牛胚胎移植试验研究

本研究应用国产激素和器械对奶牛进行超数排卵，采用胚胎移植技术使黄牛繁殖奶牛。５ａ共超排供体牛１８５头，成功１５９头，成功率为８１．９５％；共获卵１２０１枚，头均７．５５±６．３７枚，其中可用胚胎８８０枚，头均５．６８±４．９６枚。同期发情处理受体牛２３６头，发情１３９头，发情率５８．９０％；鲜胚移植受体牛１７８头，受胎７８头，受胎率为４３，８２％，其中移植受体黄牛１４５头，受胎６１头，受胎率４２．０７％，移植受体奶牛３３头，受胎１７头，受胎率为５１．５２％；冷冻胚胎移植受体牛６１头，受胎２７头，受胎率为３７．７０％；５３胚胎移植产犊８５头。确立了应用国产激素垂体促卵泡素（ＦＳＨ）和前列腺素（ＰＧＧ＿（２２））诱发牛超数排卵和发情同期化处理的最佳程序和剂量，并总结出了采卵方法、胚胎鉴定、胚胎冷冻保存和移植等相应环节的技术规程。     

奶牛冷冻胚胎规模化移植效果研究

为了提高奶牛良种化程度,对奶牛冷冻胚胎的规模化移植效果进行了研究。结果表明:PG二次肌注法的发情率显著高于(P<0.05)PG一次肌注法,两种方法的发情同期率均超过85%,受体牛发情时间多集中在肌注PG后48～72h;胚胎解冻后的复苏率达到82.58%,且早期囊胚与囊胚的复苏率要高于桑椹胚(P>0.05);共移植受体牛218头,受胎97头,受胎率为44.5%,且春、秋季的移植效果差异不显著(P>0.05)。为奶牛冻胚的规模化移植研究提供了参考依据。     

影响牛胚胎移植受精率因素探讨

本文论述了太原市和全省各地在牛胚胎引进项目期间,对影响牛胚胎移植成功率的受体牛选择、受体牛饲养管理、受体牛发情鉴定、气候条件、胚胎质量、胚胎解冻操作技术、受体牛移植操作技术等七个因素进行了有益的探讨,取得可喜成果。累计移植受体牛235头,移植妊娠112头,移植妊娠受胎率47.7%,移植受体牛产犊成活率达到94%,为我省全面推广奶牛胚胎生物移植工程技术奠定了坚实基础。     

影响转基因绵羊胚胎移植受胎率的因素

为了提高并稳定转基因胚胎移植受胎率,对可能影响受胎率的供受体同期化程度、移植胚胎数量、受体处理方式、胚胎发育速度、受体注射黄体酮、供体作受体等6个方面进行研究。结果表明,(1)供受体发情时间差在±12h以内,不影响受胎率(P>0.05);(2)每只受体移植2～3枚转基因胚胎的受胎率极显著高于移植1枚的受胎率(P<0.01);(3)在繁殖季节里,受体采用自然发情、肌肉注射PGF2α、肌肉注射PMSG+PGF2α等方式,三者受胎率间差异不显著(P>0.05);(4)发育迟缓的胚胎移植后,受胎率显著低于正常发育胚胎的受胎率(P<0.01);(5)移植后的受体注射2mg黄体酮,不能提高受胎率(P>0.05);(6)供体当作受体使用,不影响受胎率(P>0.05)。     

南德温牛胚胎移植研究

为了研究适于大型肉牛———南德温牛的超数排卵及胚胎移植技术,选择11头适龄南德温牛为供体牛和9头南阳牛为受体牛,进行CIDR-FSH-PG超数排卵和胚胎移植试验。结果表明,供体牛均按时发情,反应率100%,共采胚99枚,获可用胚胎65枚,平均每头5.91枚,可用胚胎率65.0%,可用胚胎等级A、B、C级分别为38.5%、30.8%、30.7%,共移植受体9头,妊娠6头,受胎率66.67%,共产犊9头,其中产双犊3头,其余胚胎进行了冷冻保存。     

