Kisspeptin-10对无血清培养鸡F1级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制研究

【目的】研究kisspeptin-10对无血清培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用及可能机制。【方法】选取200日龄处于产蛋高峰期的伊莎蛋鸡,于排卵前剖腹收集F1卵泡,分离纯化颗粒细胞,于含胎牛血清培养基中培养24 h,换成无血清培养基稳定培养24 h后,用不同浓度的Kp-10、U73122、EGTA等单独或共同处理细胞,收集细胞上清,放射免疫学方法检测培养基中孕酮含量。【结果】（1）通过免疫细胞化学方法,显示颗粒细胞上有Kp-10免疫活性样物质的阳性表达;（2）Kp-10处理可显著增加无血清培养的颗粒细胞的活力,100 nmol•L-1时可显著促进孕酮的分泌（P＜0.05）;（3）与对照组相比,2 μmol•L-1 U73122（磷脂酶C抑制剂）对孕酮的分泌无显著影响（P＞0.05）,而0.5、2 μmol•L-1 U73122能显著降低Kp-10对孕酮分泌的促进作用（P＜0.05）;（4）钙离子阻断剂Verapamil（1-100 μmol•L-1 ）呈剂量依赖性降低孕酮的分泌,于100 μmol•L-1时达显著降低水平（P＜0.05）;与1 μmol•L-1 Verapamil单独处理组相比,100 nmol•L-1 Kp-10与1 μmol•L-1 Verapamil同时处理可显著增加孕酮的分泌,而与10、100 μmol•L-1 Verapamil共同处理不能逆转其对孕酮分泌的抑制作用（P＞0.05）,且胞内钙离子含量与上清液中孕酮分泌水平相一致;（5）与100 nmol•L-1 Kp-10处理组相比,1和5 mmol•L-1 EGTA共同处理时孕酮分泌显著降低,当再加入1.5 mmol•L-1 Ca2+时孕酮分泌量显著增加。【结论】Kp-10促进体外培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌,其机制可能与胞内Ca2+信号通路有关。     

雪山草鸡血管紧张素转换酶2(ACE2)基因克隆、结构特性分析及其表达特征研究

旨在克隆血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme 2,ACE2）基因,分析其结构特性和表达特征。本试验以45和90日龄的健康雪山草鸡为研究对象,利用PCR技术扩增ACE2基因的编码区序列;运用生物信息学方法对其结构特征进行分析;通过TA克隆构建黄羽肉鸡ACE2编码区序列质粒标准品,使用绝对定量方法测定ACE2基因在45和90日龄雪山草鸡公母鸡各组织中的表达特性。结果,克隆得到2 427 bp的编码区序列,共编码808个氨基酸,与白羽肉鸡一致,但是在黄羽肉鸡序列中存在大量突变位点造成编码氨基酸发生变化。同源性比较发现,其与红色原鸡的同源性为99%,其次为绿头鸭88%,与其它动物的同源性为73%~76%。生物信息学分析发现,ACE2属于I型跨膜蛋白,即分泌型蛋白,信号肽位于1~17 aa,含有46个蛋白质磷酸化位点。定量结果发现,小肠中ACE2表达量显著高于其它组织。法氏囊、气管、胆囊和脾中ACE2表达量较低,脾中表达量最低。母鸡空肠、盲肠、脾和肺中ACE2基因表达量显著高于公鸡。公鸡肾和心中ACE2基因表达量显著高于母鸡。90日龄雪山草鸡的十二指肠、空肠、肺、脾和回肠组织ACE2基因表达量均显著低于45日龄雪山草鸡,在法氏囊和肾组织中结果呈相反趋势。通过克隆获得了雪山草鸡ACE2基因编码区序列,生物信息学分析发现,雪山草鸡ACE2基因在家禽中较为保守;ACE2基因表达规律呈现出在雪山草鸡肠道组织中高于其他组织,母鸡中高于公鸡,随着时间表达水平呈下降趋势。研究结果为开展ACE2基因在黄羽肉鸡肠道中的功能研究奠定了理论基础。     

染料木素对产蛋后期蛋鸡生产性能和脂质代谢的影响

试验旨在探讨饲粮中添加染料木素（GEN）对产蛋后期蛋鸡生产性能和脂质代谢的影响。采取单因素试验设计,选取288只体重相近且健康的66周龄海兰褐蛋鸡,按生产性能无显著差异的原则分为3个组,每个组6个重复,每个重复16只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮的基础上添加80、400 mg/kg GEN。试验预试期2周,正试期8周。结果表明：与对照组相比,80、400 mg/kg GEN提高了蛋鸡产蛋率（P<0.05、P<0.01）;与对照组相比,饲粮中添加GEN对平均蛋重无影响（P>0.05）;与对照组相比,80mg/kg组腹脂率下降（P<0.05）,80、400 mg/kg组血浆高密度脂蛋白升高（P<0.05）;与对照组相比,80、400 mg/kg GEN可降低肝脏甘油三酯含量及蛋黄中甘油三酯和总胆固醇含量（P<0.01）;与对照组相比,饲粮中添加80、400 mg/kg GEN可降低肝脏ACC、LXR、SREBF1和PPARγ的mRNA水平（P<0.01）,提高肝脏PPARα的mRNA水平（P<0.01）。由此可见,饲粮中添加GEN可...     

大豆黄酮对产蛋后期地方蛋鸡生产性能、蛋品质和血浆激素指标的影响

本试验旨在研究饲粮中添加大豆黄酮对产蛋后期地方蛋鸡生产性能、蛋品质和血浆激素指标的影响。试验选用体重及产蛋率相近的55周龄如皋黄鸡蛋鸡192只,随机分为2组,每组6个重复,每个重复16只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中添加60 mg/kg大豆黄酮的试验饲粮。预试期2周,正试期14周。结果表明:1)试验组产蛋率显著高于对照组(P0.05),试验组死亡率、平均蛋重、平均日采食量和料蛋比与对照组相比较差异不显著(P0.05)。2)试验组鸡蛋哈氏单位显著高于对照组(P0.05),试验组其他蛋品质指标与对照组相比较差异不显著(P0.05)。3)试验组血浆雌二醇(E2)含量显著高于对照组(P0.05),试验组血浆卵泡刺激素(FSH)含量显著低于对照组(P0.05),试验组其他血浆激素指标与对照组相比较差异不显著(P0.05)。综上所述,饲粮添加60 mg/kg大豆黄酮能改善产蛋后期地方蛋鸡生产性能、蛋品质以及血浆激素指标。     

纳米氧化铁抑制鸡巨噬细胞沙门氏菌感染的作用研究

为研究纳米氧化铁对鸡巨噬细胞沙门氏菌感染的抑制作用，试验选择鸡巨噬细胞（HD11）进行沙门氏菌攻毒，并加入纳米氧化铁处理，对细胞形态、活力、抑菌率、活性氧水平及自噬蛋白表达等指标进行检测。结果显示：与对照组相比，在20～200μg/mL浓度梯度内，纳米氧化铁对HD11细胞活力无显著影响（P>0.05），但对HD11细胞内的沙门氏菌均有显著抑制作用（P<0.05），抑菌率为28.7%～66.2%；沙门氏菌和纳米氧化铁在单独和共同处理的情况下，均显著提高HD11细胞的活性氧水平（P<0.05）；沙门氏菌和纳米氧化铁共同处理，显著提高细胞自噬蛋白的表达（P<0.05）。研究表明，纳米氧化铁抑制HD11细胞内沙门氏菌的感染，从而为沙门氏菌减抗防治研制提供新思路。