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1.
为了克隆巴什拜羊SPLUNC1基因并表达该蛋白,本试验从巴什拜羊肺脏组织中提取总RNA,利用RTPCR方法扩增出SPLUNC1基因开放阅读框序列,将该基因片段插入到真核表达质粒pPIC9K中构建pPIC9K-SPLUNC1重组质粒,然后将pPIC9K-SPLUNC1重组质粒线性化并电击转化入毕赤酵母GS115中,经甲醇诱导蛋白表达后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定目的蛋白。结果表明,经RT-PCR扩增成功获得大小为748bp的SPLUNC1基因;构建的pPIC9K-SPLUNC1重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定与预期结果一致;SDS-PAGE及Western blotting检测鉴定结果表明获得大小为25.53ku的SPLUNC1蛋白。本试验结果为进一步研究巴什拜羊SPLUNC1蛋白的生物学活性奠定基础。  相似文献   
2.
巴什拜羊重组BPI蛋白的体外功能检测   总被引:1,自引:0,他引:1  
研究巴什拜羊重组杀菌性/通透性增加蛋白(recombinant bectericidal/permeability increasing protein,rBPI)的体外生物学特性。向体外培养的鼠脑内皮细胞MBECs(mouse brain endothelial cell)中加入rBPI,利用Annexin V FITC/PI染色法在荧光显微镜下鉴定凋亡细胞,再用琼脂糖凝胶电泳观察DNA ladder,以检测rBPI诱导MBECs凋亡的作用;在体外培养的绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)中加入rBPI,利用real-time PCR技术检测rBPI对MO的抑制作用;在体外培养的大肠杆菌中加入rBPI,利用微量肉汤稀释法检测rBPI的抑菌作用;在体外培养的绵羊中性粒细胞中加入MO,利用real-time PCR技术检测BPI mRNA的表达水平。结果表明,Annexin V FITC/PI染色法可观察到凋亡早期细胞呈绿色,凋亡晚期或死亡细胞呈红色,在540nmol/L rBPI浓度诱导作用下可见清晰的DNA ladder条带;rBPI作用于MO3h时,MO16SrRNA表达水平显著低于对照组(P0.05);20、40和80mg/L的rBPI与阳性对照组相比均能够显著抑制大肠杆菌的生长(P0.05);绵羊中性粒细胞受到MO感染后3h和4h时表达BPI mRNA的水平均显著高于对照组(P0.05)。  相似文献   
3.
成年盘羊血液生理生化指标的测定   总被引:3,自引:0,他引:3  
为了解和掌握盘羊的血液生理生化指标,利用动物全自动血细胞分析仪和半自动生化分析仪对6只盘羊的血液生理生化指标进行了测定,并与同等条件下饲养的家养绵羊的测定结果进行了比较。结果显示,盘羊的淋巴细胞比率、红细胞总数、血红蛋白、红细胞压积、红细胞平均体积、谷丙转氨酶、钙、钾、钠的含量显著高于家养绵羊,差异极显著(P0.01);淋巴细胞、红细胞分布宽度SD、血小板分布宽度、血糖高于家养绵羊,差异显著(P0.05);粒细胞、粒细胞比率、中间细胞、中间细胞比率、直接胆红素、氯的含量显著低于家养绵羊,差异极显著(P0.01);总胆红素的含量低于家养绵羊,差异显著(P0.05)。本试验的测定结果反映了盘羊的生理机能特性,初步建立了盘羊的血液生理生化指标的参考值,为今后加强盘羊的饲养管理、疾病诊断及杂交繁育研究提供了参考依据。  相似文献   
4.
试验采集新疆细毛羊皮肤组织,提取RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出KAP6.1基因,并通过DNA重组技术将该基因片段重组于pEGFP-C2真核表达载体上,构建pEGFP-C2-KAP6.1重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定。结果表明,本试验成功构建了新疆细毛羊的pEGFP-C2-KAP6.1真核表达重组质粒,为进一步研究该基因所编码的蛋白与毛品质的关系,以及培育超细羊毛等经济性生物学性状相互关系提供理论依据。  相似文献   
5.
