用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法，用该法检测20份人工感染鸡血清样品，抗体阳性率为100％，康复期鸡群血清抗体阳性率为43％，人工接种弱毒疫苗65d和170d鸡群血清抗体的阳性率分别为60％、70％。经反复试验，确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件，即抗原包被浓度10．8μg／孔，待测血清最佳稀释度为1：100。     

沙门氏菌fimY基因的原核表达及禽沙门氏菌抗体检测ELISA研究

为研发禽沙门氏菌抗体检测方法,采用大肠杆菌系统表达沙门氏菌属保守的菌毛fimY基因,纯化的目的蛋白经Western blot分析,能与免疫鸡血清和感染鸡血清产生特异性反应条带,证明该重组蛋白既有反应原性也有免疫原性。以此纯化蛋白为抗原建立了间接ELISA(fimY-ELISA)。通过检验已知沙门氏菌鸡源血清、相关非沙门氏菌鸡源血清对fimY-ELISA进行评价,发现其在敏感性方面高于快速平板凝集试验(RPA)和自制的脂多糖抗原ELISA(LPS-ELISA)、肠炎沙门氏菌抗原ELISA(SE-ELISA),但在特异性方面不如LPS抗原ELISA;在与RPA的符合率方面与LPS-ELISA、SE-ELISA基本一致。     

2009-2010年山东地区蛋鸡禽白血病病原学和血清学调查

为了解山东地区蛋鸡禽白血病( Avian Leukosis,AL)的流行病学情况,从泰安、临沂、青岛、聊城等4个地区的祖代种鸡场及其具有亲缘关系的父母代、商品代鸡场采集1827份血清,其中祖代鸡血清597份、父母代鸡血清710份、商品代鸡血清520份;并采集1209份泄殖腔棉拭子,其中祖代鸡棉拭子597份、父母代鸡棉拭子460份、商品代鸡棉拭子152份.通过ELISA检测试剂盒进行了血清的ALV-J、ALV-AB抗体检测、泄殖腔棉拭子的P27抗原检测.结果显示:祖代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为0、0.84％、17.93％,其中不同地区P27抗原阳性率存在较大差异,泰安、聊城、青岛地区P27抗原阳性率分别为52.5％、0.58％、0;父母代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为8.45％、3.10％、30.48％,不同地区之间三者差别较大;而商品代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为13.46％、8.65％、18.42％,不同地区之间三者也存在较大的差别.祖代、父母代及商品代间抗体或抗原阳性率高低的明显相关性,提示存在垂直感染的可能性.山东地区祖代种鸡未检测到ALV-J抗体,ALV-AB抗体检出率极低,仅为0.84％,但个别祖代鸡场P27抗原的阳性率极高,可能存在免疫耐受感染;父母代、商品代鸡群抗体阳性率和抗原阳性率均比祖代高,说明它们已有ALV-J、ALV-AB的感染;父母代及商品代鸡群ALV-J抗体水平都高于ALV-AB抗体水平,说明山东省内AL以ALV-J感染为主,应注意研究其传播途径,加强检疫净化.     

雏鸡肠炎沙门氏菌抗体的血清学分析

目前,应用血清学方法检测鸡群肠炎沙门氏菌感染已有许多报道(Chart等1990)。该方法包括免疫印迹,EL SA和细菌凝集反应。从目前作者们的研究看,凝集试验最适于鸡血清中肠炎沙门氏菌O抗原的抗体的检测。将可溶性皂素与鸡白痢沙门氏菌抗原结合,能用于全血中凝集抗体的检测(Chart等,1990)。     

鸡白血病病毒抗原ELISA试剂盒的研制和应用

以双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）为基本原理，成功地研制出鸡白血病病毒抗原ＥＬＩＳＡ试剂盒，该试剂盒与国外同类试剂盒相比，具备相同的特异性和敏感性，对ＲＡＶ－１纯化样品的最小检出量可达０．７８ｕｇ／ｍｌ，且敏感性高于直接补体结合试验。经初步应用发现，我国商品种鸡群ＡＬＶ阳性率为０．７－１４％，在部分ＳＰＦ鸡群中未检出阳性鸡。     

鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研制

采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原，用提纯的IBV抗原包被微量板，建立了检测鸡传染性支气管炎(IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug／ml、1：200和1：3200。与IDEXX试剂盒相比，其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平。对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测，结果表明所建立的ELISA特异性为95．6％，与IDEXX试剂盒符合率为95．6％。用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后，第4天即可检测到IgG抗体，峰值在第3周。试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后，第5天抗体滴度明显上升。我们认为，该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法。     

柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋和感染肠炎沙门氏菌敏感性的影响

为揭示球虫感染对蛋鸡的肠炎沙门氏菌敏感性及鸡蛋的肠炎沙门氏菌污染率的影响而进行了本研究。结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋及感染肠炎沙门氏菌的敏感性均具有增强作用。具体表现为：柔嫩艾美耳球虫感染可使肠炎沙门氏菌污染蛋壳显著增多（Ｐ＜０．０５）;球虫感染鸡所产蛋,无论是新鲜的还是贮存１周后的,其蛋内容物的肠炎沙门氏菌阳性率比仅感染肠炎沙门氏菌鸡所产蛋要高;球虫感染鸡盲肠中的沙门氏菌阳性率和沙门氏菌数显著增加（Ｐ＜０．０１）;球虫感染鸡输卵管中的肠炎沙门氏菌也有增多;球虫感染使泄殖腔拭子的肠炎沙门氏菌阳性率增加。研究结果表明,柔嫩艾美耳球虫感染可以增加鸡群中肠炎沙门氏菌的水平及其垂直传播的危险。     

云南地方鸡沙门氏菌血清学调查

为了解云南地方鸡种鸡群沙门氏菌的感染情况,对采自盐津乌鸡、南涧乌鸡、武定鸡、尼西鸡、青花鸡、绿春黄连鸡、文山土鸡、宁蒗高原鸡和云龙矮脚鸡9个云南地方鸡种鸡场(户)的5 804份血清样品,采用沙门氏菌微量凝集试验进行抗体检测,开展2019年云南地方鸡沙门氏菌血清流行病学调查。结果显示:云南地方鸡种鸡场沙门氏菌场群阳性率为96.43%,个体平均阳性率为23.07%;云南省不同区域沙门氏菌个体阳性率为5.80%～40.32%;不同品种地方鸡的沙门氏菌个体阳性率为0.89%～53.57%。结果表明:云南地方鸡种鸡场鸡群中沙门氏菌的感染情况较为严重,不同区域、不同品种流行情况并不一致,需因地制宜,制定各场相应的防控净化措施。     

肠炎沙门氏菌快速检测方法的建立

利用针对肠炎沙门氏菌主要O因子抗原O9的3－47－26单克隆抗体建立了快速检测肠炎沙门氏菌的竞争ELISA方法（C－ELISA）。将被检样品与McAb作用，竞争性抑制了McAb与包被肠炎沙门氏菌的结合，同时，也减弱了酶标二抗与McAb的结合，以降低底物反应的颜色，从而达到检测样品的目的。试验结果表明，本方法只选择性地与肠炎沙门氏菌反应，而与其它沙门氏菌均不反应。通过与国标法对210份样品检测结果比较表明，竞争ELISA方法的敏感性和特异性分别为94．4％和97．7％，从而为肠炎沙门氏菌的检测提供了一种快速、敏感、特异的检测方法。     

肠炎沙门氏菌感染鹌鹑的细菌学和血清学诊断

本文评价了试管凝集试验，泄殖腔拭子和粪便样品的细菌分离结果对检测肠炎沙门氏菌感染鹌鹑的可靠性。试验中以１×１０￣（１０）ＣＦＶ的肠炎沙门氏菌培养物经口接种健康鹌鹑，然后以不同的时间间隔采取泄殖腔拭子、粪便和血清进行细菌分离和试管凝集试验。结果表明，肠炎沙门氏菌感染鹌鹑呈间歇排菌，而且排菌主要集中在感染的早期阶段，随后排菌率下降。所以，泄殖腔拭子和粪便样品在感染的早期分离率高，随后分离率下降，细菌分离结果不能说明鹌鹑感染肠炎沙门氏菌状态，为提高细菌分离结果的可靠性，必须多次采集样品进行细菌分离。凝集反应中，鸡白痢沙门氏菌‘Ｏ’抗原的凝集反应滴度比肠炎沙门氏菌‘Ｏ’和‘Ｈ’抗原更一致、敏感、持续时间长，与肠炎沙门氏菌‘Ｈ’抗原结合时，对感染肠炎沙门氏菌鹌鹑，尤其是过去感染的诊断具有实际意义。血清学和细菌学试验相结合将会大大提高诊断的可靠性。本试验为感染肠炎沙门氏菌鹌鹑的检测提供了科学依据。     

