鸡肠炎沙门氏菌感染监测

肠炎沙门氏菌 (SE)是引起人类食物中毒的重要病原之一。为了准确有效地监测鸡群肠炎沙门氏菌感染情况，日本学者建立了一种 ELISA试验，用于检测 SE特异性血清抗体。该方法包被抗原为无鞭毛的 SE抗原。试验检测血清来自某一 SE分离阳性鸡群。检测结果表明该方法的阳性率为 70％，而快速平板凝集试验 (RPA)的阳性率为 60％，以有鞭毛 SE作抗原的商品 ELISA试剂盒的阳性率为 30％。在第一次监测后约 100天，再次用三种方法检测鸡群的血样，由于 SE感染鸡变成隐性带菌鸡，因此，未分离到 SE。商品 ELISA试剂盒的阳性率为 0， RPA…     

Ⅰ群禽腺病毒五邻体蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立一种简便、快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVI)抗体的间接ELISA方法,以表达和纯化的FAVI五邻体重组蛋白作为抗原,优化反应条件,建立了FAVI间接penton-ELISA抗体检测的方法。抗原最佳包被浓度为1.5μg/孔,最适包被条件为37℃,2h后4℃过夜;血清最佳稀释度为1∶100;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2000;ELISA阴、阳性临界值为0.335。用penton-ELISA方法检测100份鸡血清样品,阳性率为41%。     

鸡传染性贫血重组抗原间接ELISA诊断方法的建立

本研究应用重组抗原,成功建立了检测鸡传染性贫血病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法.确定了抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清最适稀释度为1:100,其作用时间为60min,酶标抗体最适作用时间为60min,S/P≥0.24为阳性,≤0.19为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准.该抗原不与鸡其他疾病的10种阳性血清反应,具有良好的特异性;批内重复试验,变异系数小于10%,批间重复试验,变异系数小于15%,具有良很好的重复性;该方法可检出人工接毒后20d的血清抗体,直到试验结束110 d时,仍能检出鸡血清阳性率为81%与全病毒包被抗原ELISA方法的检测结果符合率达92%以上,与进口诊断试剂盒的符合率为97%.本研究为现地免疫鸡群抗体检测和进行CIA流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.     

胰酶分散抗原间接荧光抗体法检测鸡肾型传染性支气管炎病毒及抗体的研究

本文采用胰酶分散法制备抗原，建立了间接荧光抗体法。用此法对人工感染鸡、人工感染鸡胚及自然发病鸡的抗原进行了测定，结果，人工感染鸡肾脏于７２～１６８ｈ１００％检测到特异性荧光，其余时间部分鸡检出特异性荧光；人工感染后病死鸡肾脏均１００％检测到特异性荧光；人工感染鸡胚于４８～１２０ｈ１００％检测到特异性荧光，其余时间部分检出特异性荧光；１７８例自然发病病例中检出抗原阳性病例１５３例。对抗原检测的结果与冰冻切片制备抗原建立的间接荧光抗体法完全一致。用胰酶分散法制备抗原，对已知阳性血清和待检血清进行检测，检测结果与用冰冻切片法制备抗原检测结果一致。该法将检测程序简化，检测时间明显缩短，适合于临诊应用及对鸡群进行抗体监测     

用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体的建立与应用

近年来鸡痘发病率和死亡率有增高趋势，并且免疫失败的病例时有发生。为了探明接种疫苗和感染鸡痘病毒后抗体产生规律，我们建立了用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体，并经正交试验，确定了抗原、抗体的最佳反应条件，还用该法对2组人工感染、1组自然感染、1组疫苗接种和1组空白对照组鸡群的鸡痘病毒抗体进行了跟踪研究。     

猪脑心肌炎病毒抗体间接ELISA方法的建立及应用

应用纯化的EMCV VP1重组蛋白建立了检测EMCV抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最佳工作条件。结果表明,重组蛋白抗原的最适包被浓度为0.54μg/mL;与间接免疫荧光试验比较,结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性。此方法中VP1抗原最佳稀释度为1:100,待检血清的最佳稀释度为1:50,酶标二抗的最佳稀释度为1:800,1%明胶为封闭液,OD450时阴阳性血清的临界值为0.35。对2006年天津7个地区66个猪场295份屠宰猪的血清样本的检测结果显示,天津各地区血清EMCV抗体阳性率在41.67%～93.33%之间,平均84.75%,猪场抗体阳性率在50%～100%,平均93.94%。     

