鸡促性腺激素释放激素对鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

用不同剂量鸡促性腺激素释放激素(cGnRH-Ⅰ和 cGnRH-Ⅱ)单独或与鸡 LH(cLH)协同处理短期(3h)培养的鸡卵泡颗粒细胞,以观察鸡 GnRH 对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明:随着卵泡的成熟,孕酮分泌量逐渐增加,到 F_1卵泡时增加最明显;在本实验所用剂量范围内,鸡 GnRH 对颗粒细胞孕酮分泌有促进作用,其中 GnRH-Ⅰ对 F_1至 F_4卵泡颗粒细胞孕酮分泌都有明显促进作用,GnRH-Ⅱ使 F_2至 F_4卵泡颗粒细胞孕酮分泌量有增加,而对F_3卵泡颗粒细胞作用最明显,用鸡 GnRH 预处理30min 能加强鸡 LH 对鸡卵泡的颗粒细胞孕酮分泌的促进作用,其中 GnRH-Ⅱ的促进作用更明显。     

IGF-I对体外培养山羊卵泡颗粒细胞增殖与分化的影响

为弄清ＩＧＦ－Ｉ在山羊卵泡不同发育阶段对颗粒细胞增殖与分化的影响,分类采集山羊小腔和大腔卵泡颗粒细胞进行体培养,对培养后颗粒细胞的ＤＮＡ含量和孕酮分泌量进行测定。结果表明,ＩＧＦ－Ｉ对来源于大,小卵颗粒细胞的增殖与分化都有促进作用。     

大豆黄酮和雌二醇体外灌流公猪垂体组织对GnRH诱导下LH分泌的影响

用不同浓度的大豆黄酮（Ｄａ,处理Ⅰ３９４ｎｍｏｌ／Ｌ,处理Ⅱ７８７４ｎｍｏｌ／Ｌ）和雌二醇（Ｅ２,处理Ⅲ１００ｐｍｏｌ／Ｌ,处理Ⅳ２００ｐｍｏｌ／Ｌ）体外灌流公猪垂体前叶组织,观察其对促黄体素（ＬＨ）分泌的影响。灌流２４和４８ｈ后,Ｄａ和Ｅ２灌流组与对照组（处理Ⅴ）相比,垂体ＬＨ体外分泌水平都无明显差异。但在促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）诱导下,各组ＬＨ分泌水平显著增加,诱导后２０～３０ｍｉｎ出现分泌峰。ＧｎＲＨ诱导后１ｈ,ＬＨ平均水平处理Ⅲ显著高于其他组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）;诱导后２ｈ,处理Ⅱ和Ⅲ显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）,处理Ⅲ亦高于处理Ⅰ（Ｐ＝０．０５）;诱导后３ｈ,各组ＬＨ分泌无显著差异。结果表明,Ｄａ和Ｅ２对公猪垂体体外ＬＨ分泌无抑制作用,但对ＧｎＲＨ诱导的ＬＨ分泌有一定促进作用。     

鸡卵泡颗粒细胞转染Bcl-2基因对IGF-1分泌的影响

选用正在产蛋的罗曼鸡,取体积排序第一（F1）和第四（F4）的卵泡,分离颗粒细胞层细胞。采用脂质体介导方法将来源于F1和F4卵泡的颗粒细胞用PBS（对照）、空载体或Bcl-2重组质粒处理,然后在不完全无血清培养基（不添加胰岛素）中培养48和96h,用流式细胞术检测Bcl-2蛋白表达,用放射免疫测定技术检测IGF-1的含量。结果发现,转染Bcl-2重组质粒组的Bcl-2蛋白表达量和IGF-1分泌量均多于其他各组。分析来源于不同卵泡期卵泡颗粒细胞的分泌功能,发现随时间的增加F1细胞IGF-1分泌量减少,而F4的IGF-1分泌量基本不变。结果表明,在鸡卵泡颗粒细胞中转染的Bcl-2基因具有表达功能,表达的蛋白具有调节鸡卵泡颗粒细胞分泌IGF-1的作用;鸡卵泡颗粒细胞IGF-1的分泌还受鸡卵泡的大小和颗粒细胞在体外培养时间的影响。     

