鸡减蛋综合症免疫斑点诊断法的研究

本研究以鸡减蛋综合症(EDS-76)为模型,对常规的免疫斑点(IB)试验做了改进,在对各主要参数进行系统测定的基础上。建立了可用于检测EDS-76的IB诊断法。在该方法中,病鸡血清呈“ ”形染色,健康鸡血清呈“-”形染色,从而使检测结果与判定符号实现了统一。对16种鸡病的标准阳性血清、EDS-79病毒人工感染鸡血清、临床健康鸡血清和SPF鸡血清的检测结果及与现行的EDS-76血凝抑制(HI)试验和琼脂扩散(AD)试验比较表明,IB试验不仅特异、敏感,而且简便、快速。本研究在禽病系列诊断试剂盒的研制方面是一个有益的偿试。     

江都市主要鸡病的调查

对本市范围内的23个乡镇场，85个点，550份鸡血清样本进行鸡新城疫（ND）、鸡马立克氏病（MD）、鸡痘（FP）、鸡病毒性关节炎门A）、鸡腺病毒病（CELD）、白血病（AL）、鸡传染性法氏囊病（IBD）、鸡传染性支气管炎（IB）、鸡传染性喉气管炎（IL）、鸡传染性鼻炎（IC）、禽霍乱（FC）、鸡白痢（SP）、鸡减蛋综合征任DS-76）等共间种疾病进行监测。检狈OMD、FP、VA、CELD、IBD、IB、ILT、IC、FC、SP等10种病，用琼脂扩散试验即AGP法。检测ND、EDS-76用血凝抑制试验（HI）。鸡白痢用平板凝集试验。l调查结果表明，…     

禽脑脊髓炎琼扩抗原的研制和应用

将禽脑脊髓炎病毒（AEV）陕西分离株接种于6日龄鸡胚卵黄囊，16日龄时收取活胚脑、胃肠道和胰腺，匀浆灭活后制成琼扩抗原，该抗原与AE标准阳性血清在36h内出现特异性的沉淀线，而与ND、EDS－76、AI、IB阳性血清及SPF鸡血清不出现沉淀线，用其检测60份血清，48份呈AE阳性，与用标准抗原检测的结果一致。     

鸡传染性支气管炎HA和HI试验方法的研究

用传染性支气管炎(IB)红细胞凝集抑制(HI)试验对SPF鸡血清、健康鸡血清、用SPF鸡制备的IBV标准阳性血清、感染鸡血清和自然发病鸡血清及野外样品测定结果证明,本法操作简便、特异性强、敏感性高、需时短、结果易判定。IBV HI抗体于感染后3周开始出现,然后持续上升,二个月后仍呈上升趋势.本法可定性或定量检测鸡IBV抗体,特别适用于现地诊断和免疫监测。     

免疫层析试纸条(ICS)检测禽流感抗体

以纯化的禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）核蛋白作为捕捉抗原，金标兔抗鸡抗体作为金标二抗，建立检测禽流感血清抗体的胶体金免疫层析试纸条（immunochromatographic strip, ICS）。对标准阳性血清不同滴度进行检测，ICS试验的敏感性高于琼脂扩散试验（AGP）。特异性试验证实，禽流感的ICS试验与新城疫（ND）、传染性支气管炎（IBV）、鸡传染性法氏囊病（IBD）及减蛋综合症（EDS-76）均无交叉反应。同时，用ICS试验和HI试验检测105份鸡血清，两者具有较好的符合性。结果认为：禽流感ICS具有快速简便、特异、灵敏等优点。     

基于禽流感NS1蛋白ELISA诊断方法的建立及临床应用

本研究利用体外表达获得的H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白包被ELISA板,建立鉴别诊断方法,对111份健康非免疫鸡血清及456份待检禽流感灭活疫苗免疫鸡血清进行检测发现,检测健康非免疫鸡血清的阴性率为100%,检测禽流感灭活疫苗免疫鸡血清的阴性率达到94%（429/456）;检测62份禽流感病毒感染鸡血清,有55份呈阳性反应,敏感性为88.7%（55/62）;进行NS1抗体消长规律试验,显示攻毒后第7天开始部分鸡血清NS1抗体水平上升,至14～21 d抗体水平达最高峰。     

McAb捕获抗原检测EDS76病毒抗体的ELISA方法的建立和应用

将三株EDS76病毒单克隆抗体IgG混合,包被ELISA板,捕获病毒抗原后用于检测鸡血清中的EDS76抗体,以OD490nm＞0.3,P/N＞2.1判为阳性结果.经测定,待检血清做1100倍稀释时可以很好地区分阴阳性.所建方法与鸡的其它传染病血清无交叉反应,可被免抗EDS76病毒高免血清竞争性抑制.对11个鸡场330份未接种EDS76疫苗的产蛋鸡血清检测结果表明,血清阳性率最高可达93.33%.     

