Kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞的表达及功能研究

为明确kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞的表达和功能,本试验首先利用免疫荧光技术研究了kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞的表达,随后利用MTT和ELISA技术研究了不同浓度的kisspeptin-10(Kp10)对牛卵巢颗粒细胞增殖和孕酮分泌的影响。结果表明,kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞有表达,10、100、1 000nmol/L的Kp10处理24h,均可以极显著提高牛卵巢颗粒细胞活力(P0.01);100nmol/L的Kp10处理24、72h,可极显著提高牛卵巢颗粒细胞的活力(P0.01),但处理48h未能显著提高细胞活力(P0.05)。100nmol/L的Kp10处理24h,可显著提高牛卵巢颗粒细胞孕酮的分泌水平(P0.05),而10、1 000nmol/L的Kp10对孕酮分泌无显著影响(P0.05)。研究结果提示kisspeptin可促进牛卵巢颗粒细胞增殖和孕酮分泌。     

锌指蛋白15在猪前体脂肪细胞分化中的作用

首先分离猪前体脂肪细胞进行体外培养和诱导分化,通过荧光定量PCR明确KLF15基因在猪前体脂肪细胞分化过程中mRNA的表达规律。随后利用脂质体2000将KLF15-siRNA转染至前体脂肪细胞并诱导分化,待前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞后分别利用荧光定量PCR、油红O染色等方法明确脂肪细胞分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2的表达变化及脂肪细胞甘油三酯沉积能力。结果表明:KLF15基因mRNA表达量在猪脂肪细胞分化过程中随时间而变化,呈现出先上升后下降的趋势,在分化24 h时mRNA表达量最高。与对照组相比,KLF15基因表达被抑制后,PPARγ、C/EBPα、AP2表达量显著降低,甘油三酯含量显著降低,脂滴明显减少、变小。研究结果提示,KLF15参与了调控前体脂肪细胞分化的过程,可影响脂肪细胞中甘油三酯的合成及脂质的沉积。     

褪黑素对雏鸡睾丸支持细胞体外增殖的影响

为研究褪黑素对雏鸡睾丸支持细胞增殖的影响,本实验以原代分离培养并鉴定的雏鸡睾丸支持细胞为研究对象,经不同浓度(1、10、100、1000 nmol/L)褪黑素处理细胞48 h后,使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、EdU和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测雏鸡睾丸支持细胞的细胞活力、细胞增殖能力和增殖相关基因的表达。结果表明:与对照组相比,添加1000 nmol/L褪黑素可提高细胞活力和细胞增殖能力(P<0.05),上调PCNA、Cyclin B和Cyclin D基因的表达(P<0.05),下调P21基因的表达(P<0.05)。结果显示褪黑素可以促进支持细胞增殖。     

Kisspeptin对牛卵颗粒细胞孕酮分泌的影响

为明确Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ 对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的作用，采用荧光定量ＰＣＲ 和ＥＬＩＳＡ 方法研究了Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ 对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明：Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ 对牛卵巢颗粒细胞的孕酮分泌有促进作用，且在一定范围内呈剂量依赖性。１００ ｎｍｏｌ／ Ｌ Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ?１０（Ｋｐ?１０）处理颗粒细胞２４ ｈ 后，显著增加了孕酮的分泌（Ｐ＜０?? ０５），而１０ ｎｍｏｌ／ Ｌ 和１ ０００ ｎｍｏｌ／ Ｌ Ｋｐ?１０ 处理组对孕酮的分泌无显著影响（ Ｐ＞０?? ０５）。１００ｎｍｏｌ／ Ｌ Ｋｐ?１０ 可显著提高孕酮合成的关键基因３β?ＨＳＤ 和ＳｔＡＲ 的ｍＲＮＡ 表达水平（Ｐ＜０?? ０１）。研究结果提示，Ｋｉｓｓｐｅｐｔｉｎ 可促进牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌，推测这一作用可能通过上调孕酮合成关键基因表达来实现。     

坏死性凋亡对卵巢生殖细胞影响的研究进展

坏死性凋亡作为一种程序性死亡方式,参与卵泡发育、黄体分解等生殖过程,但其在哺乳动物卵巢生殖细胞上的具体机制尚未阐明。本文综述了坏死性凋亡具体分子机制、鉴定手段及其对哺乳动物卵巢生殖细胞发育影响的研究进展,以期为坏死性凋亡在哺乳动物卵巢生殖细胞上的深入研究提供理论参考。     

致病性大肠杆菌诱导的小鼠子宫内膜炎模型建立

为探究致病性大肠杆菌(EPEC)诱导的子宫内膜炎的损伤机制,将24只8~10周龄、体重30~35 g的雌性小鼠随机分为4组,每组6只,3个炎症模型组分别使用留置针向小鼠子宫内灌注1×10⁶、1×10⁸、1×10¹⁰CFU/mL的大肠杆菌25μL,对照组向小鼠子宫内灌注等体积的生理盐水。24 h后进行剖检,通过观察组织病理学变化、ELISA检测细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及炎症通路核因子κB(NF-κB)的水平。结果表明:1×10¹⁰CFU/mL大肠杆菌可使子宫内膜层与肌层无明显界限,中性粒细胞浸润情况增加(P<0.05),促进IL-6、IL-1β和TNF-α的表达(P<0.001),促进炎症通路NF-κB的激活(P<0.05)。综上,使用1×10¹⁰CFU/mL大肠杆菌灌注小鼠子宫24 h可成功建立子宫内膜炎模型,为进一步探究由大肠杆菌诱导的子宫内膜炎的损伤机制提供理论依据。     

Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响

为明确Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的作用,采用荧光定量PCR和ELISA方法研究了Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明:Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞的孕酮分泌有促进作用,且在一定范围内呈剂量依赖性。100 nmol/L Kisspeptin-10(Kp-10)处理颗粒细胞24 h后,显著增加了孕酮的分泌(P0.05),而10 nmol/L和1 000 nmol/L Kp-10处理组对孕酮的分泌无显著影响(P0.05)。100 nmol/L Kp-10可显著提高孕酮合成的关键基因3β-HSD和St AR的mRNA表达水平(P0.01)。研究结果提示,Kisspeptin可促进牛卵巢颗粒细胞孕酮的分泌,推测这一作用可能通过上调孕酮合成关键基因表达来实现。     

纤溶酶原激活物抑制剂-1在疾病诊断中的研究进展及在动物疾病诊断的应用前景

纤溶酶原激活物抑制剂-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)是尿激酶型纤溶酶原激活物(U-rokinase-type plasminogen activator,uPA)和组织型纤溶酶原激活物(Tissue-type plasminogen activator,tPA)的内源性抑制剂,是纤溶系统的重要组成部分,与人类健康密切相关.随着对PAI-1及其与疾病关系的深入研究,发现PAI-1可作为多种疾病的诊断指标.大量证据表明,其在动静脉血栓、出血异常、细胞侵袭、纤维化等方面起重要作用.文章对PAI-1的结构功能、转录调控及其在冠心病、脑梗塞、非酒精性脂肪肝病、肿瘤、白血病、肝纤维化及糖尿病诊断中的研究进展进行综述,为动物疾病的诊断及治疗提供新思路.     

酵母双杂交技术及应用的研究进展

酵母双杂交技术是研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种非常有效的分子生物学方法,它是一种能直接检测胞内蛋白质相互作用较为简便、快捷、高效、敏感、广泛的方法。作者将主要介绍酵母双杂交技术的基本原理、应用及优缺点,现就酵母双杂交技术及其应用的研究进展作一综述。