大豆黄酮对体外灌流垂体前叶组织促黄体素分泌的影响

对德国格丁根微型猪垂体前叶组织进行体外灌流培养，研究大豆黄酮对垂体促黄体素（ＬＨ）分泌的影响。结果表明，灌流２４ｈ后，大豆黄酮灌流组（Ⅰ组１００ｎｇ／ｍｌ；Ⅱ组２μｇ／ｍｌ）和雌二醇灌流组（Ⅲ组１００ｐｍｏｌ／Ｌ；Ⅳ组２００ｐｍｏｌ／Ｌ）ＬＨ分泌水平低于对照组（Ⅴ组空白对照；Ⅵ组助溶剂对照），雌激素抑制效应明显较强。灌流４８ｈ，Ⅰ、Ⅱ组ＬＨ峰值和平均水平均显著高于对照组，Ⅲ、Ⅳ组则明显低于对照组。促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）刺激后１～２ｈ，Ⅰ、Ⅱ组ＬＨ平均水平、峰值和脉冲频率均明显高于刺激前，而且显著高于对照组；Ⅲ、Ⅳ组却明显低于对照组和Ⅰ、Ⅱ组。大豆黄酮、雌激素对垂体体外ＬＨ分泌没有明显的剂量差异。无ＧｎＲＨ刺激时，大豆黄酮对离体垂体ＬＨ分泌表现为抑制效应，但抑制强度较弱；长期以大豆黄酮灌流培养垂体，或加以ＧｎＲＨ刺激，大豆黄酮对ＬＨ分泌具促进作用。     

Kisspeptin-10对无血清培养鸡F1级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制研究

【目的】研究kisspeptin-10对无血清培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用及可能机制。【方法】选取200日龄处于产蛋高峰期的伊莎蛋鸡,于排卵前剖腹收集F1卵泡,分离纯化颗粒细胞,于含胎牛血清培养基中培养24 h,换成无血清培养基稳定培养24 h后,用不同浓度的Kp-10、U73122、EGTA等单独或共同处理细胞,收集细胞上清,放射免疫学方法检测培养基中孕酮含量。【结果】（1）通过免疫细胞化学方法,显示颗粒细胞上有Kp-10免疫活性样物质的阳性表达;（2）Kp-10处理可显著增加无血清培养的颗粒细胞的活力,100 nmol•L-1时可显著促进孕酮的分泌（P＜0.05）;（3）与对照组相比,2 μmol•L-1 U73122（磷脂酶C抑制剂）对孕酮的分泌无显著影响（P＞0.05）,而0.5、2 μmol•L-1 U73122能显著降低Kp-10对孕酮分泌的促进作用（P＜0.05）;（4）钙离子阻断剂Verapamil（1-100 μmol•L-1 ）呈剂量依赖性降低孕酮的分泌,于100 μmol•L-1时达显著降低水平（P＜0.05）;与1 μmol•L-1 Verapamil单独处理组相比,100 nmol•L-1 Kp-10与1 μmol•L-1 Verapamil同时处理可显著增加孕酮的分泌,而与10、100 μmol•L-1 Verapamil共同处理不能逆转其对孕酮分泌的抑制作用（P＞0.05）,且胞内钙离子含量与上清液中孕酮分泌水平相一致;（5）与100 nmol•L-1 Kp-10处理组相比,1和5 mmol•L-1 EGTA共同处理时孕酮分泌显著降低,当再加入1.5 mmol•L-1 Ca2+时孕酮分泌量显著增加。【结论】Kp-10促进体外培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌,其机制可能与胞内Ca2+信号通路有关。     

