氨基酸、维生素对水牛体外受精胚胎体外发育的影响

通过在培养液中添加不同浓度的氨基酸或维生素,探讨其对水牛体外受精(IVF)胚胎体外发育的影响.结果表明:(1)非必需氨基酸可显著提高水牛卵母细胞IVF后胚胎的分裂率,但对囊胚发育率无显著影响;(2)低浓度的必需氨基酸对水牛IVF胚胎的发育具有一定促进作用,但高浓度则有抑制作用;(3)维生素对水牛IVF胚胎发育则有促进作用.在培养液中添加维生素,水牛IVF胚胎的分裂率和第7天囊胚发育率显著提高.     

屡配不孕荷斯坦母牛超数排卵的试验

用加拿大生产的FSH对屡配不孕荷斯坦母进行超数排卵处理，取得良好的超排效果。处理5头，共冲出30枚卵，每头平均6枚，其中可用胚胎为21枚，每头平均4．2枚。     

猪体细胞克隆研究初探

本研究对猪卵母细胞的体外成熟和猪颗粒细胞核移植进行了初步探索试验一证明,体外成熟48h,来自3-6mm大小卵泡的卵母细胞成熟质量较好,当卵泡较大或较小时,成熟质量较差;实验二表明,当卵母细胞成熟液添加7%浓度的发情母牛血清时,成熟效果较好;实验三证明,在猪的克隆过程中,去核时当吸掉1/4卵母细胞胞质时重构胚的分裂率是12.8%,显著高于吸掉1/3卵母细胞胞质时2.5%的分裂率.     

影响猪卵母细胞体外成熟的相关物理性因素

猪的研究是生物新技术中新的热点和经济增长点，猪的体外成熟是体外受精、性别控制、克隆及转基因等许多新技术成功与否的前提和关键，有许多物理方面的因素影响到猪的体外成熟。     

激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响

系统探讨了几种激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响。体外成熟 (IVM) 2 6 h的水牛卵母细胞经 7%乙醇(EH)、钙离子载体 (A2 3187)或离子霉素 (Ion)激活处理 5 min后 ,在 2 m mol/ L 6 -甲二氨基嘌呤 (6 - DMAP)中培养 3～4 h,然后再继续培养 6～ 11d,观察其胚胎发育情况。结果发现 ,5μmol/ L Ion激活处理的水牛卵母细胞分裂率显著高于 EH处理的卵母细胞 (6 3.0 % vs5 4 .2 % ,P<0 .0 5 ) ,其原核形成率也显著高于 EH处理的卵母细胞。激活处理前 ,无Ca2 培养液孵育时间的长短 ,对水牛卵母细胞孤雌发育无显著影响 (P>0 .0 5 )。如用 A2 3187激活处理水牛卵母细胞 ,其激活分裂率则随着浓度的升高而提高。从而表明 ,5 μmol/ L Ion可有效激活水牛卵母细胞     

用单层分化法进行胚胎干细胞神经分化的研究

用单层分化法研究了 ES细胞从 0～ 316 h(第 14天 )的神经分化过程。无饲养层培养的 ES细胞在无血清的N2 B2 7培养基中开始神经分化。从 72 h开始 ,神经外胚层的特异性转录因子 Sox1表达 ,在克隆的边缘逐渐出现向外迁移的细胞 ,形状呈圆形或椭圆形 ,有 1～ 2个细胞突起。在 191h(第 8天 )之后 ,细胞可迁移至克隆边缘的 2 0 0 μm之外 ,这些有细长突起的细胞表达神经元特异性蛋白 Tau。以后 ,迁移细胞的突起开始交叠成网状。 316 h(第 14天 )时 ,细长的纤维可跨越在不同的克隆之间 ,长达上千微米。此时 ,免疫染色的结果表明 ,在克隆的中央有较多的圆形 Nestin阳性细胞 ,而克隆的边缘有大量的 β- tubulin 阳性细胞 ,它们交织成复杂的网状图像。阶段性表达基因的表达时序研究表明 ,ES细胞的特异性转录因子 Oct4开始减弱时 ,Sox1表达开始 ,此时细胞由全能状态进入早期神经分化状态 ;Tau的表达是 Sox1表达的下游事件。这一时序与胚胎发育中神经发生的时序相符。单层分化法能直观地展示 ES细胞的神经分化过程 ,可作为研究细胞分化、胚胎发育及药物筛选的体外模型     

波尔山羊和本地山羊超数排卵和胚胎移植试验初报

采用常规超排方法，使用促卵泡素(FSH)对波尔山羊进行超排处理，其结果如下：用300IU的FSH对波尔山羊逐日渐量递减注射，在第一次配种的同时注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)，2只波尔山羊卵巢上卵泡数和黄体数分别为50个和32个，回收的卵子数为22个，排卵率为64％，回收率为68．7％，可用胚胎率为0。本地羊超排处理后，3只羊卵巢上卵泡数和黄体数分别为66个和24个，排卵率为36．3％，回收的数为16个，回收率为66．7％，可用胚胎率为0。一以上结果表明：以300IU的FSH结合HCG对波尔山羊进行超排处理是有效的。而以相同的FSH剂量结合HCG处理本地山羊时。超排效果不甚理想。     

水牛卵母细胞去核方法的比较

水牛卵母细胞体外成熟22h后，分别用盲吸法、点击法和纺锤体成像系统（Spindle—View System）去核。结果，三者的去核率分别为65．1％、81．8％和95．0％，差异极显著（P〈0．01）。以水牛胎儿成纤维细胞为供体，通过核移植构建的重构胚的融合率、分裂率和囊胚发育率，在上述3种方法之间均没有显著差异（P〉0．05）。认为点击法是一种较为简单、实用和有效的去核方法。     

猪卵母细胞体外成熟和孤雌培养体系的建立和优化

试验系统探讨了猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活方法。结果表明:在成熟液中分别添加FSH(促卵泡素:0.1ng/mL)和hMG(人绝经期促性腺激素:0.01IU/mL)的卵母细胞成熟率差异显著,但2组间的分裂率和囊胚率差异不显著。在成熟液中添加0、10、30、50、70ng/mL或90ng/mL的EGF(表皮生长因子),50ng/mLEGF组的分裂率达到84.90%,囊胚率达到30.20%,显著高于其余各组。分别使用以TCM-199和NCSU-23为基础液的成熟液来成熟培养猪卵母细胞,NCSU-23组的分裂率,成熟率和囊胚率均高于TCM-199组。使用离子酶素激活方法和电激活方法进行对比,离子酶素激活后孤雌胚胎发育效果好,差异极显著(P<0.01)。     

EGF和IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟培养的影响

作者研究了在培养液中添加不同浓度的EGF、IGF-1以及EGF联合IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①添加各种浓度的EGF都可以提高水牛卵母细胞的成熟率，其中50 ng/ml EGF有显著影响(P＜0.05)。②10、20 ng/ml的IGF 1对水牛卵母细胞体外成熟无显著影响(P＞0.05)； 30 ng/ml的IGF-1能显著提高水牛卵母细胞体外成熟率(P＜0.05)。③添加20 ng/ml EGF+30 ng/ml IGF-1组卵母细胞体外成熟率高于添加30 ng/ml的IGF-1组，显著高于添加20 ng/ml EGF组和对照组(P＜0.05)。可见，EGF和IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟有协同作用。