广西规模鸡场鸡白血病感染情况调查

用IDEXX公司的禽白血病(ALV)3种ELISA试剂盒对广西规模鸡场不同类别鸡群的血清、喉头/泄殖腔棉拭子、蛋清样品进行禽白血病J亚群(ALV-J)抗体、A和B亚群(ALV-AB)抗体、p27抗原进行检测,发现规模场不同种类鸡群感染程度不同。血清中ALV-J阳性率11.33%(338/2 982),其中核心群鸡阳性率8.87%(86/970),生产群鸡阳性率为12.87%(138/1 072),种公鸡阳性率为12.13%(114/940);p27抗原检测蛋清阳性率为5.48%(43/785),喉头/泄殖腔棉拭子阳性率为15.25%(122/800),蛋清样品检出率低于喉头/泄殖腔棉拭子。另对2个场血清和蛋清ALV-AB、ALV-J、ALV(p27抗原)进行对应检测比较,发现三者没有线性关系,即ALV-J感染率高,ALV-AB和p27抗原检测率不一定高;ALV-AB抗体高,ALV-J和p27抗原阳性率也不一定高。     

鸡肠炎沙门氏菌感染

鸡肠炎沙门氏菌感染是一种近几年才被人们重视的疾病。肠炎沙门氏菌（SE）不仅能引起鸡发病死亡造成严重的经济损失,而且感染鸡的产品作为肠炎沙门氏菌的携带者,还严重危害着人类健康[1]。目前,在沙门氏菌属中肠炎沙门氏菌是引起家禽发病和人食物中毒的最常见血清型之一。人类食物中毒中40％的病例是由沙门氏菌所致。在美国及欧洲一些国家,近年来人和鸡感染肠炎沙门氏菌的数量明显增多,且病原主要是噬菌体4型肠炎沙门氏菌[2,3]。要降低人感染肠炎沙门氏菌数量,就必须重视鸡肠炎沙门氏菌感染的防制。1流行状况鸡肠炎沙门氏菌感染呈世…     

应用FP（荧光标记）技术 检测家禽的SE和ST感染

确定感染禽群是努力防止肠炎沙门氏菌(SE)经蛋源传播给人的一个关键步骤。本实验中．从肠炎沙门氏菌(SE)和鼠伤寒沙门氏菌(ST)的多糖中分离的脂多糖作为抗原，建立FP方法和含SE鞭毛抗原的ELISA方法来检测卵黄样本中的特异抗体。在两个实验中每组SPF蛋鸡经口腔接种10^6或10^8CFU的SE(噬菌体型为13a)或10^8的ST。在接种后5周内采集禽蛋，各组的大多数禽蛋样本都用FP方法和ELISA进行特异抗体的检测。结果表明：尽管特异性的不足限制了抗体检测数据的使用，FP方法相对于传统的血清学方法更为简单和快速。     

禽白血病p27抗原检测阳性与病毒分离的相关性比较

本试验以80只300日龄的A品系蛋鸡为试验对象,分5个日龄段按翅号采集蛋清、泄殖腔棉拭子,无菌抗凝血和血清.用ALV p27抗原检测试剂盒检测蛋清和泄殖腔棉拭子.将无菌抗凝血分离血浆接种DF-1细胞,培养一周后用同样方法检测上清收集液,分析该群鸡只在不同日龄段泄殖腔棉拭子阳性、蛋清样本阳性和病毒分离阳性之间的相关性.用ALV-Ab抗体试剂盒检测各日龄段血清的抗体水平.此外,选取某一日龄段蛋清和泄殖腔拭子样本用4个不同厂家的ALV p27抗原检测试剂盒进行检测比较.结果表明,5个日龄段泄殖腔棉拭子平均阳性率为61％,蛋清样本平均阳性率为72.6％,病毒分离平均阳性率为48.8％.5个日龄段ALV的抗体阳性率一直为零;4个厂家的ELISA试剂盒对同一批样本的检测结果表明,IDEXX试剂盒的敏感度最高.本试验为外源性鸡白血病病毒检测及鸡白血病净化其方法的应用、试剂盒的选择、减少判定的误差、提高净化效果提供了一定的科学依据.     

大理州鸡沙门氏菌血清学调查

为了解大理州鸡群沙门氏菌的感染情况,从大理州9个县(市)的规模化养鸡场及散养场(户),随机采集鸡的血清样本1424份,进行鸡沙门氏菌血清学相关检测.结果:1424份血清样品中,检出阳性样品469份,平均阳性率为32.94％.其中规模化养鸡场检测数为1055份,阳性318份,阳性率为30.14％;散养场(户)17家,抽检...     

