GDNF对海仁酸损伤体外培养新生大鼠背根神经节神经元的影响

N1无血清培养基原代分离培养新生大鼠背根神经节（dorsal root ganglion DRG)神经元，用兴奋性毒素海仁酸（kainic acidKA)损伤体外培养细胞后，加入胶质源性神经营养因子（glial-derived neurotrophic factor,GDNF)作用。最后通过MTT法检测，细胞总蛋白测定，胎盘兰染色计数，形态学观察等方法研究分析GDNF对兴奋性毒素海仁酸损伤后大鼠DRG神经元的活性，存活及突起生长的影响，结果表明：GDNF对体外正常生长的DRG神经元的存活，活性及突起生长没有明显的促进作用。而在海仁酸损伤后，GDNF对其存活和活性有明显的促进作用。但对突起生长没有明显的影响。     

山羊黄体弥散性神经内分泌细胞的分布

为了探查山羊卵巢黄体中是否存在弥散性神经内分泌细胞,采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法对12~18月龄妊娠奶山羊卵巢中弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了研究。结果显示:黄体组织中各区均含有催产素、神经元特异性烯醇化酶、S-100蛋白、突触素和5-羟色胺样免疫反应阳性细胞。这些细胞散在或成团分布,多呈圆形、卵圆形和三角形,一些细胞具有明显的突起。阳性细胞数由多至少顺序为:催产素、突触素、S-100蛋白、神经元特异性烯醇化酶、5-羟色胺。鉴于神经元特异性烯醇化酶、S-100蛋白、突触素和5-羟色胺是弥散性神经内分泌系统广谱的、共同的细胞标记物,结果提示山羊卵巢黄体中存在弥散性神经内分泌细胞。     

绵羊肺炎支原体人工感染SPF鸡胚的研究

为探索SPF鸡胚作为绵羊肺炎支原体实验室感染模型的可行性,本试验用不同浓度绵羊肺炎支原体（10⁸、10⁹、10¹⁰ ccu/mL）经由卵黄囊和尿囊腔两个部位接种7日龄SPF鸡胚,通过统计鸡胚死亡情况和不同鸡胚组织样品中绵羊肺炎支原体检测阳性率（PCR检测和支原体分离鉴定）,确定绵羊肺炎支原体鸡胚感染方式、感染剂量和最佳分离部位,再用3株不同来源的绵羊肺炎支原体分离株感染鸡胚,观察其对鸡胚的致病力。结果表明,绵羊肺炎支原体感染鸡胚最佳接种途径为卵黄囊接种,感染剂量为10⁹ ccu/mL、0.2 mL/只,最佳分离部位为卵黄液。3株支原体均能感染和致死鸡胚,并均能从卵黄液中分离到绵羊肺炎支原体,但对鸡胚的致病性存在一定差异：FL3株致鸡胚死亡率为45%,略高于MoGH3-3株（40%）,二者均高于A3株（25%）,但差异均不显著（P>0.05）;FL3株鸡胚检测阳率为100%,高于MoGH3-3株（85%）及A3株（90%）,但差异也不显著（P>0.05）。本试验初步确定了绵羊肺炎支原体可感染和致死SPF鸡胚,不同分离株对SPF鸡胚致病力有差异,表明SPF鸡胚可作为下一步建立绵羊肺炎支原体实验室感染模型的候选,为绵羊肺炎支原体致病性研究和疫苗研制奠定基础。     

增益素对鸡T淋巴细胞的影响

增益素，在人医上称为多抗甲素(polyactin A，PAA)，是从α-溶血性链球菌培养液中提取的α-甘露聚糖肽类物质，在低浓度下即可激活机体细胞免疫和体液免疫机能，具有免疫调节作用。在小鼠上研究证明，多抗甲素具有抑制肿瘤细胞生长与代谢，促进造血干细胞生长，增强网状内皮系     