竞争性酶联免疫法检测鸡克雷伯氏菌病的研究

本试验建立了竞争性酶联免疫法检测鸡克雷伯氏菌病。对６４份鸡血清检测，阳性率４２．２％（２７／６４），灵敏度，阳性血清可稀释到１：２０００。本法与大肠杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、亲水气单胞菌、温和气单胞菌、葡萄球菌无交叉反应比凝集法［阳性单：１８．８％（１２／６４）灵敏度，１：２５６］优越。由此可见用竞争性防酶免疫法检测鸡克雷伯氏菌病，是一种快速、敏感、特异、准确的方法，可广泛应用于大田检测。     

牡丹江地区两个鸡场鸡衣原体病调查

１９９６年４月份，对牡丹江市的两个鸡场进行了鸡衣原体病的调查。共采集鸡血清１５６份，通过间接血凝试验（ＩＨＡ），结果有８例呈衣原体病阳性，阳性占调查总数的５１％。阳性鸡的出现，说明这两个鸡场的鸡已感染了衣原体病，但调查发现还未呈地方性流行，呈隐性经过。     

新城疫（ND）—减蛋综合征（EDS76）蜂胶二联灭活疫苗的研制Ⅰ．制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性试验

将新城疫病毒（NDV）Colon-30株和减蛋综合征病毒（EDS76AV）－127株分别接种于非免疫鸡胚和鸭胚，制备抗原液。抗原液经甲醛灭活后，与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化，制成鸡新城疫（ND）－减蛋综合征（EDS76）蜂胶二联灭活疫苗，对疫苗的安全性和免疫原性进行了测定。对3－6周龄易感雏鸡以2倍使用剂量肌内注射，安全性良好；对1日龄雏鸡接种1个使用剂量进行急性毒性试验。15d生长曲线表明，对雏难 影响。对6周龄雏鸡注射1个使用剂量，每批疫苗免疫10只鸡，免疫后5－32d，鸡血清中EDS76血凝抑制（HI）抗体的几何平均滴度（GMT）为6．5－11．8log2,ND血凝抑制（HI）抗体的几何平均滴度（GMT）为4．8－9．8log2；对ND免疫攻毒试验表明，3批疫苗，每羽份含有的半数保护量（PD50）分别为≥127、≥131和≥127。     

三种鸡传染性法氏囊病活疫苗免疫效力的比较研究

试验用3种不同亚型的鸡传染性法氏囊病（IBD）疫苗毒株制备单价、双价及三价活疫苗。将3种苗分别免疫10－14日龄的SPF鸡，于免疫后1－4周内用法氏囊标准强毒株攻击；攻毒后第3d、14d观察法氏囊病理变化并测定法氏囊重／体重比值；同时检测免疫鸡血清中和抗体水平。试验结果表明，双价及三价活疫苗有明显高的攻毒保护率；血清中和抗体产生早，抗体水平高。     

云南省鸡减蛋综合征的血清学调查

从云南省10个养鸡场采集不同日龄、品种、性别和不同用途鸡的血清样品103份，以血凝抑制（HI）试验检测鸡群的减蛋综合征（EDS）血清抗水平，结果，10周龄以下鸡的EDS血清抗体阳性率为16．7％，其阳性率随着日龄的增加而增高；不同品种鸡群中，迪高鸡和地方土鸡的EDS血清抗体阳性率较低，而伊萨褐鸡阳性率高达100％；公鸡EDS血清抗体阳性率为55．6％，母鸡为73．4％；商品鸡EDS血清抗体阳性率为68．95，种鸡阳性率为62．5％；全部检测各的平均阳性率为67．9％，多数血清EDS HI效价为1：32－1：1024之间，最高的达1：4096。     

甲硝唑对鸡传染性法氏囊病活疫苗免疫效果的影响

本研究观察了药物对传染性法氏囊病（IBD）活疫苗初次免疫和二次免疫的影响，结果显示高抗传染性法氏囊病病毒（IBDV）母源抗体雏鸡IBD活疫苗初次免疫前应用10－100毫克／千克甲硝唑和10毫克／千克左旋咪唑，在免疫鸡血清抗IBDV抗体水平明显下降，甲硝唑用药鸡疫苗二次免疫后，血清抗IBDV抗体滴度明显高于未用药对照组。10毫克／千克左旋咪唑给药组疫苗二次免疫后鸡血清抗IBDV抗体滴度与未用药对照组无明显差别。     

应用进口ELISA试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体

鸡传染性支气管炎（IB）是由传染性支气管炎病毒引起鸡的一种急性高度接触性的呼吸道传染病，是严重危害我国乃至世界养鸡业的重要疾病之一。已有多种血清学方法可用于IB抗体检测，我国目前常用的方法有琼脂扩散试验（AGP）、血清中和试验（SN）、间接血凝试验（IHA）等。国内很多学者先后建立了ELISA方法检测IB抗体均取得理想结果，但仅限于实验室检测，在基层推广应用还有一定困难。作者在加04年7月至2004年11月应用美国Affinitech-IB抗体检测试剂盒对山东几个规模化养鸡场送检的血清样品进行了检测，现报告如下。     