鸭源鸡杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

利用鸭源鸡杆菌YU-PDS-RZ-1-SLG分离株制备超声波裂解抗原,建立了可以检测鸭源鸡杆菌多个血清型抗体的间接ELISA方法。包被抗原质量浓度为10mg/L,包被条件为37℃2h,再4℃过夜;封闭液为1%明胶,封闭条件为37℃1h;阴、阳性血清最佳稀释度为1∶100,酶标二抗工作滴度为1∶1 000;底物显色时间为15min。经交叉性试验、阻断试验和重复性试验证实建立的ELISA方法重复性好,特异性强。板内变异系数为2.01%～5.75%,板间变异系数为2.43%～6.20%。间接ELISA方法的灵敏度是微量凝集试验的25～100倍。利用所建立的ELISA方法检测了人工感染鸭源鸡杆菌的4日龄SPF鸡在感染后不同阶段感染组、同居组和空白对照组的血清抗体,并根据感染后不同阶段所测D450值绘制抗体消长曲线,其抗体水平在感染后32～47d开始上升,60d时达到高峰,但维持时间较短,2周后迅速下降。建立的间接ELISA方法可以用于临床病例的血清学快速检测,为进行鸭源鸡杆菌的血清流行病学调查提供了手段。     

云南省鸡减蛋综合征的血清学调查

从云南省10个养鸡场采集不同日龄、品种、性别和不同用途鸡的血清样品103份，以血凝抑制（HI）试验检测鸡群的减蛋综合征（EDS）血清抗水平，结果，10周龄以下鸡的EDS血清抗体阳性率为16．7％，其阳性率随着日龄的增加而增高；不同品种鸡群中，迪高鸡和地方土鸡的EDS血清抗体阳性率较低，而伊萨褐鸡阳性率高达100％；公鸡EDS血清抗体阳性率为55．6％，母鸡为73．4％；商品鸡EDS血清抗体阳性率为68．95，种鸡阳性率为62．5％；全部检测各的平均阳性率为67．9％，多数血清EDS HI效价为1：32－1：1024之间，最高的达1：4096。     

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的金黄色葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1融合蛋白作为检测抗原，通过优化ELISA反应条件，初步建立了检测血清特异性GST-mTSST-1抗体的间接ELISA方法，监测了小鼠血清中特异性GST-mTSST-1抗体水平的动态变化规律。方阵试验确定的GST-mTSST-1抗原的最适包被浓度为5．0μg／mL，血清最佳稀释倍数为1：100，ELISA阳性反应的临界值为D490nm≥0．219，批内和批间重复试验的变异系数均小于10％。应用该方法对试验小鼠血清进行检测，结果表明，建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性、特异性和较好的重复性，适用于检测特异性GST-mTSST-1血清抗体。     

间接ELISA检测抗传染性法氏囊病病毒抗体方法的建立

采用原核表达的传染性法氏囊病毒(IBDV)核衣壳蛋白VP2作为诊断抗原,建立检测IBD血清抗体的间接ELISA方法.抗原最佳包被量为每孔174.67ng,待检血清最佳稀释度为1:40,待检血清样品的D492nm≥0.43Dpos+0.57Dneg判为阳性,反之判为阴性.对采自安徽省部分地区的979鸡血清样品进行检测,IBDV抗体阳性率为39.73%.结果证实,间接ELISA法用于IBDV血清抗体的监测具有良好的特异性,是一种快速简便的血清学方法,值得在基层推广应用.     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