神经内分泌细胞在鸭胸腺中的表达特征

应用免疫组化技术并结合图像分析软件研究了β-内啡肽、胃泌素、胰高血糖素、5-羟色胺、血管活性肠肽、神经肽Y、生长抑素细胞在鸭胸腺中的表达特征。结果显示：7种神经内分泌细胞在胸腺中呈强阳性表达;β-内啡肽阳性细胞在皮质部较多,而胃泌素、胰高血糖素、5-羟色胺、血管活性肠肽、神经肽Y、生长抑素阳性细胞在髓质和皮髓质交界区的数量高于皮质部;除胰高血糖素外,其余6种神经内分泌激素在胸腺小体中呈不同程度的阳性反应。本试验结果说明,鸭胸腺不仅是中枢免疫器官,而且具有重要的神经内分泌功能;β-内啡肽阳性细胞在T淋巴细胞的发育中发挥重要作用;胃泌素、胰高血糖素、5-羟色胺、生长抑素、血管活性肠肽、神经肽Y阳性细胞在髓质部和皮髓质交界区的表达有利于其通过内分泌、自分泌或旁分泌方式调节T细胞的发育。同时,也探讨了胸腺小体的功能。     

m6A甲基化在鸡肌肉生长发育中的表达研究

试验旨在研究RNA m6A修饰相关基因去甲基化酶Alk B同源蛋白5（Alk B homologue 5，ALKBH5）、去甲基化酶肥胖相关蛋白（fat mass and obesity-associated protein，FTO）、甲基转移酶样蛋白3（methyltransferase like 3，METTL3）、甲基转移酶样蛋白14（methyltransferase like 14，METTL14）和成肾细胞瘤1-结合蛋白（Wilms’tumor 1-associating protein，WTAP）在鸡骨骼肌发育过程中的表达，分析其与骨骼肌m6A甲基化水平的相关性。首先，利用实时荧光定量PCR技术检测m6A甲基化相关基因在金茅花鸡12（E12）、14（E14）、16（E16）、18（E18）胚龄和1日龄腿肌和胸肌组织中mRNA表达水平，以及其在鸡成肌细胞50%、100%增殖期和1、2、3、4、5 d分化期的mRNA表达水平；随后，利用m6A甲基化试剂盒检测金茅花鸡E12和1日龄腿肌和胸肌组织中m6A甲基化修饰水平，与m6A甲基化相关基因表达水平进行相关性分析。结果显示，m6A去甲基化基因ALKBH5和FTO mRNA表达水平在骨骼肌发育过程中显著上调（P<0.05），即在E12、E14低表达，E16、E18逐渐上调，1日龄达到最高。m6A甲基化写入基因METTL14、METTL3和WTAP mRNA表达水平在E12、E14、E16逐渐上升，E18下降，随后至1日龄表达量回升。在细胞增殖过程中，ALKBH5、FTO、METTL14、METTL3和WTAP基因表达均上调；在细胞分化过程中ALKBH5和FTO基因表达水平显著上调（P<0.05），在分化第5天达到最高。METTL14、METTL3和WTAP基因mRNA表达水平在细胞诱导分化的1、2、3、4 d表达量呈下降趋势，而在诱导分化的第5天有所回升。甲基化水平检测结果显示，腿肌和胸肌m6A甲基化水平变化趋势一致，均在胚胎发育过程中显著下降（P<0.05），至1日龄达到最低。相关性分析结果显示，鸡骨骼肌RNA m6A甲基化水平与m6A去甲基化修饰基因ALKBH5、FTO mRNA表达水平呈显著负相关（P<0.05）。综合以上试验结果，推测m6A甲基化修饰与鸡骨骼肌发育相关，而去甲基化基因ALKBH5、FTO可能通过调控RNA m6A甲基化水平，影响鸡骨骼肌发育。本研究结果为进一步研究m6A甲基化修饰调控鸡骨骼肌生长发育的功能和分子机制提供理论依据。     

雌激素受体与M2mAchR在成年雌兔背根神经节中的共存

为检测成年雌兔背根神经节中是否存在雌激素受体(ER)与M2型乙酰胆碱受体(M2mAchR)的分布与共存,采用免疫荧光双标记染色法对ER与M2mAchR在背根神经节中的分布情况进行了研究。结果显示,在成年雌兔背根神经节中:(1) ER分布主要以神经元为主。其中,ERα主要表达于中小型神经元,而ERβ则多分布于大中型神经元。(2)相较ER而言,M2mAchR分布更为广泛,除神经元外,神经纤维等组织上也有弱阳性表达。(3)两种ER与M2mAchR均有共存现象,但共存情况存在差异,ERα/M2mAchR主要共分布于中小型细胞,ERβ/M2mAchR主要共分布于大中型神经元。结果表明,首先,雌激素具有通过影响背根神经节部分神经元的活动而实现对躯体内脏感觉活动间接调节的条件。其次,在此影响的机制中,雌激素除可以直接作用于神经元上的受体之外,还具有与共表达的M2mAchR交互作用而实现的条件。为研究雌激素影响神经系统调控活动的机制以及背根神经节的神经内分泌调节机制提供了重要的形态学依据。     

