猪繁殖与呼吸综合征病毒对受精卵发育的影响

１４头同期发情青年母猪排卵后３２小时，取出受精卵进行微注射或在胚胎培养液－３（加或不加猪繁殖与呼吸综合征病毒，ＰＲＲＳＶ）中培养７２小时。使用猪肺泡巨噬细胞分离病毒，反转录酶聚合酶链式反应和荧光抗体技术检测样品中的病毒。结果与对照组相比，微注射或加有ＰＲＲＳＶ的胚胎培养均未明显抑制体外猪胚胎发育（分别为Ｐ＝０．７５和Ｐ＝０．１４）。用１０￣２０ＴＣＩＤ５０的病毒微注射或大浓度病毒处理胚胎进行培养，     

用LSAB免疫组化染色法检测猪生殖—呼吸道综合征病毒抗原？…

本研究在国内首次成功建立了辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素－生物系（ＬＳＡＢ）免疫组化染色法检测猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗原。应用ＬＳＡＢ染色技术检测１２头人工感染ＰＲＲＳＶ美洲株（ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２）或国内分离株（Ｂ９６－４，Ｂ９６－５）的ＳＰＦ仔猪组织细胞内的ＰＲＲＳＶ抗原，阳性检出率为１００％。     

用猪感染肺泡巨噬细胞诊断生殖—呼吸道综合征

用灌洗肺脏收集的肺泡巨噬细胞建立了检测活猪生殖－－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染的高效敏感方法。５头１０周龄（１头）和１４周龄（４）的猪，口鼻接种口接触感洒ＰＲＲＳＶ。感染ＰＲＲＳＶ前收集每头仔猪的诊断样品在以后９周内，每周采集一次血清。第２和第４－９周收集肺居噬细胞，血清和肺泡巨噬细胞均适于早期感染的检测，但时间稍长后肺泡巨噬细胞为更好。４时仅从１头仔猪血清中分离到病毒，而从４头仔狸的肺泡巨     

用单克隆抗体鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株

应用ＰＲＲＳＶ单克隆抗体,采用直接与间接免疫荧光抗体试验对分离获得的ＰＲＲＳＶ６个毒株进行了鉴定,结果所有分离毒株均能被单克隆抗体（ＳＤＯＷ１７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）所识别,呈现特异荧光,６个分离毒株均能与仅识别美洲型ＰＲＲＳＶ的单克隆抗体Ｆ反应,结果表明６个分离毒株均属于美洲型ＰＲＲＳＶ。利用微量细胞培养对分离毒株ＴＣＩＤ５０测定结果表明,６个分离毒株的ＴＣＩＤ５０分别为１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．７５／０．１ｍｌ、１０－７．２５／０．１ｍｌ、１０－６．２５／０．１ｍｌ。病毒感染细胞的超薄切片电镜观察表明,在感染细胞浆内可见典型的ＰＲＲＳＶ病毒粒子,呈球形或椭圆形,直径约为６０ｎｍ左右,可见囊膜。     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒实验感染SPF猪外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞早期凋亡细胞的观察

采用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ双染色法,用流式细胞仪检测了猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）实验感染ＳＰＦ猪不同时期外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞感染Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ＾＋／ＰＩ＾－细胞群（早期凋亡细胞群）。结果显示,ＰＲＲＳＶ感染猪外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ＾＋／ＰＩ＾－细胞群的表达率均明显高于正常对照猪,感染后２４ｈ表达率达最高值。     

猪繁殖和呼吸综合征（PRRS）血清流行病学调查初报

用美国Ｈｅｒｄｃｈｅｋ猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳ）ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒对来自华北地区和华东地区８个ＰＲＲＳ可疑猪场共４７份血清进行检测。结果是：华北地区６个猪场，华东地区２个猪场ＰＲＲＳＶ抗体阳性检出率分别为５／６和０／２。８个猪场流产母猪、新生弱仔猪，有呼吸症状的育成猪及种公猪阳性检出率分别为１４／２０，５／１６，４／１０和１／１。表明ＰＲＲＳ在我国已经存在，并正在流行     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）分离鉴定及其与欧,美PRRSV …

在我国吉林省某地猪生殖呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ,间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应,而分离株与ＨＣＶ,ＰｒＶ,ＰＰＶ,ＴＧＥＶ,ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原,以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲ     

用于检测猪血清中猪生殖—呼吸道综合征病毒抗体的一种…

为了提高检测猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染猪抗体的血清中和试验（ＳＮ）的敏感性，对不同条件进行了评价和改进，通过在病毒稀释液中添加２０％新鲜猪血清及使用派生于ＭＡ－１０４细胞系的一种受纳细胞克隆（ＭＡＲＣ－１４５），可自始至终获得较高的ＳＮ抗体效价，用于评估ＳＮ试验的待检血清来自两组３周龄，经鼻内感染ＰＲＲＳＶ（ＭＮ－１ｂ株）的猪。用此改良法，在接种后９～１１天首次检出ＳＮ抗体，且于接     

奶牛胚胎分割与半胚裸露冷冻保存试验

本试验研究了①Ａ、Ｂ、Ｃ三个质量等级胚胎的分割效果；②五种不同冷冻方法冷冻裸露半胚的存活情况；③冻前培养３．０、１．５～２．０、１．０小时的裸露半胚存活率。结果①Ａ、Ｂ、Ｃ级胚胎的分割成功率分别为９５．８％（９２／９６）、７且．４％（７０／９８）、３０％（６／２０），三者间差异极显著（Ｐ＜０．０１）；②半胚冷冻前以２０％ＦＣＳ－ＰＢＳ液培养３．０小时后，以五种不同冷冻方法冷冻，均未获得存活半胚；③半胚冷冻前培养３．０、１．５～２．０、１．０小时后，以添加１０％而聚糖的１０％甘油＋０．１Ｍ蔗糖／ＰＢＳ液冷冻，分别获得了０％（０／４５）、６８．８％（１１／１６）、７５．０％（９／１２）的存活率。结果表明，胚胎质量是影响胚胎分割成功率的关键因素，半胚冷冻前的培养时间是影响裸露半胚存活的重要因素。     