CUE-MATE诱导西门塔尔杂交牛同期发情的效果

在同期发情方案中,为更加科学合理地使用CUE-MATE阴道埋置栓,提高移植妊娠率,对同批次2组西门塔尔杂交受体牛分别埋植CUE-MATE和CIDR,使用相同同期发情方案,比较发情率,并对CUE-MATE方案中不同发情时间阶段的牛群移植受胎率进行对比分析。结果表明:埋植不同阴道栓的受体牛发情率均在90%以上,差异不显著(90.38%vs 90.00%,P0.05);两地埋植CUE-MATE不同发情时间的受体牛群,移植鲜胚妊娠率无差异(100%vs 100%,P0.05;100%vs 80%,P0.05),移植冻胚妊娠率差异不显著(41.18%vs 28.57%,P0.05;57.69%vs 33.33%,P0.05),提前发情组冻胚妊娠率下降趋势明显。使用CUE-MATE同期发情时,撤栓时间应推迟10~12 h,使得胚胎移植时受体内环境与胚胎发育阶段相一致,保证鲜胚和冻胚均可获得较理想的受胎率。     

不同方法对受体母牛诱导同期发情效果的比较

为胚胎移植寻找高效、低耗的同期发情方法，用99头同年引进的南阳牛作为胚胎移植受体牛进行试验，采用一次前列腺素注射法随机注射、海绵栓 PMSG PG法、口服孕酮法三种方法处理对比，结果表明：一次前列腺素法受体牛同期发情率达到25．0％，48h同期率达到14．3％，受胎率达到35．7％；海绵栓 PMSG PG法受体牛同期发情率达到75．0％，48h同期率达到62．5％，受胎率达到44．4％；口服孕酮法受体牛同期发情率达到50．0％，48h同期率达到33．3％，受胎率达到44．4％。比较而言，海绵栓 PMSG PG法有较高的同期发情率和受胎率，并且处理成本低(85．8元)，是三种方法中最优方法。     

受体牛黄体位置及黄体等级对胚胎移植效果的影响

为探索黄体等级和黄体位置对胚胎移植后受体牛妊娠率的影响,便于在应用中准确判断受体牛是否可以进行移植,整理、统计分析了137头移植受体牛的记录资料,结果表明:"2次PG"法和"CIDR PG"法处理受体牛,对形成黄体的等级没有影响;同期发情处理后,受体牛A、B、C级黄体的移植妊娠率分别为47.37%、42.86%和48.34%,黄体等级之间无明显差异(p>0.05);左、右侧黄体的妊娠率分别为43.63%和47.56%,移植时黄体存在的位置与移植妊娠率没有明显差异(p>0.05)。     

AI+MOET技术获得双胎犊牛技术的初探

本实验采用AI与MOET相结合的方法诱导双胎,供受体牛的同期发情,是根据已知供体牛的情期,来推算受体牛的同期发情处理时间,供体牛用一次PGF2α的处理,受体牛用两次PGF2α处理的方法,处理的三头牛全部发情。超数排卵采用FSH减量法,处理供体牛1头获得10枚胚胎,其中可用胚9枚,对2头受体牛先进行人工授精,然后在人工授精后第7天进行胚胎移植,处理后两头受体牛都怀孕,产下5头犊牛。     

奶牛性控胚胎移植技术应用试验

张家口地区奶牛场开展了性别控制胚胎移植的试验和奶牛的性控精液配种试验,使用冷冻性控胚胎(A级)30枚,移植给30头14～18月龄青年母牛受体,自然发情的移植了12头,同期发情处理母牛移植18头。在胚胎移植后30d内无反情的17头,80d后进行了直肠妊娠检查,确定移植成功共14头,移植成功率为46.7%;产14头母犊,性别控制准确率达100%。结果表明,直接使用性控胚胎进行移植是加速良种引进、提高繁殖效率和牛群质量的有效途径。     

兔胚胎移植影响因素研究

【目的】探讨分析兔胚胎移植的影响因素,为提高兔胚胎移植效率及生产转基因兔奠定基础。【方法】采集获得的交配胚胎经体外培养后,按单只受体移植胚胎数、受体类型（经产母兔与青年母兔）、受体同期发情方式随机分组,对比观察胚胎移植后受体母兔的妊娠情况。【结果】单只受体兔每次移植10～20枚和20～30枚胚胎获得的妊娠率分别为23．1％和20．0％,二者差异不显著（P〉0．05）;采用经产母兔为受体可获得显著高于青年母兔的妊娠率（27．8％vs13．3％,P〈0．05）;以自然同期发情为受体母兔胚胎移植后获得的妊娠率显著高于诱导同期发情的受体母兔（30．7％vs10．0％,P〈0．05）。【结论】兔胚胎移植时选择自然发情的经产母兔作为受体能获得较好的胚胎移植效果,单只受体移植胚胎数以控制在10-30枚为宜。     