鸡促性腺激素释放激素对卵泡膜分泌雌二醇的影响

本实验选用性成熟的京白种蛋鸡,从同一产蛋顺序中取其发育不同阶段的各级卵泡(F_1～F_4),分离膜层,消化为单个的膜细胞,进行短期细胞培养,着重观察鸡促性腺激素释放激素(GnRH)对培养过程中膜细胞雌二醇分泌的影响.用放射免疫法测定细胞培养液中雌二醇的含量,得到以下结果:①未加外源激素处理的对照组细胞,随着卵泡从小到大的发育成熟过程,膜细胞雌二醇的分泌量逐渐降低;②适当剂量的鸡 GnRH-Ⅱ对各级卵泡膜细胞雌二醇的分泌均有促进作用,其中 F_4,F_3,F_2比 F_1更敏感;③加前体物(孕酮或雄烯二酮)之后,再加鸡 GnRH-Ⅱ比单加前体物或单加鸡 GnRH-Ⅱ,膜细胞雌二醇的分泌量增加更明显.实验结果提示,在体外细胞培养的条件下,GnRH-Ⅱ对膜细胞雌二醇的分泌不仅有促进作用,还可能促进雌二醇的合成。     

鸡卵泡颗粒细胞转染Bcl-2基因对IGF-1分泌的影响

选用正在产蛋的罗曼鸡,取体积排序第一(F1)和第四(F4)的卵泡,分离颗粒细胞层细胞.采用脂质体介导方法将来源于F1和F4卵泡的颗粒细胞用PBS(对照)、空载体或Bcl-2重组质粒处理,然后在不完全无血清培养基(不添加胰岛素)中培养48和96 h,用流式细胞术检测Bcl-2蛋白表达,用放射免疫测定技术检测IGF-1的含量.结果发现,转染Bcl-2重组质粒组的Bcl-2蛋白表达量和IGF-1分泌量均多于其他各组.分析来源于不同卵泡期卵泡颗粒细胞的分泌功能,发现随时间的增加F1细胞IGF-1分泌量减少,而F4的IGF-1分泌量基本不变.结果表明,在鸡卵泡颗粒细胞中转染的Bcl-2基因具有表达功能,表达的蛋白具有调节鸡卵泡颗粒细胞分泌IGF-1的作用;鸡卵泡颗粒细胞IGF-1的分泌还受鸡卵泡的大小和颗粒细胞在体外培养时间的影响.     

Epostane对小鼠颗粒细胞孕酮,睾酮合成的影响

将不同剂量的Ｅｐｏｓｔａｎｅ（１００μｇ、５０μｇ、２５μｇ）与单层培养的颗粒细胞作用１．５小时，尔后用ＰＧＦ２α刺激超数排卵处理的幼龄小鼠颗粒细胞、ＬＨ刺激成熟小鼠颗粒细胞的激素合成。结果表明，Ｅｐｏｓｔａｎｅ能抑制颗粒细胞内３β－羟类固醇脱氢酶（３β－ＨＳＤ）活性，但超数排卵处理的小鼠颗粒细胞与成熟小鼠颗粒细胞３β－ＨＳＤ的反应结果有所不同。     

大豆黄酮和雌二醇体外灌流公猪垂体组织对GnRH诱导下LH分泌的 …

用不同浓度的大豆黄酮（Ｄａ,处理１３９４ｎｍｏｌ／Ｌ,处理Ⅱ７８７４ｎｍｏｌ／Ｌ）和雌二醇（Ｅ２,处理Ⅲ１００ｐｍｏｌ／Ｌ,处理Ⅳ２００ｐｍｏｌ／Ｌ）体外灌流公猪垂体前叶组织,观察其对促黄体素（ＬＨ）分泌的影响。灌流２４和４８ｈ后,Ｄａ和Ｅ２灌流组与对照组（处理Ⅴ）相比,垂体ＬＨ体外分泌水平都无明显差异。但在促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）诱导下,各组ＬＨ分泌水平显著增加,诱导后２０￣３０ｍｉｎ出现     