应用间接荧光抗体试验检测猪生殖—呼吸道综合征 固？

应用间接荧光抗体试验进行了猪生殖－呼吸道综合征病毒抗体的检测，共检测２个猪场，计２７份血清，其中Ｐ猪场血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２０份，阳性率为９０．９％，Ｌ猪场血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％，首次证实我区存在的ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

奶牛半胚裸露冷冻保存试验

本试验研究了不同冷冻方法，半胚冷冻前不同培养时间及不同冷冻保护液对奶牛７日龄半胚裸露冷冻效果的影响，结果以１０％（Ｖ／Ｖ）甘油＋１０％（Ｗ＋Ｖ）葡聚糖（Ｔ－５００）＋０．１Ｍ蔗糖＋２０％ＦＣＳ－ＰＢＳ溶液为冷冻保护液，裸露冷冻前培养１．０小时的半胚，获得了８２．４％（１４／１７）的较高存活率。试验结果表明，半胚冷冻前培养时间及不同保护液对奶牛半胚裸露冷冻有显著影响。     

应用间接荧光抗体试验检测猪生殖-呼吸道综合征抗体

应用间接荧光抗体试验进行了猪生殖－呼吸道综合征病毒抗体的检测。共检测２个猪场，计２７份血清。其中Ｐ猪场血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２０份，阳性率为９０．９％；Ｌ猪场血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％。首次证实我区存在ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒CH—1al株ORF2～7序列测定

新近发现的猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）是单股ＲＮＡ病毒，属不久前成立的动脉炎病毒科。为了比较从国内分离的ＰＲＲＳＶ与欧美ＰＲＲＳＶ毒株的分子遗传学关系，本文扩增并克隆了ＰＲＲＳＶ ＣＨ－１ａ株ＯＲＦ２￣７，测定了其核苷酸序列。与北美洲型代表株ＶＲ－２３３２遗传距离最近，可能来自同一祖先。     

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

传染性法氏囊病病毒VP2/VP0基因在重组鸡痘病毒中的表达

以鸡痘病毒复制非必需区ＴＫ基因为侧翼,在牛痘病毒Ａ型包涵体晚期启动子（ＡＴＩ）与１６个串联的突变型早期痘苗病毒ｐ７．５启动子组成的复合启动子的下游,分别插入编码传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）结构蛋白ＶＰ２和ＶＰ２－４－３（ＶＰ０）的基因片段后,进行了同源重组和蓝斑筛选,获得２株重组病毒ｖＵＴＡＬａｃＶＰ２－７和ｖＵＴＡＬａｃＶＰ０－１０。经ＥＬＩＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,重组病毒ｖＵＴＡＬａｃＶＰ２－７能表达ＶＰ２,ｖＵＴＡＬａｃＶＰ０－１０能表达ＶＰ２和ＶＰ３,ＶＰ２和ＶＰ３的Ｍｒ分别为４１０００和３２０００。     

BFF,rbGH对牛卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响

利用屠宰黄牛卵巢，对２～５ｍｍ卵泡卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）、受精卵的体外培养（ＩＶＣ）进行了系列研究。结果表明，在成熟培养液中单独添加１０％Ｄ０ＥＣＳ（发情当天牛血清）获得了卵泡卵母细胞受精后较高的卵裂率（６４．７％）、桑椹胚发育率（３９．９％）和囊胚发育率（２４．８％），说明在成熟培养液中单独添加Ｄ０ＥＣＳ是可行的；在含１０％Ｄ０ＥＣＳ的成熟培养液中再添加１０％或２０％ＢＦＦ（牛卵泡液），均能提高受精卵的卵裂率以及桑椹胚和囊胚的发育率，以添加２０％ＢＦＦ效果较好，其囊胚发育率（３５．０％）显著高于对照组（２４．８％，Ｐ＜０．０５）；在卵泡卵母细胞成熟培养系统和受精卵共同培养系统中添加１０μｇ／Ｌ重组牛生长因子（ｒｂＧＨ），虽对体外受精卵的卵裂率无显著影响（Ｐ＞０．０５），但能显著提高卵裂胚的囊胚发育率（Ｐ＜０．０５）     

猪生殖—呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋？…

本研究主要对猪生殖－呼吸道综合征国内分离毒株进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇（ＰＥＧ－６０００）沉淀和差速离心法粗提了经Ｍａｒｃ－１４５细胞系增殖的猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了ＰＲＲＳＶ,经免疫电镜观察化病毒,发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为４２－７８ｎｍ的病毒粒子周围。经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ测定纯化病毒的滴度可达１：１６００以上,并利     

应用重组猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白为抗原建立I—ELISA检？…

用重组杆状病毒表达的钎生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）Ｎ蛋白作为抗原，建立了诊断猪生殖和呼吸综合征（ＰＲＲＳ）的Ｉ－ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司试剂盒检测结果的符合率为９７．３％，与间接 光抗体试验９ＩＦＡ）的符合率为１００％。用该方法的检测国内猪血清８５份，阳性率为１８．８％；能检出ＰＲＲＳ疫苗免疫猪６ｄ的血清抗体，；与猪瘟、伪狂犬病、猪巴氏杆菌病、猪霉形体病阳性血清无交叉反应。