江西省主要养鸡地区鸡传染性贫血病的血清学调查

为了研究江西省鸡传染性贫血的流行情况,对江西省11个地市主要养鸡地区的24个鸡群中鸡传染性贫血(CIA)的流行情况进行了调查。结果表明:在检测的460份血清样品中,鸡传染性贫血病毒(CIAV)ELISA抗体总阳性率为80.65%,蛋鸡群、肉鸡群和地方鸡群CIAV ELISA检测抗体阳性率分别为77.45%、84.03%和82.14%。说明目前江西省各地饲养的鸡群中CIAV感染相当普遍;各鸡场的感染率有较大差别,最低的抗体阳性率只有5%,最高的阳性率达100%,肉鸡、蛋鸡、地方鸡CIAV抗体的阳性率无明显差别。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

本文建立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA),用于检测鸡传染性支气管炎抗体。采用不连续蔗糖密度梯度离心法提纯鸡传染性支气管炎病毒作为包被抗原,确定了试验最佳工作条件:抗原包被浓度为2.6μg/ml,被检血清稀释度为1:128;酶标抗体工作浓度为1:6000。确定了血清样品阴、阳性的临界值为0.196。与美国KPL IBV-ELISA诊断盒相比较,结果表明建立的IBV-ELISA具有较高的敏感性和特异性。对北京、天津、河北、山东4个地区的12个非免疫鸡群的检测,结果表明阳性率高达74.3%。     

2009-2010年山东地区蛋鸡禽白血病病原学和血清学调查

为了解山东地区蛋鸡禽白血病( Avian Leukosis,AL)的流行病学情况,从泰安、临沂、青岛、聊城等4个地区的祖代种鸡场及其具有亲缘关系的父母代、商品代鸡场采集1827份血清,其中祖代鸡血清597份、父母代鸡血清710份、商品代鸡血清520份;并采集1209份泄殖腔棉拭子,其中祖代鸡棉拭子597份、父母代鸡棉拭子460份、商品代鸡棉拭子152份.通过ELISA检测试剂盒进行了血清的ALV-J、ALV-AB抗体检测、泄殖腔棉拭子的P27抗原检测.结果显示:祖代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为0、0.84％、17.93％,其中不同地区P27抗原阳性率存在较大差异,泰安、聊城、青岛地区P27抗原阳性率分别为52.5％、0.58％、0;父母代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为8.45％、3.10％、30.48％,不同地区之间三者差别较大;而商品代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为13.46％、8.65％、18.42％,不同地区之间三者也存在较大的差别.祖代、父母代及商品代间抗体或抗原阳性率高低的明显相关性,提示存在垂直感染的可能性.山东地区祖代种鸡未检测到ALV-J抗体,ALV-AB抗体检出率极低,仅为0.84％,但个别祖代鸡场P27抗原的阳性率极高,可能存在免疫耐受感染;父母代、商品代鸡群抗体阳性率和抗原阳性率均比祖代高,说明它们已有ALV-J、ALV-AB的感染;父母代及商品代鸡群ALV-J抗体水平都高于ALV-AB抗体水平,说明山东省内AL以ALV-J感染为主,应注意研究其传播途径,加强检疫净化.     

检测猪流行性腹泻病毒S1蛋白抗体的间接ELISA方法

为了建立检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗体的间接ELISA方法,初步分析PED灭活疫苗免疫母猪所产仔猪的血清母源特异抗体动态,笔者应用重组PEDV部分纤突(spike,S)蛋白作为检测抗原,建立了基于PEDV S1蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并用该方法检测了产前4周用PED灭活疫苗免疫母猪的初乳、分娩当天血清及其仔猪1、7、14、21、28和35日龄(d)时血清中的PEDV抗体。结果显示:建立的间接ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒及猪轮状病毒的抗血清无交叉反应;敏感性高于免疫过氧化物酶单层试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),与IPMA检测结果的符合率为97.14%;批内和批间重复性试验的变异系数小于10%。免疫母猪初乳、分娩当天血清中的PEDV抗体阳性率为100%,初乳比血清中的平均抗体水平低;1d仔猪血清PEDV抗体阳性率为50%,平均抗体水平低,与初乳中的抗体水平接近,7d以后所有仔猪血清全部转为PEDV抗体阴性。建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法;产前用PEDV灭活疫苗给怀孕母猪免疫1次时,其所产仔猪血清中的母源特异抗体阳性率和抗体水平低,且维持时间短暂。     