Kisspeptin对牛卵颗粒细胞孕酮分泌的影响

为明确Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ 对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的作用，采用荧光定量ＰＣＲ 和ＥＬＩＳＡ 方法研究了Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ 对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明：Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ 对牛卵巢颗粒细胞的孕酮分泌有促进作用，且在一定范围内呈剂量依赖性。１００ ｎｍｏｌ／ Ｌ Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ?１０（Ｋｐ?１０）处理颗粒细胞２４ ｈ 后，显著增加了孕酮的分泌（Ｐ＜０?? ０５），而１０ ｎｍｏｌ／ Ｌ 和１ ０００ ｎｍｏｌ／ Ｌ Ｋｐ?１０ 处理组对孕酮的分泌无显著影响（ Ｐ＞０?? ０５）。１００ｎｍｏｌ／ Ｌ Ｋｐ?１０ 可显著提高孕酮合成的关键基因３β?ＨＳＤ 和ＳｔＡＲ 的ｍＲＮＡ 表达水平（Ｐ＜０?? ０１）。研究结果提示，Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ 可促进牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌，推测这一作用可能通过上调孕酮合成关键基因表达来实现。     

cGnRH对鸡卵泡膜细胞增殖的作用

建立鸡卵泡膜细胞体外无血清贴壁培养模型，研究了鸡促性腺激素释放激素（cGnRH－Ⅱ）对鸡卵泡膜细胞增殖的作用。细胞在培养箱内预培养约24h后进行各项处理，继续培养72h后，分别用胰蛋白酶消化成单个细胞，然后计数。结果表明：cGbnRH－Ⅱ能促进膜细胞增殖，作用效果具有剂量依赖关系；该促进作用能被GnRH拮抗剂（G－Ant）所阻断。这提示cGnRH－Ⅱ对膜细胞增殖的刺激作用有可能通过与膜细胞上特异的GnRH受体结合而起作用的。     

IGF-I对山羊睾丸间质细胞分泌cAMP和睾酮的影响

本实验利用山羊睾丸间质细胞体外培养的方法，研究ＩＧＦ－Ｉ对ｃＡＭＰ和睾酮的影响。结果表明：（１）ＩＧＦ－Ｉ可使间质细胞外ｃＡＭＰ积聚能力显著增强（ Ｐ＜０． ０５～ Ｐ ＜０． ００５）。（２）ＩＧＦ－Ｉ可使间质细胞分泌睾酮的能力显著增加（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。（３）ＩＧＦ－Ｉ可刺激山羊间质细胞经 ｈＣＧ诱导睾酮分泌显著增多（ Ｐ＜０． ０５～ Ｐ＜０． ０１）。以上结果与催乳素和白细胞介素－１α这些含氮激素（因子）调节睾酮分泌的机理不同。     

IGF—I对山羊睾丸间质细胞分泌cAMP和睾酮的影响

利用山羊睾丸间质细胞体外培养的方法，研究了ＩＧＦ－Ｉ对ｃＡＭＰ和睾酮的影响。结果表明；１．ＩＧＦ－Ｉ可使间质细胞外ｃＡＭＰ积聚能力的显著增加．２．ＩＧＦ－Ｉ可使间质细胞分泌睾酮的能力显著增加。３．ＩＧＦ－Ｉ可刺激山羊间质细胞经ｈＣＧ诱导睾酮分的显著增多。     

人抑制素α亚基主动免疫对鸡卵泡发育和性腺激素及产蛋率的影响

用人工合成人抑制素α亚基（１－２６Ｇｌｙ．Ｔｙｒ）片段与ＫＬＨ连接作完全抗原免疫产蛋三黄母鸡,用放免法测定排卵周期外周血中雌二醇和孕酮的水平,观察产蛋率的变化。宰杀后卵巢称重,各期卵泡分类计数。结果免疫组产蛋率、大白泡、小白泡和小黄泡数比对照组高（Ｐ〈０．０５）,蛋重、卵巢上直径大于１０ｍｍ的卵泡数两组间无显著差异。经放免法测定,免疫组外周血雌二醇基础水平比对照组高,但孕酮没有显著性差异。     

