不同冷冻保护液和解冻温度对猪精液冷冻效果的影响

在BF5稀释液中分别添加不同水平的牛血清白蛋白(BSA)(0.5,1,1.5 g/L)、二甲基乙酰胺(DMA)(0.5%,1%,1.5%)、甲基-β-环糊精载胆固醇(CLC)(1,2.5,5 g/L),对成年健康猪精液进行冷冻保存,于不同温度(37,50,70℃)解冻后分别检测冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性、项体完整率、线粒体活性.结果显示,0.5 g/L BSA组冷冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性均高于其他组,但差异不显著(P0.05).1% DMA组冷冻后精子活率和活力显著优于1.5%DMA组(P＜0.05),同时也高于对照组(3%甘油)冻后精子活率和活力,但差异不显著.不同质量浓度CLC组冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性和线粒体活性与对照组相比差异不显著.50℃和70℃解冻组精子的活率和线粒体活性显著高于37℃解冻组的精子;50℃解冻组精子的活力和质膜完整率显著高于其他2组.因此,在猪精液冷冻稀释液中,用DMA可以代替甘油作为渗透性保护剂,且以1%DMA,50℃解冻最佳.     

新西兰兔精液冷冻保护剂的筛选

本试验的目的是分析在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中分别添加不同浓度的海藻糖、透明质酸、维生素E(Ve)、超氧化物歧化酶(SOD)对兔精液冷冻保存效果的影响,以冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率等作为质量评定指标,筛选出效果较好的新西兰兔精液的冷冻保护剂种类及浓度。结果表明,精液冷冻保存稀释液中添加3种浓度的海藻糖均未提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加0.5%和1%的透明质酸提高了兔精液冷冻后的精子活率(P0.05),但各组间质膜完整率和顶体完整率无显著差异;添加2 g/L Ve提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加4 000 IU的SOD提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05)。结果证实,在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中添加适宜浓度的Ve和SOD可提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率。     

L-肉碱对猪精液冷冻保存效果的研究

本试验用5%二甲基甲酰胺(DMF)替代甘油作为冷冻保护剂,研究不同浓度(0、0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL)L-肉碱对猪精液冻后常规指标(精子活率、线粒体活性、顶体完整性、质膜完整性)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化酶(T-AOC)活性以及丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明:添加0.04和0.06 mg/mL的L-肉碱可有效改善猪精液冷冻后效果。0.04 mg/mL组可显著提高精子冻后活率和线粒体活性(P<0.05);0.06 mg/mL组可显著提高顶体完整性和质膜完整性(P<0.05)。添加0.06 mg/mL L-肉碱可显著提高冷冻后精子内T-AOC酶活性并且抑制MDA的产生(P<0.05),但CAT活性与0.04 mg/mL组差异不显著。在冷冻稀释液中添加0.06 mg/mL L-肉碱可以提高猪精液冷冻保存效果。     

海藻糖、二甲乙酰胺对公猪精液冷冻保存效果的研究

采用5% 二甲乙酰胺(DMA)(V/V)完全替代甘油,比较乳糖、海藻糖对精液冷冻保存效果的影响。结果表明,海藻糖显著提高了冷冻——解冻后精子成活力(49.32%±1.52%)与顶体完整性 (47.33%±1.16%)(P<0.05)。然后利用海藻糖替代乳糖,评价不同浓度的DMA对公猪精液冷冻保存的影响。结果表明,当DMA添加量为4%时,解冻后精子活率、成活力、顶体完整率分别为(45.17±0.56)%、(50.33±0.67)%、(48.30±1.44)%,均显著高于3% DMA、6% DMA添加组(P<0.05),精子活率显著高于5% DMA添加组(P<0.05),但精子成活力、顶体完整性与其差异不显著(P>0.05)。因此,当利用海藻糖作为冷冻保存基础稀释液,DMA最适添加量为4%。     

红景天多糖对藏猪精液冻后品质及精子基因组DNA甲基化的影响

在藏猪精液的冷冻液中添加不同质量浓度的红景天多糖(0,2,4,6,8,10mg/L),制成高密度细管冻精,以冷冻解冻后精子活率、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为精液品质的评价指标,筛选最适红景天多糖添加质量浓度;用甲基化荧光定量法检测3组(鲜精组、未添加组、最适添加组)精子基因组DNA甲基化的水平。结果显示:添加红景天多糖质量浓度为6mg/L组的精子活率显著高于其他组(P<0.05),该组精子畸形率、精子顶体完整率、精子质膜完整率也显著好于未添加组(P<0.05);这3组精子基因组的DNA甲基化水平(0.610 5±0.080 0,0.945 7±0.043 7,0.680 2±0.051 0)中,最适添加组虽显著高于鲜精组(P<0.05),但却显著低于未添加组(P<0.05)。结果表明:在藏猪精液冷冻液中添加质量浓度6mg/L的红景天多糖不仅可以明显改善藏猪精液冻后品质,而且可以明显减少冷冻对藏猪精子基因组DNA甲基化水平的影响,这将为提高藏猪精液冷冻保存效果的进一步研究提供参考。     