瘦瘠症在《元亨疗马集》中记载,“凡牛瘦瘠皆由食啖水草不多也。”与西医的“营养不良”病症有相似之处。农村个体户饲养奶牛中,此症较多见。几年来,笔者试以参芪健中汤为主,治疗56例,治愈54例,疗效达96.4%,疗效显著,现介绍如下。1 临床症状 病牛长期慢草(饮食欲差),瘦弱,毛焦,表现为精神沉郁,两目无神,拉稀、便干交替出现,结膜苍白,脉搏沉细,重症病牛出现严重贫血症状。四季均可发生,以12月至次年5月多见。2 病因 奶牛外感风寒,内伤阴冷,饲养管理不当,冬季饲草饲料单一,饲喂失调,母牛产后短期内…  相似文献   
6.
通过12种单味中药及4种常用抗生素对引起奶牛子宫内膜炎的主要致病菌进行体外抑菌试验,得出黄连、黄芩、大黄的抑菌效果较好,乳酸环丙沙星对细菌的敏感性最高。根据单味中药的抑菌结果设计了3个不同组的复方药物进行抑菌试验,得出复方2的抑菌效果明显,此试验为新型中西医结合药物的组方提供科学的依据。  相似文献   
7.
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colonyst imulating fac- tor,GM-CSF)主要由T细胞和巨噬细胞产生,能够诱导粒细胞前体和巨噬细胞前体呈集落性生长(即形成集落).GM-CSF还具有种属特异性和造血,抗炎,增强中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能,增强巨噬细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用,对粒细胞和巨噬细胞有直接的趋化等作用.试验旨在应用RT-PCR技术扩增奶牛GM-CSF基因,为进一步了解奶牛的GM-CSF基因和获得重组蛋白打下基础.  相似文献   
8.
研究中国荷斯坦牛HSP70-1基因与奶牛耐热性之间的关系.根据NCBI登陆号为AY149618(19 526 bp)的HSP70-1基因序列设计9对引物分段扩增该基因全长,并用PCR-SSCP、PCR-RFLP和CRS-RFLP相结合的方法寻找中国荷斯坦牛HSP70-1基因编码区的多态位点,分析山东省3个现代化牛场产奶牛127头,并以直肠温度和红细胞钾离子浓度为荷斯坦牛的耐热指标,用SAS 软件最小二乘分析一般线性模型分析试验牛HSP70-1基因型与耐热指标的相关性.发现1 623 bp处发生G→A→C的复等位突变位点,2 409 bp处发生G→A的突变;χ2检验结果表明在试验牛群中两位点均未达到Hardy-Weinberg平衡;2409位点基因型与两个耐热指标相关性不显著(P>0.05),1623位点基因型与热应激时期中国荷斯坦牛的直肠温度相关性显著(P<0.05),GA基因型个体显著低于CC和GG基因型个体,GA基因型为耐热基因型.HSP70-1基因可用作中国荷斯坦牛选育耐热牛群的分子遗传标记.  相似文献   
9.
眠乃宁麻醉马鹿效果分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
眠乃宁是二甲苯胺噻嗪(Xylazine)和盐酸二氢埃托啡(DHE)经优选配比组成的复合麻醉剂,具有强烈的中枢镇静、镇痛和肌松作用,并配有特异的颉顽剂(苏醒灵3号、苏醒灵4号)。笔者于1997年2月,在玛纳斯县某鹿场,对76头天山马鹿、东北马鹿和杂交马...  相似文献   
10.
为了表达奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)并对其活性进行检测.根据GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列(U22385),设计一对特异性引物;采用RT-PCR方法,以LPS体外诱导的奶牛肺泡巨噬细胞为材料,从总RNA中扩增出奶牛GM-CSF cDNA基因,克隆到pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定,结果显示克隆的奶牛GM-CSF基因与GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和99.3%.构建pET32a-GM-CSF原核表达重组质粒,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示重组蛋白大小约为35 ku.分别运用集落形成试验与MTT比色法测定重组蛋白活性,结果显示重组奶牛GM-CSF蛋白能够诱导粒细胞前体呈集落性生长并具有较强的体外增殖淋巴细胞的活性,为下一步临床试验奠定了基础.  相似文献   
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