传染性支气管炎病毒(M41株)HI试验抗原的特异性和敏感性试验

采用本研究室制备的3批传染性支气管炎病毒(IBV,M41株)HI试验抗原,分别对100份和80份不同鸡血清进行IBV HI抗体检测,同时用IBV ELISA抗体检测试剂盒进行检测,比较两种不同方法检测的特异性和敏感性。结果显示,特异性试验中80份SPF鸡血清,自制抗原检测均为阴性,IBV ELISA检测79份为阴性,10份其他鸡病血清,两种方法检测9份均为阴性,10份IBV阳性血清两种方法检测均为阳性;敏感性试验中,74份已知IB疫苗免疫或IBV M41株感染鸡血清IBV HI检测72份为阳性,阳性检出率为97.3%(72/74),IBV ELISA检测74份均为阳性,阳性检出率为100%(74/74),SPF鸡血清及其他鸡病血清,两种方法检测均为阴性,两种检测方法总符合率为97.5%,差异不显著(P0.05)。试验结果证明,本研究室自制抗原具有良好的特异性,特异性为100%,抗原同时具有良好的敏感性,但IBV ELISA方法的敏感性要高于IBV HI方法。     

ELISA检测鸡新城疫病毒特异性IgM抗体的研究

以新城疫病毒单克隆抗体包被板,用10％小牛血清-PBS封闭后,捕获尿囊液中的新城疫病毒作固相抗原.在此板上应用酶标抗鸡IgM单克隆抗体进行间接ELISA试验检侧鸡血清中新城疫病毒的特异性IgM抗体.试验证明该方法特异性强、敏惑性高.兔抗新城疫病毒阳性血清可特异性阻断反应,将新城疫病IgM阳性血清用2-ME处理可使ELISA反应呈阴性,与禽源多杀性巴氏杆菌鸡IgM阳性血清、鸡传染性支气管炎病毒IgM阳性血清无交叉反应.该试验可检测到La Sota免疫后3天鸡血清中的特异性IgM,对鸡新城疫病毒IgM阳性血清的检测效价可达1:320以上,并可检测到临床新城疫病鸡血清中的特异性IgM抗体.     

应用间接ELISA检测鸡病毒性关节炎抗体的研究

用本试验建立的抗鸡病毒性关节炎(AVA)抗体的间接 ELISA 方法检测了实验感染 AVA 病毒(AVAV)的鸡血清、自然感染鸡血清及 IBD,ND 和 MD 病鸡血清,证明其具有较高特异性.通过对鸡实验感染 AVAV 后不同时期的检测表明.间接 ELISA 可在感染后6天检出血清特异性抗体,且不同时期检出率均高于 AGID 法,并可在2小时内报告试验结果.适用于 AVAV 抗体的常规检测.用该法对来自南京、海宁、长春等地鸡场的162份血清进行检测,阳性率为10.5%.     

囊霸王冲剂防治鸡甘保罗病的效果

囊霸王冲剂系防治鸡百保罗病（传染性囊病）的纯中药冲剂，为谈黄色细粉，易溶于水，以饮水途径给药。本试验是检测其对鸡传染性囊病（简称IBD）的防治效果。一、材料与方法1．试验鸡：从广州力康养鸡公司购进1天龄的海兰雏鸡。购入后隔离在健康鸡舍饲养，至20天龄时，用IBD琼胞扩散沉淀试验检测其血清，证实已无IBD母原抗体。2．鸡甘保罗病病毒（简称IB-DV）：系广东省农科院兽医研究所禽病室在发病鸡场分离并保存的强毒。对鸡的半数感染量（ID50）为10-6、0/ml，本试验人工发病使用剂量为40ID50，即10－4、0稀释，每只口服0．4ml。…     

以MTT比色法检测鸡脾淋巴细胞转化效果

本研究运用ＭＴＴ比色法以正交试验对鸡脾脏淋巴细胞转化的最佳条件（ｃｏｎＡ量、血清种类和浓度）进行了研究。结果表明，无论血清种类和浓度如何，低剂量ＣｏｎＡ（２．５～１０μｇ／ｍｌ）可以获得较好的转化效果。当ＣｏｎＡ的量确定时，低浓度鸡血清（０．５％～１．２５％）的转化效果优于高浓度（２％～３％）：５％犊牛血清优于任何浓度的鸡血清；无血清培养基优于血清培养基。其最佳组合为无血清ＲＰＭＩ１６４０培养基加ＣｏｎＡ２．５μｇ／ｍｌ。     

笼养蛋用鸡血清降钙素水平的检测

对北京某大型蛋用鸡场产蛋高峰期及高峰期后（27、39和51周龄）的临床正常海兰褐色蛋鸡和瘫痪鸡血清的降钙素（CT）水平进行检测，并对瘫痪鸡进行病理剖检和X光检测。结果，产蛋高峰期时，笼养蛋用鸡血清CT水平先上升，然后逐渐下降，瘫痪鸡血清CT水平最低，瘫痪鸡胫骨和跖骨骨密度明显疏松，髓腔变宽，骨髓减少。