在4℃降温平衡过程中0.2g/L咖啡因与精子共孵育时间对猪颗粒冻精质量的影响

实验旨在探讨在猪精液于4℃平衡2 h过程中0.2 g/L咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h,对颗粒冻精解冻后精子活率、活力、质膜完整性和顶体完整性以及解冻后精子体外存活时间等指标的影响,以期进一步提高猪颗粒冻精质量。实验结果表明,在精液冷冻之前,咖啡因不同平衡时间组的精子活率和活力都呈现出升高趋势,但与对照组差异不显著;咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组的精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组,前3组之间差异均不显著。而颗粒冻精解冻后,咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组精子活率和活力均显著高于对照组,其中共孵育1 h组显著高于其他3组(P0.05),共孵育2 h组和0.5 h组间差异不显著(P0.05);共孵育2 h组精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组和共孵育0.5 h、1 h组(P0.05),但后3组之间差异不显著;共孵育2 h组精子存活时间显著低于对照组、共孵育1 h和0.5 h组(P0.05),其中共孵育1 h组精子存活时间最长,达7 d以上。总之,在精液4℃降温平衡过程中咖啡因与精液共孵育1 h对冷冻后精子质量最有利,解冻后精子活率和活力显著高于其他各组,且解冻后精子体外存活时间最长。     

五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。     

改进的昆明犬精液冷冻保存方法

为了对现有的犬精液冷冻方法进行改进,进一步提高精子冷冻保存效率,试验采用4种降温时间(30,60,90,120 min)和2种添加甘油方法(一步加或五步加),以冷冻复苏精子的运动度、复苏率、质膜完整率和顶体完整率为指标,比较不同降温时间和不同添加甘油方法对昆明犬精液超低温冷冻保存的效果。结果表明:在相同降温条件下,五步加甘油进行冷冻的精子,复苏后精子运动度、复苏率和质膜完整率均高于一步加甘油组,顶体完整率高于一步加甘油组或与其相当;降温处理60 min,五步加甘油后进行冷冻的精子,其运动度、质膜完整率显著高于其他组(P0.05),而复苏率比其他组高,但差异不显著(P0.05)。     

不同浓度的甘油和DMSO对蒙古羊精子活力的影响

研究由两个实验组成:实验一探讨添加不同浓度的甘油(1%、3%、5%、7%,V/V)对冷冻精子活率的影响,实验二探讨在37℃或5℃下添加不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)(1%、1.25%、1.5%、1.75%,V/V)对冷冻精子活率的影响.通过实验组获得蒙古羊的最优的甘油浓度稀释液条件下,测定精子解冻后的活力、直线运动率、成活率及顶体完整率.同样用DMSO代替甘油测定精子活率、直线动动率、成活率和顶体完整率,实验结果显示前一项指标得到显著的改善(P＜0.05),且在37℃添加7%甘油效果最好.但是顶体完整率随着甘油或DMSO浓度的增加而出现下降趋势,也就是顶体完整率在5℃下添加1%的甘油或1.75%的DMSO效果较好(P＜0.05).实验中在37℃中增加DMSO顶体完整率显著下降(P＜0.05),此外,在5℃时添加1%DMSO时精子顶体完整率优于其他实验组.实验中在37℃条件下加入1.75%的DMSO比在5℃下精子活力好,在37℃添加7%的甘油比在5℃下添加7%的甘油效果显著(P＜0.05).研究结果表明,对于蒙古羊甘油仍是较好的精子冷冻保护剂.     