检测鸡传染性鼻气管炎病毒抗体的间接ELISA方法的研究

分别用绿猴肾细胞和鸡胚成纤维细胞殖鸡传染性鼻气管炎病毒NL7784株，提纯抗原建立了检测鸡传染性鼻气管炎病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA），试验的最佳反应条件为：抗原最佳稀释度为1：160，酶标抗体为1：1000稀释，待检血清为1：160稀释，包被液为pH9．0的碳酸盐缓冲兴，6％犊牛血清（CS）作封闭液，稀释液用含10％CS的Tween－20磷酸盐缓冲液，洗涤液用含0．5％Tween－20的磷酸盐缓冲液，抗原与抗体的最佳反应时间为30分钟，底物的反应时间为15分钟。与中和试验进行了比较，证明所产方法具有很好的特异性、稳定性、可重复性和较高的敏感性。     

肠炎沙门菌间接ELISA检测方法的建立

本试验建立和优化了重组蛋白rSEFA介导的间接ELISA方法以特异性检测肠炎沙门菌感染血清。确定其抗原最佳包被量为7.5μg/mL,血清最适稀释度1∶100,作用时间为60 min;酶标二抗最适稀释度为1∶4 000,作用时间为60 min;判定标准为OD值≥0.346。基于rSEFA介导的间接ELISA有较好的特异性,能特异性识别肠炎沙门菌和都柏林沙门菌感染血清,不能识别相近的鸡白痢沙门菌感染血清,此方法与菌体凝集反应同时检测临床血清样品100份,二者阳性率分别为67%和54%,结果符合率为80.6%。这一方法的建立对肠炎沙门菌特异性抗体检测有潜在的应用前景。     

中国鸡群禽呼肠孤病毒抗体的检测与分析

为了解我国鸡群中禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)的抗体水平,本研究利用ELISA方法对2010-2013年来自全国19个省市的鸡血清样品进行了ARV抗体检测。在检测的17 058份鸡血清样品中共检出ARV抗体阳性血清156 80份,阳性率为92.83%,其中免疫鸡群的阳性率为98.50%,非免疫鸡群的阳性率为74.72%。除山东省和广东省外,其他各个省市的样本阳性率均在90%以上。商品肉鸡、肉种鸡、商品蛋鸡和蛋种鸡的ARV抗体阳性率分别为72.66%,98.48%,93.40%和95.53%。部分地方品种鸡群的ARV抗体水平也较高。结果表明,我国鸡群ARV感染情况普遍存在,主要表现为一定比例的免疫鸡群抗体过高、未免疫鸡群存在较高的抗体阳性率。     

肠炎沙门菌间批ELISA检测方法的建立

本试验建立和优化了重组蛋白rSEFA介导的间接ELISA方法以特异性检测肠炎沙门菌感染血清.确定其抗原最佳包被量为7.5 μg/mL,血清最适稀释度1:100,作用时间为60 min;酶标二抗最适稀释度为1:4 000,作用时间为60 min;判定标准为OD值≥0.346.基于rSEFA介导的间接ELISA有较好的特异性,能特异性识别肠炎沙门菌和都柏林沙门菌感染血清,不能识别相近的鸡白痢沙门菌感染血清,此方法与菌体凝集反应同时检测临床血清样品100份,二者阳性率分别为67%和54%,结果符合率为80.6%.这一方法的建立对肠炎沙门菌特异性抗体检测有潜在的应用前景.     

应用原核表达的猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白建立一种间接ELISA诊断方法

本试验在最佳诱导条件下获得猪圆环痛毒Ⅱ型重组Cap蛋白的基础上，利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化，通过Westernblot检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化后的重组融合蛋白作为诊断抗原，对ELISA反应条件进行优化，初步建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法。用该法对广东、广西一些地区收集到的380份血清样品进行检测，检测结果阳性率为86．1％，从中随机取90份猪血清样品与国产商品化试剂盒检测结果对比，符合率为95．6％，表明本实验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性，适于大规模检测PCV2血清抗体的流行病学调查。