细胞骨架抑制剂、电激活液对兔卵孤雌激活和发育的影响

应用细胞骨架抑制剂细胞松弛素B和秋水仙素处理兔成熟卵母细胞，然后采用电激活的方法激活兔卵母细胞，观察细胞骨架抑制剂对兔卵母细胞孤雌激活和孤雌发育的影响，结果表明：应用不同的电激活液，即甘露醇、Zimmerman氏和山梨醇对兔卵母细胞的孤雌激活效果无显著性差异（P〉0．05）；用7．5μg&#183;mL^-1细胞松弛素B处理卵母细胞后孤雌激活，其2-细胞胚率（82．2％）和囊胚发育率（43．4％）与对照组（76．4％和51．5％）相比无显著性差异（P〉0．05）；用1μg&#183;mL^-1秋水仙素处理兔卵母细胞，兔卵母细胞孤雌激活后的2-细胞胚率（64．9％）和囊胚发育率（23．8％）明显下降，与对照组相比存在显著性差异（P〈0．05）；用细胞松弛素B和秋水仙素共同处理的2-细胞胚率（62．5％）和囊胚发育率（30．9％）与秋水仙素单独处理的结果无显著性差异（P〉0．05）。因此，秋水仙素对兔卵母细胞的孤雌激活影响比CB更大。通过免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜观察发现，细胞骨架抑制剂处理后，经孤雌激活获得的囊胚中，微丝和微管结构未见异常。     

生长抑素对某些消化组织的抑制作用

胃肠道激素可称之为是一类调节胃肠、胰生理功能的化学信史 ,包括胃泌素、缩胆囊素、胃泌素释放肽、神经降压素、缩氨酸YY、胰高血糖素样肽 - 2和生长抑素等。对胃、肠和胰的分泌、运动、消化和吸收都有不同效用 ,亦能促进肠黏膜层细胞和胰脏生长。对乳房和前列腺癌也有类似效应 ,通常在胃肠道癌症组织上发现有胃肠道激素受体的异常表达 ,这些激素也能通过阻断某些相关受体来改变动物的生长性能。虽然绝大部分胃肠道激素体现促进效应 ,但也不能忽视生长抑素对消化组织的抑制作用。生长抑素生长抑素 (Somatostatin ,简称SRIF或SS)最初从…     

左旋咪唑对鸡离体外周血淋巴细胞的作用

本文报道了左旋咪唑对鸡离体外周血淋巴细胞（PBL）增殖及伴刀豆球蛋白A（ConA)诱导细胞（CIC）活性的作用；左旋咪唑以剂量依赖性方式促进鸡PBL的增殖；与ConA对促进鸡PBL增殖呈现协同作用；对脂多糖（LPS）激活鸡PBL具有明显促增殖作用；可逆转磷酸组胺和肾上腺素对ConA和LPS激活鸡PBL增殖的抑制作用；低浓度左旋咪唑不能逆转氢化可的松对ConA激活鸡PBL增殖的抑制作用，但高浓度（100-400μg/ml）可明显逆转氢化可的松的抑制作用；左旋咪唑可明显逆转氢化可的松的对LPS激活鸡PBL增殖的抑制作用；可促进CD4^ 细胞增殖，抑制CD8^ 细胞增殖，使CD4^ /CD8^ 细胞比值升高，CIC活性增强。     

The effects of canine bone marrow stromal cells on neuritogenesis from dorsal root ganglion neurons in vitro

The present in vitro study was designed to evaluate whether canine bone marrow stromal cells (BMSCs) promote neurite outgrowth from dorsal root ganglion (DRG) neurons. Bone marrow aspirates were collected from iliac crests of three young adult dogs. DRG neurons were cultured on BMSCs, fibroblasts, or laminin substrates. DRG neurons were also cultured in BMSC- or fibroblast-conditioned media. DRG neurons grown on BMSCs extended longer neurites and developed a much more elaborate conformation of branching neurites compared to those on fibroblasts or laminin. Quantitative analysis revealed that these effects were associated with the emergence of increased numbers of primary and branching neurites. The effect appears to be dependent upon cell-cell interactions rather than by elaboration of diffusible molecules. With more extensive investigations into the basic biology of canine BMSCs, their ability for promoting neurite outgrowth may be translated into a novel therapeutic strategy for dogs with a variety of neurological disorders.     