大豆卵磷脂与卵黄在山羊精液冷冻过程中的联合作用研究

试验旨在探究在山羊精液冷冻保存过程中单独使用大豆卵磷脂(SL)、卵黄(EY)及其联合使用的效果。以20%EY(V/V)和2%SL(m/V)为对照,在山羊冻精基础稀释液中分别添加10%EY+2%SL、20%EY+1%SL、20%EY+2%SL,冷冻解冻后分别对精子活率、精子活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性进行检测,同时利用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量变化。结果表明:当冷冻稀释液中联合添加10%EY+2%SL,解冻后该组的精子活力、精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性与20%EY和2%SL对照组无显著性差异,较20%EY+1%SL和20%EY+2%SL联合添加组显著提高;与20%EY和2%SL组相比,联合添加10%EY+2%SL组精子解冻后ROS和MDA含量和SOD活性无显著性差异,但精子抗氧化能力较另外2个联合添加组显著提高。综上,山羊精液冷冻基础稀释液中添加SL可替代或者部分替代EY,EY和SL的联合添加对山羊冻精无协同作用,20%EY联合添加不同浓度的SL则会加大对冷冻精子的氧化损伤。     

冷冻速率和解冻温度对猪精液冷冻效果的影响

为优化冷冻和解冻方法,提高冷冻效果,本试验比较了不同冷冻速率(-100 ℃ 10 min、-120 ℃ 10 min、-140 ℃ 10 min)和不同解冻温度(37 ℃ 30 s、45 ℃ 30 s、52 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s)对猪精液冷冻效果的影响。结果表明,采用-120 ℃熏蒸10 min,解冻后精子活力为0.36,质膜完整率和顶体完整率也优于其他2组,且差异显著(P<0.05)。采用37 ℃ 30 s方法解冻,精子活力、质膜完整率显著高于其他3组,顶体完整率也高于其他3组,但差异不显著(P>0.05),其畸形率最低和60 ℃ 30 s组差异明显(P<0.05),但与45 ℃ 30 s组和52 ℃ 30 s组差异不显著(P>0.05)。因此,采用-120 ℃平衡10 min冷冻,37 ℃ 30 s水浴解冻方法更为适合0.25 mL细管猪冻精解冻。     

纳米化红景天多糖对猪精液冷冻效果的影响

在冷冻稀释液中分别添加分数为1％、5％、10％、15％、20％的纳米化红景天多糖（Nonomaterialsrhodiolasa—chalinensispolysaccaride,NRSP）溶液,以添加6mg／L红景天多糖（Rhodiolasachalinensispolysaccaride,RSP）为对照组,不添加RSP为空白组,检测其对猪冷冻精子活力、顶体完整率、质膜完整率等生理结构指标,以及精子抗氧化能力的影响。结果表明,添加体积分数为15％NRSP组的精子活力（0．69）、顶体完整率（51．42％）、质膜完整率（25．95％）均高于其他组,并显著高于空白组（P〈0．05）。此外添加15％NRSP组的解冻后直线运动精子百分比（46．33％）要显著高于其他各组（P〈0．05）;添加6mg／LRSP组丙二醛（MDA）浓度最低（10．83±0．39）／2mol／L,并且显著低于空白组（31．85土1．36）μmol／L,（P〈0．05）,但与15％的NRSP组（11．60±0．42）μmol／L无显著差异（P〉0．05）。添加20％的RNSP组超氧化物歧化酶（SOD）活力最高（343．05-＋-19．64）μ／mgprot,显著高于其他添加组（P〈0．05）。精子活力、顶体完整率、质膜完整率之间存在显著的正相关关系（P〈0．05）,而精子活力和顶体完整性与MDA浓度呈显著负相关（P〈0．05）,与SOD活力呈显著正相关（P〈0．05）,质膜完整率与两者含量相关性不显著（P〉0．05）。     

Deep-freezing of boar semen in plastic film 'cochettes'

The motility and membrane integrity of spermatozoa from nine boars frozen with a programmable freezing machine in plastic bags, 'cochettes', and in 'maxi-straws', in total doses of 5 x 10(9) spermatozoa/5 ml with glycerol (3%) used as cryoprotectant, were assessed after thawing. A computer-based cell motion analyser was used to evaluate sperm motility, while the integrity of the plasmalemma was assessed with fluorescent supravital dyes (C-FDA/PI). The fertilizing capacity of the semen frozen in the two containers was investigated by inseminating (AI) gilts. Pregnancy was monitored by Doppler-ultrasound, and the numbers of corpora lutea and viable embryos counted at slaughter, between days 30 and 38 after AI. The cochettes sustained the overall procedure of freezing/thawing (FT), with 30 min post-thaw (PT) sperm motility being significantly higher than for straws, 46.9 vs. 39.5%. The only significant difference in motility patterns detected when comparing the packages was a higher sperm velocity (VCL) in cochettes at 30 min PT. However, percentages of FT-spermatozoa with intact membranes, detected with the supravital probes, were higher in maxi-straws than in cochettes, 46.8 vs. 43.0% (P < 0.05). There were no significant differences found in fertilizing capacity between spermatozoa frozen in maxi-straws and those frozen in cochettes. The results indicate that although the deep-freezing of AI-doses of boar semen in large plastic bags is feasible, problems such as their inconvenient size for storage and inconsistent thawing must be solved before this type of container can be used for the commercial cryopreservation of boar semen.     