引进时间和营养状况对受体牛同期发情处理效果的影响

应用CIDR加氯前列烯醇对受体牛进行同期发情处理,研究引进时间和不同的营养状况对受体牛同期发情影响的效果。结果显示,三个半月前引进的受体牛经过同期发情处理后,同期发情率93.75%,发情可用率90.69%;一个半月前引进的受体牛经过同期发情处理后,同期发情率77.21%,发情可用率77.05%。同期发情率和发情可用率介于两组受体牛之间差异为极显著(p<0.01);大部分受体牛在48h内表现发情,第一组发情牛所占比例为77.3%,第二组为77.2%;按饲养管理方法补充精料的受体牛平均发情率为80.37%,受体牛的平均发情可用率为79.23%,按当地饲养管理方法没有补充精料的受体牛的平均发情率为60.83%,平均可用率为60.30%,介于两个饲喂不同营养水平的受体牛群平均发情率和平均发情可用率之间差异极显著(p<0.01);可用受体牛中左侧黄体平均占31.36%,右侧黄体平均占68.64%,左侧黄体所占比例同右侧所占比例之间差异极显著(p<0.01),营养水平高的更能提高受体牛右侧黄体所占比例。通过本次研究可以证实受体牛在引进3.5个月后和处理前1.5个月进行补饲是获得较好同期发情效果的重要因素。     

Superovulation of the Cloned Cattle Derived from Somatic Cells and the Transfer of the Vitrified-Thawed Embryos of the Cloning Cattle

In this experiment, it was designed to carry out superovulation on the two cloned cattles, vitrification and transfer of the embryos recovered from them. First of all, it was carried out vitrification on embryos obtained by IVF. Results showed that there were no significant differences between the blastocysts (obtained by IVF) vitrified in EPS10 and these in EPS20 on the resuscitative rate and the developmental rate. The hatched rate of the blastocysts vitrified in EPS10 (31.3%, 35/112) was significantly higher than that in EPS20 (12.2%, 13/107) (P＜0.01), so EPS20 was selected as the vitrification solution to freeze the embryos recovered from the cloned cattle. After superovulation, six (four usable embryos) and ten (nine usable embryos) embryos were respectively recovered from Kangkang and Shuanghuang. Two embryos were selected from the recovered embryos of each cloned cattle to freeze in EPS20, subsequently thawed and transferred into luteal ipsilateral uterine horns of 4 Holstein recipient cows after synchronization of estrus, respectively. At last, one recipient cow (No. 9908) became pregnant and delivered one healthy calf (descendant of the cloned cattle-Shuangshuang). The results of this experiment show that the cloned cattle as well as common cattle had better response to the exotic FSH and better ability to multiovulation, the embryos recovered from the cloned cattle can be vitrificated.     

受体胚龄对鸡原始生殖细胞移植后归巢的影响

【目的】探究受体胚龄对鸡原始生殖细胞(Primordial germ cell,PGC)移植后归巢的影响,确定最佳回注时间窗口,为提高转基因鸡的生产效率提供参考依据。【方法】从广西黄羽鸡胚分离获得PGC,体外培养并进行转基因操作后,移植回注到不同胚龄的受体鸡胚中,移植5 d后分离性腺拍照观察,对比受体鸡胚孵育至14HH~17HH时对PGC迁移归巢到性腺的影响。【结果】分别在14HH~17HH胚龄时移植回注PGC,移植5 d后的鸡胚死亡率为30.0%~60.9%,但不同移植胚龄间的差异不显著(P>0.05)。根据鸡胚性腺中的GFP阳性细胞数可划分为6个等级(I~VI),且随着移植胚龄的增加,PGC迁移效率呈下降趋势。14HH胚龄移植的鸡胚性腺GFP阳性细胞集中在V级(40.0%),15HH胚龄移植的集中在III级(42.1%),16HH和17HH胚龄移植的则集中在II级(45.4%和54.5%),GFP阳性细胞含量最高等级(VI级)仅出现在14HH胚龄移植的鸡胚性腺中。【结论】随着受体胚龄的增加,PGC迁移效率呈下降趋势,但鉴于实际操作的难易程度,确定PGC移植回注的最佳时间窗口为14HH鸡胚(孵育50 h)。     

应用Logistic回归分析山羊胚胎移植妊娠率影响因素的研究

选用30只波尔山羊作供体,89只奶山羊作受体进行胚胎移植,采用LOGISTIC回归分析影响受体妊娠率的影响因素。结果表明:受体发情状况和移植方式对妊娠率产生决定性作用,胚胎发育阶段也会极显著影响妊娠率。LOGISTIC回归分析可有效的应用于繁殖类试验。     