Fibronectin modified expression of Sonic hedgehog in ATRA-mediated neuronal differentiation

In this study, the effect of fibronectin on the neurite outgrowth from embryoid bodies (EBs) in neurodifferentiated embryonal carcinoma P19 cells was examined. The neurite outgrowth on fibronectin was maintained for a longer time in comparison with those on collagen or laminin. Quantitative RT-PCR revealed that mRNA level corresponding to sonic hedgehog (Shh) in neurodifferentiated P19 cells was upregulated on fibronectin, whereas collagen or laminin did not affect. Further knockdown of integrin αv subunit in P19 cells demonstrated that expression of Shh was mediated through interaction between fibronectin and integrin. Additionally, exogenous Shh agonist accelerated neurite outgrowth from embryonic stem cell-derived EBs without large change of neuronal phenotype expression. Taken together, fibronectin could maintain neurite outgrowth via increased Shh expression.     

Activin A: from sometime reproductive factor to genuine cytokine

The growth factor, activin A, was initially characterized as a putative reproductive hormone but is now known to have many other divergent roles. One of these is during inflammation. Following intravenous injection of bacterial lipopolysaccharide (LPS) into sheep, activin A is released extremely rapidly into the circulation. The release of activin A appears to be independent of fever, prostaglandins or other key proinflammatory cytokines such as TNF-alpha or IL-1beta. While the precise roles and function of this factor in inflammation are yet to be elucidated, the activin response occurs in other mammalian species besides the sheep and elevated activin has been documented for a number of clinical inflammatory conditions. Activin A therefore seems to be part of the regulatory component of the innate immune response.     

不同猪种5-羟色胺受体基因的表达及其与肉质的相关性分析

为研究5-羟色胺（5-HT）受体基因在不同猪种的表达及其与肉质的关系,试验选取淳安花猪与杜长大三元猪各12头,同时饲喂,达上市体重时分别屠宰,测定胴体、肉质性状及肌肉、脂肪中的5-HT受体基因表达量。结果表明：淳安花猪、杜长大三元猪的平均屠宰体重分别为88.1、102.4kg;淳安花猪的板油率、背膘厚、肌内脂肪等指标均显著高于杜长大三元猪（P〈0.05）;屠宰率、眼肌面积杜长大三元猪显著高于淳安花猪（P〈0.05）。5-HT2A、5-HT7受体基因在2个猪种脂肪组织中的表达量均显著高于肌肉组织（P〈0.05）,杜长大三元猪的肌肉中5-HT2A、5-HT7表达量显著低于淳安花猪（P〈0.05）,而脂肪中表达量两猪种间差异不显著。5-HT2A、5-HT7受体基因表达量与屠宰肉质指标之间基本呈负相关,尤其是肌肉中的5-HT2A表达量,呈较强负相关（杜长大三元猪）或显著负相关（淳安花猪）。研究初步认为,5-HT受体基因在中外猪种之间存在表达差异,并与屠宰肉质性状具有相关性。     

双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响

观察双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响,为临床预防和治疗糖尿病及其并发症提供理论参考。通过链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）结合高糖高脂饮食诱导构建2型糖尿病（type 2diabetes mellitus,T2DM）大鼠模型,糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组（diabetes model control,DMC）、低剂量骆驼奶组（2ml/d）（low camel milk,LCM）、高剂量骆驼奶组（5ml/d）（high camel milk,HCM）和盐酸二甲双胍组（200mg/kg）（metformin hydrochloride,MTH）,每组12只,另设正常对照组（control group,C）。建模成功后,试验组处理4周后检测大鼠空腹血糖（FPG）浓度变化;采用苏木精-伊红（HE）染色方法检查肾脏组织的病理变化;采用荧光定量Real time-PCR法检测Bax（Bcl2-associated X protein,Bax）、Bcl-2（B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）、细胞凋亡蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3）和核转录因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）mRNA的表达丰度;采用免疫组织化学染色法和免疫印迹法观察肾脏组织凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果显示,与DMC组相比,LCM、HCM、MTH组大鼠FPG浓度均显著下降（P〈0.01）,LCM组大鼠胰岛素敏感性指数（ISI）显著升高（P〈0.01）;HE染色显示DMC组肾小球体积增大,囊腔变小,肾小球内出血严重,而LCM、HCM、MTH组肾小球体积、囊腔间隙较正常,肾小球出血明显减少;Bax mRNA和NF-κB mRNA在DMC组中表达量最高,Bcl-2mRNA和Caspase 3mRNA分别在LCM组和HCM组有较高的表达量;与DMC组相比,LCM、HCM、MTH组大鼠肾脏细胞Bax蛋白表达减低,Bcl-2蛋白表达升高。结果表明,双峰驼奶能显著降低糖尿病大鼠肾脏损伤,抑制其细胞凋亡,对糖尿病及其并发症的治疗发挥有效作用。     