The Effect of Glycerol Concentrations on the Post‐thaw In Vitro Characteristics of Cryopreserved Sex‐sorted Boar Spermatozoa

The objective of this study was to optimize protocols for the cryopreservation of sex‐sorted boar spermatozoa. In the experiment 1, we evaluated the effects of a standard boar sperm cryopreservation procedure (3% final glycerol concentration) on the in vitro characteristics of sex‐sorted sperm frozen at low sperm concentrations (20 × 10⁶ sperm/ml; S20 group). Non‐sorted spermatozoa frozen at 1000 × 10⁶ (C1000 group) and 20 × 10⁶ (C20 group) sperm/ml were used as the freezing control groups. In experiment 2, the effects of different final glycerol concentrations (0.16%, 0.5%, 1.0%, 2.0% and 3.0%) on post‐thaw quality of the S20 and C20 groups were evaluated. In both experiments, the samples were evaluated prior to freezing (5°C) and at 30, 90 and 150 min after thawing. Experiment 1 indicated that freezing sperm at low concentrations decreased (p < 0.05) the total motility (TM) and progressive motility (PM) at 90 and 150 min after thawing regardless of whether the sperm were sorted or not. However, the sperm membrane integrity was not affected at any evaluation step. Inexperiment 2, significant effects on the TM and PM because of increased glycerol concentrations in the S20 and C20 groups were observed only at 90 and 150 min after thawing. The samples frozen in 3% glycerol showed lower (p < 0.05) TM and PM values when compared to those frozen in the presence of 0.5% and 1% glycerol. In both experiments, non‐sorted control samples displayed higher percentages of spermatozoa with damaged DNA than sorted spermatozoa. In conclusion, the optimization of cryopreservation conditions by decreasing the glycerol concentrations can improve post‐thaw motility of sex‐sorted spermatozoa frozen at low concentrations.     

近交五指山小型猪精液冷冻保存技术的研究

用液氮熏蒸法在氟板上制作冻精颗粒,以解冻后的精子活率、活力和质膜完整性为判定指标,比较4种冷冻稀释液及不同冷冻-解冻程序对五指山小型猪精液冷冻的效果。结果表明:①Ⅳ号冷冻稀释液冷冻解冻后精子的活率(0.610±0.036)、活力(0.427±0.025)和质膜完整性(0.503±0.015)均显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ号冷冻稀释液(P<0.05)。②实验中精液在4℃冰箱中平衡降温2 h的精液精子活力、质膜完整性均好于在17℃平衡3 h再放入4℃冰箱中平衡2 h的解冻效果,而且精子活率差异显著(P<0.05)。③湿解法的效果优于干解法。     

海藻糖对猪精液冷冻保存效果的影响

在传统的Tris-柠檬酸-葡萄糖稀释液基础上，分别添加25％、50％、75％、100％的海藻糖，研究不同浓度海藻糖对猪精液冷冻后精子质量的影响。结果表明，海藻糖相对于对照TCG稀释液能够显著改善和提高猪精液的冷冻效果，其最佳添加浓度为25％，冷冻-解冻后猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整性以及顶体完整率均显著提高（P〈0．05），分别达到41．38％、46．34％、44．56％、43．51％和64．09％。海藻糖可以明显抑制精子获能，获能处理前精子获能率仅为3．68％，而获能处理后达到41．82％，有利于促进精子获能。精液稀释液中甘油的适宜添加浓度为2％，海藻糖只有与甘油共同作用，才能在冷冻-解冻过程更加有效地保护精子。猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整率、顶体完整率等之间存在极显著的正相关关系（P〈0．01），而与获能处理前精子的获能率存在显著的负相关关系（P〈0．05）。     