超数排卵对奶牛产奶量及繁殖能力的影响

用FSH+PGF_(2)对16头黑白花奶牛进行超数排卵处理。超排前4d和超排1～10d日均产奶量差异不显著(P>0.05)。超排采胚后1头因年老淘汰,1头冲胚时发现患有慢性卡他性脓性子宫内膜炎进行治疗未配,其余14头冲胚后发情正常,人工授精后均妊娠,和正常牛发情配种妊娠率无差异。超数排卵对奶牛产奶量及繁殖能力无影响。     

体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验

 对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20 的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3% (35/112)极显著高于EPS10组的12.2% (13/107)（P＜0.01）,选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛"康康"和"双双"进行了超排试验,分别获得6枚（4枚可用胚）和10枚（9枚可用胚）胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛"双双"的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素（FSH）具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。     

Artificial Induction of Twinning by an Active Immunization of Beef Cows Against Inhibin Partially Purified from Porcine Seminal Plasma

Two hundred and seventy multiparous Chinese Yellow cattle (beef) were selected at 1 to 3months postpartum and divided into three groups (90 cows for each). Animals were given both a primary and booster immunizations with a total dose of 3 mg (Group Th) or 1.5 mg (Group Tl) of seminal preparation containing inhibin activity, emulsified with Freund‘s complete adjuvant and incomplete adjuvant (for booster), at 3 or 4-week intervals. Other cows were treated with the same volume of seminal preparation without inhibin activity as procedures mentioned above to serve as a control (Group C). Artificial inseminations were given twice at 8 - 12 h intervals when the cow was in heat. Jugular venous blood samples were collected from each cow and used to assay the presence of antibody against seminal preparation by double-diffusion in agar precipitation test and to detect the titer of inhibin antibody by an ELISA method. Data from 247 cows showed that 83.9% (73/87) of cows were in estrus and ovulated 89 ova altogether, of which 19 cows ovulated twin ova and 15 cows produced twins in Group Th (n = 87). However, only 61.1% (44/72) of cows in Group Tl (n=72) and 62.5% (55/88) of cows in Group C were in estrus and ovulated 46 and 52 ova altogether respectively.The ovulation rate (1.27 + 0.03), calving rate ( 126.3% ) and twinning rate (26.3%) in Group Th were greater than those in Groups Tl or C (P＜0.01). Furthermore, the ovulation rate was associated with antibody titer in sera of immunized animals (r = 0.7507, P ＜0.01). These results indicate that active immunization of postpartum cows against inhibin purified from porcine seminal plasma may increase the ovulation rate and induce twinning, suggesting the potential to develop a method to improve fertility in cows.     

澳洲荷斯坦奶牛MOET技术研究

为了快速扩繁良种澳洲荷斯坦奶牛的核心群,对澳洲荷斯坦奶牛MOET技术进行研究。结果表明,在不同月份超数排卵处理澳洲荷斯坦奶牛获得的总胚胎数和可用胚胎数,均无显著性差异（P〉0.05）;超数排卵处理不同生理阶段的澳洲荷斯坦奶牛,获得的总胚胎数差异不显著（P〉0.05）,但经产母牛获得的可用胚胎数明显多于青年母牛（P〈0.05）;而胚龄与受体母牛发情时间的同期性研究发现,桑椹胚和早期囊胚移植到发情后第7 d的受体母牛、囊胚移植到发情后第8 d的受体母牛、扩展囊胚移植到发情后第9 d的受体母牛,均可获得较高的胚胎移植受胎率和产犊率。     

杜泊绵羊冷冻胚胎移植

介绍了从新西兰引进的冷冻杜泊羊胚胎解冻后移植到同期发情湖羊和小尾寒羊母羊受体的方法步骤,并分析、评价了胚胎移植的效果。结果表明:受体羊总平均同期发情率为78.4%,胚胎移植利用率达49.1%,妊娠率达59.4%,产羔率达58.0%,羔羊出生重为4.7 kg(公)和4.3 kg(母),羔羊1月龄和3月龄体重分别为14.9kg和32.4 kg;不同批次和不同品种受体间胚移效果亦存在不同程度的差异;4批次试验共移植冷冻胚胎475枚,产羔266只,现存活245只。该研究建立了可靠而有效的杜泊绵羊冷冻胚胎移植技术,有望在畜牧业科研和生产中广泛推广应用。