Pituitary effects of steroid hormones on secretion of follicle-stimulating hormone and luteinizing hormone

Steroid hormones have a profound influence on the secretion of the gonadotropins, follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH). These effects can occur as a result of steroid hormones modifying the secretion of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) from the hypothalamus, or a direct effect of steroid hormones on gonadotropin secreting cells in the anterior pituitary gland. With respect to the latter, we have shown that estradiol increases pituitary sensitivity to GnRH by stimulating an increase in expression of the gene encoding the GnRH receptor. Since an estrogen response element (ERE) has not been identified in the GnRH receptor gene, this effect appears to be mediated by estradiol stimulating production of a yet to be identified factor that in turn enhances expression of the GnRH receptor gene. However, the importance of estradiol for enhancing pituitary sensitivity to GnRH during the periovulatory period is questioned because an increase in mRNA for the GnRH receptor precedes the pre-ovulatory rise in circulating concentrations of estradiol. In fact, it appears that the enhanced pituitary sensitivity during the periovulatory period may occur as a result of a decrease in concentrations of progesterone rather than due to an increase in concentrations of estradiol. Estradiol also is capable of altering secretion of FSH and LH in the absence of GnRH. In a recent study utilizing cultured pituitary cells from anestrous ewes, we demonstrated that estradiol induced a dose-dependent increase in secretion of LH, but resulted in a dose-dependent decrease in the secretion of FSH. We hypothesized that the discordant effects on secretion of LH and FSH might arise from estradiol altering the production of some of the intrapituitary factors involved in synthesis and secretion of FSH. To examine this hypothesis, we measured amounts of mRNA for activin B (a factor known to stimulate synthesis of FSH) and follistatin (an activin-binding protein). We found no change in the mRNA for follistatin after treatment of pituitary cells with estradiol, but noted a decrease in the amount of mRNA for activin B. Thus, the inhibitory effect of estradiol on secretion of FSH appears to be mediated by its ability to suppress the expression of the gene encoding activin.     

孕酮对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14和MD2的影响

先分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,经差速贴壁法纯化后,随机分为6组：空白对照组、0.5mg/L脂多糖（LPS）组、10-6 mol/L孕酮（P4）组、LPS＋10-5 mol/L P4组、LPS＋10-6 mol/L P4组、LPS＋10-7 mol/L P4组。各组在处理12、24h分别提取上清液,ELISA法测TNF-α和IL-1β的含量;各组在处理24h分别提取细胞总RNA,用RT-PCR法测TLR4、CD14、MD2mRNA的表达。结果显示,处理12、24h,0.5mg/L LPS组TNF-α和IL-1β的含量均极显著高于对照组（P〈0.01）;10-6 mol/L P4组与对照组差异不显著（P〉0.05）;LPS＋10-5 mol/L P4组极显著低于对照组（P〈0.01）;LPS＋10-6 mol/L P4组显著低于对照组（P〈0.05）;而LPS＋10-7 mol/L P4组TNF-α的表达差异不显著（P〉0.05）,IL-1β的表达差异显著（P〈0.05）。说明P4可降低LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-1β的分泌,且呈剂量依赖关系。LPS单独处理,TLR4和CD14mRNA的表达极显著高于对照组（P〈0.01）;10-6 mol/L P4单独处理与对照组无显著差异（P〉0.05）;分别添加1-5、10-6、10-7 mol/L P4组均极显著降低LPS诱导TLR4和CD14mRNA的表达（P〈0.01）,而MD2mRNA的表达差异不显著（P〉0.05）。说明P4可极显著降低LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR4和CD14mRNA表达,但对MD2mRNA表达影响不显著。结果显示,P4能抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-1β的分泌,此过程与细胞TLR4和CD14表达下降相关,而与MD2的表达无关。