辽西地区鸡免疫抑制性传染病流行病学调查研究

针对鸡7种主要免疫抑制性传染病，包括传染性法氏囊炎（IBD）、马立克氏病（MD）、鸡传染性贫血病（CIA）、包涵体性肝炎（IBH）、病毒性关节炎（VA）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、网状内皮组织增殖症（RE）、选择辽西地区有代表性的蛋种鸡群，肉种鸡群，商品蛋鸡群，商品肉鸡群各20个进行血清流行病学调查，主要采用琼脂扩散试验，ELISA试验等诊断方法进行血清抗体检测，此外对辽西地区临床病例进行调查分析，统计近2年内辽西地区鸡7种主要免疫抑制性传染病的感染及发病情况，并对免疫抑制性传染病阳性鸡群的ND HI效价和细菌阳性率进行了检测。结果表明免疫抑制性传染病感染鸡群免疫能力低下，ND HI效价显著偏低，细菌感染率达80%以上。免疫抑制性传染病的存在是构成该地区鸡群免疫失败，疫病流行的主要因素。     

江苏安徽部分地区禽白血病流行病学调查

为了解江苏安徽地区禽白血病病毒(ALV)流行情况,本研究以自制的p27抗体检测试剂盒及商品化p27抗原检测试剂盒对江苏安徽地区5个品系父母代种鸡及其中的3个子代鸡群进行了禽白血病的检测。结果发现,受调查的5个鸡群均有鸡只呈现p27抗体阳性和抗原阳性,其中抗体个体阳性率为25.44%,抗原个体阳性率为24.93%,抗原抗体同时阳性的鸡只很少。其中,部分鸡群的p27抗体阳性率高达49.77%。因净化措施的实施,与父母代鸡群比较、3个检测的子代鸡群p27抗体阳性率呈下降趋势。另外,还发现,公鸡整体抗体阳性率高于母鸡。这些结果提示江苏安徽地区种鸡鸡群不仅存在ALV感染,而且高水平的抗体证明水平感染较严重。结论,加强生物安全和加快ALV净化是当今种鸡群疾病控制的重要工作之一。     

抗鸡白痢沙门氏菌单抗及其在鸡白痢病检疫中的应用研究

本研究应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了一组针对鸡白痢沙门氏菌O_9抗原的单抗。以单抗3-47-26酶结合物和鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种抗体竞争ELISA试验以检疫鸡白痢病,该法通过样品抑制酶标单抗与LPS的结合,以检测鸡白痢抗体。试验结果表明,79份鸡白痢阳性血清具有显著抑制作用(95.0±4.3％),而130份鸡白痢阴性血清以及48份SPF鸡血清抑制不明显,它们的抑制率分别为12.3±10.6％和6.2±5.5％。对94份种鸡血清的检疫结果表明,抗体竞争ELISA比PAT、AGPT、PHA敏感和特异,并进一步讨论了该法在血清流行病学调查方面的应用前景。     

中国鸡群禽呼肠孤病毒抗体的检测与分析

为了解我国鸡群中禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)的抗体水平,本研究利用ELISA方法对2010-2013年来自全国19个省市的鸡血清样品进行了ARV抗体检测。在检测的17 058份鸡血清样品中共检出ARV抗体阳性血清156 80份,阳性率为92.83%,其中免疫鸡群的阳性率为98.50%,非免疫鸡群的阳性率为74.72%。除山东省和广东省外,其他各个省市的样本阳性率均在90%以上。商品肉鸡、肉种鸡、商品蛋鸡和蛋种鸡的ARV抗体阳性率分别为72.66%,98.48%,93.40%和95.53%。部分地方品种鸡群的ARV抗体水平也较高。结果表明,我国鸡群ARV感染情况普遍存在,主要表现为一定比例的免疫鸡群抗体过高、未免疫鸡群存在较高的抗体阳性率。     

鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研究

利用鸡传染性支气管炎M41株病毒研制了检测鸡传染性支气管炎抗体的ELISA试剂盒。抗原最佳包被浓度为0．973ug／ml，被检血清最佳稀释度为1：200，酶标结合物最适工作浓度1：1200，血清样品阴阳性临界值为0．184。本试剂盒和Aflfinitech的IB试剂盒同时检测56份血清样品，比较结果表明本试剂盒的特异性和敏感性分别为100％和88％。试剂盒保存期试验结果表明，试剂盒可保存6个月。