谷胱甘肽对犬精液冷冻保存效果的影响

为探讨在冷冻稀释液中添加谷胱甘肽（GSH）对犬精液冷冻保存效果的影响,采用按摩法采集5只杂种土犬的精液,离心去精清后,在冷冻液中分别加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L的GSH,制成0.25 mL的冻精进行冷冻保存,以不添加GSH的处理组作为对照组。解冻后在含有5% CO₂的空气、37 ℃、相对饱和湿度条件下孵育10 h,分别在孵育0、2、4、6、8、10 h时检查精子活力。结果显示：冻融后0 h,0.5、1.0 mmol/L GSH处理组的精子活力较高,分别为0.36和0.38,均显著（P<0.05）高于对照组和2.0、2.5 mmol/L处理组,且两者之间差异不显著（P>0.05）;1.0 mmol/L处理组的精子顶体完整率最高,为85.10%,显著（P<0.05）高于对照组,同时,其精子畸形率最低,为23.00%,显著（P<0.05）低于对照组。冻融后体外孵育2、4 h时,0.5、1.0 mmol/L处理组的精子活力均较高,其中,0.5 mmol/L处理组在体外孵育4 h时,其精子活力仍可达到0.30;孵育6 h时,1.0 mmol/L处理组精子活力最高,显著（P<0.05）高于对照组和2.0、2.5 mmol/L处理组;孵育8 h时,各GSH处理组的精子活力均显著（P<0.05）高于对照组;在孵育至10 h时,各GSH处理组的精子活力较其他孵育时间均有较大幅度的下降,未检测到对照组中有呈直线运动的精子。综上提示,在犬精液冷冻液中添加0.5~1.0 mmol/L的GSH能够显著提高冻融后的精子质量和体外存活时间。     

解冻稀释液中添加精浆对冻融猪精子品质的影响

【目的】 探究冷冻前添加热休克蛋白A8(heat shock protein A8, HSPA8)和解冻后添加不同浓度精浆(seminal plasma, SP)对冻融猪精子的影响。【方法】 采用手握法采集长白猪精液, 添加0.5 μg/mL HSPA8到猪精液冷冻保护剂中进行细管分装, 投入液氮中保存3周后进行解冻, 解冻后添加不同浓度精浆(0、10%、30%和50%), 对冻融后长白猪精子的运动能力、质膜完整性、顶体完整性、细胞凋亡、线粒体膜电位、鱼精蛋白缺乏及体外获能水平等进行评估。【结果】 与对照组相比(无HSPA8和精浆), 添加0.5 μg/mL HSPA8处理组(无精浆)的精子直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)、平均路径速度(VAP)和前向性运动(STR)均显著提升(P<0.05), 精子直线性运动(LIN)和运动的摆动性(WOB)均无显著差异(P>0.05);精子质量参数中活力、质膜完整性和顶体完整性均显著升高(P<0.05), 细胞凋亡水平与线粒体膜电位均显著降低(P<0.05);精子鱼精蛋白缺失率显著降低(P<0.05);精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著提高(P<0.05)。之后在解冻液中添加不同浓度的精浆, 与添加0.5 μg/mL HSPA8处理组(无精浆)相比, 精浆添加量达到50%时, 精子VSL、VCL、VAP、LIN、STR和WOB均显著提升(P<0.05);精子活力、质膜完整性、顶体完整性和线粒体膜电位均显著提高(P<0.05), 细胞凋亡水平显著降低(P<0.05);精子鱼精蛋白缺失率显著降低(P<0.05);精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著提高(P<0.05)。【结论】 在冷冻基础液中添加0.5 μg/mL HSPA8和解冻稀释液中添加50%精浆联合使用可以有效改善冻融精子质量, 将会对猪精液的冷冻保存及商业化生产提供一定的参考。     

Effects of glycerol concentration, equilibration time and temperature of glycerol addition on post-thaw viability of boar spermatozoa frozen in straws

Experiments were conducted to study the effect of glycerol concentration, equilibration time and temperature of glycerol addition on post-thaw viability of boar spermatozoa after cryopreservation in straws. Semen (split ejaculate) in maxi-straws (6 mm o.d.) was frozen using a programmable freezing chamber. Three methods for in vitro sperm evaluation were used: motility (MOT), acrosome integrity (NAR) and flow cytometric analysis of sperm treated with carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide to assess sperm plasma membrane integrity (PMI). No interactions were found among the three variables evaluated. Length of prefreeze exposure to glycerol, ranging from .5 min to 75 min, had no effect on post-thaw sperm viability. Exposure of sperm to a glycerol-containing extender medium at 5 degrees C gave improved post-thaw viability over that exposed at 0 degree C (P less than .05). Glycerol at a concentration of 3 or 4% resulted in maximum post-thaw MOT. Acrosome integrity values were greatest for 2 and 3% glycerol, whereas PMI was greatest when glycerol concentration was 4 to 6%. The primary cryoprotective effect of glycerol on boar semen may be extracellular. It is concluded that 3 or 4% glycerol gives maximum viability of frozen-thawed spermatozoa when the present methods are employed.