及原代培养方法

取18日龄鸡胚，研究鸡肠上皮细胞（IEC）分离及原代培养的方法。结果表明：较好的分离条件是肠组织经0.1g／L中性蛋白酶和300U／mL胶原酶Ⅺ联合消化；较佳的培养条件是细胞在含2．5％～5％胎牛血清的DMEM培养基中，39℃、5％～7．5％CO2下培养，IEC可在1～2d贴壁，6～7d明显增殖，11～12d汇合成片。     

黄鳍鲷肝细胞体外培养研究

以黄鳍鲷肝脏细胞为材料 ,研究其肝细胞体外培养适宜的 p H、血清浓度、谷氨酰胺等条件 ,并进行传代培养试验。结果表明 ,培养液为 :MEM含 2 0 %小牛血清、15 g/ L L-谷氨酰胺及 p H 6 .9～ 7.1时 ,在 2 3℃中静置培养 ,黄鳍鲷肝细胞生长良好 ,3～ 5 d长满单层 ,细胞主要为成纤维细胞状 ,并能顺利传代。细胞动力学试验表明 :传代细胞 1～ 2代为适应期 ,3～ 5代为旺盛期 ,6代之后表现出衰老现象