斑点免疫金检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

通过胶体金标记提纯后的兔抗ＩＢＶＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物，检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的斑点免疫金测定法（ＤＩＧＦＡ）。ＤＩＧＦＡ对ＩＢＶ的最小检出量为２０．３×１０￣（－８）ｇ，在１０份自然病例样品中检出８份。鸡胚培养法以育传３～５代，出现侏儒胚者为阳性，从上述样品中检出６份。对接种ＩＢＶ的鸡胚尿囊液，ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法对鸡传染性支气管炎的早期诊断具有简便、灵敏、快速、特异性强和重复性好等优点。     

钴对泰和母鸡生殖内分泌活动的影响

将８０只泰和母鸡随机分成４组，每组２０只，分别喂给含钴０．２６ｍｇ／ｋｇ，５．２６ｍｇ／ｋｇ，５０．２６ｍｇ／ｋｇ，１００．２６ｍｇ／ｋｇ的日粮４个月。试验期间用放射免疫法监测鸡血浆中促黄体生成素（ＬＨ）、雌二醇（Ｅ２）和孕酮（Ｐ）含量的变化情况。观察钴对Ｅ２，Ｐ分泌的直接影响。结果表明：日粮钴能引起血浆ＬＨ和Ｐ值升高，但随着钴在机体内的蓄积，高钴组Ｐ值显下降；日粮然对Ｅ２的影响较小。     

家鸡促黄体素放射免疫测定法的建立

建立了测定鸡血浆样品ＬＨ的放射免疫测定方法。所用ＬＨ参照标准为ＵＳＤＡ－ｃＬＨ－Ｋ－３，碘化标记ＬＨ为ＵＳＤＡ－ｃＬＨ－Ｉ－３，第一抗体为兔抗鸡ＬＨ（ＵＳＤＡ－ＡｃＬＨ－５），第二抗体为驴抗兔血清。碘化采用了改进氯胺Ｔ方法，减少了氯胺Ｔ的用量，并省略了偏重亚硫酸钠的使用，碘化标记的ＬＨ比放射性为５５μＣｉ／μｇ。测定的灵敏度为００２５ｎｇ／ｍＬ，变异低于１５％。母鸡血浆样品倍比稀释产生的结合抑制曲线与标准曲线平行；测定不同繁殖期母鸡血浆样品ＬＨ显示出显著差异且变化规律符合繁殖活动的变化。以上结果证明本方法可以用于测定家鸡血浆ＬＨ浓度。     

IGF-Ⅰ对山羊睾丸间质细胞分泌cAMP和睾酮的影响

利用山羊睾丸间质细胞体外培养的方法,研究ＩＧＦ－Ⅰ对ｃＡＭＰ和睾酮的影响。结果表明：①ＩＧＦ－Ⅰ可使间质细胞外ｃＡＭＰ积聚能力的显著增强（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．００５）。②ＩＧＦ－Ⅰ可使间质细胞分泌睾酮的能力显著增加（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。③ＩＧＦ－Ⅰ可刺激山羊间质细胞经ｈＣＧ诱导睾酮分泌的显著增多（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。以上结果与催乳素和白细胞介素－ｌα这些含氮激素（因子）调节睾酮分泌的机理不同。     

人抑制素合成肽与猪精液抑制素提取物主动免疫对母羊生殖激素 …

研究了抑制素主动免疫对母羊促卵泡素（ＦＳＨ）,促黄体素（ＬＨ）,孕酮（Ｐ）,雌二醇（Ｅ２）以及妊娠,产羔的影响。１５只发情季节考力代母羊平均分成３组;人抑制α亚基（１－２６）Ｔｙｒ．Ｇｌｙ合成肽免疫组（Ｈ组）,猪精液抑制素免疫组（Ｓ组）和对照组（Ｃ组）。Ｈ组在初次免疫后即产生了抑制素抗体,第２次加强免疫后抗体滴度最高可达１．：６２０００。Ｓ组和Ｃ组均未产生可与人抑制素合成肽结合的抗体。