黄鳝腹腔左侧管囊结构的研究初报

黄鳝(Monopterus albus Zuiw)腹腔左侧的管囊结构通常被人们认为是退化性腺(长江鱼类,湖北水生所鱼类室,1976,科学出版社)。作者在研究黄鳝泌尿系统形态学的过程中发现该结构实属膀胱结构。现初报如下:     

黄鳝WT1基因序列分析及在性腺发育过程中的表达

采用RT-PCR法从黄鳝(Monopterus albus)性腺mRNA中克隆获得了WT1基因,根据其氨基酸序列有无KTS区将黄鳝WT1基因分为2种类型:WT1(-KTS)为1 236bp,WT1(+KTS)为1 245bp。与NCBI/GenBank上其他物种进行氨基酸序列比对,发现它们与斜带石斑鱼的WT1a相似性最高,分别为93.2%和93.0%,并且它们均在羧基端具有相似性很高的锌指结构区域。系统进化树分析发现,黄鳝WT1基因与斜带石斑鱼WT1a聚类为一支。WT1基因在黄鳝性腺、肾、肠、脾和心脏组织中都有表达,且该基因在黄鳝雌性、间性和雄性性腺中的表达量在各时期都有先升高后降低的表达趋势。     

网箱养殖条件下黄鳝初次性成熟的年龄

对网箱养殖条件下黄鳝性腺指数进行测定并观察性腺组织切片,结果发现:网箱养殖条件下黄鳝在1周年内可以达到雌性性成熟,即网箱养殖条件下雌性黄鳝初次性成熟年龄为1龄;网箱养殖条件下1周年内黄鳝的性腺指数大致呈增长趋势,在6月,性腺发育成熟时,性腺指数达最大值,其值为14.33±2.07;网箱养殖黄鳝在1周年内血清雌二醇质量浓度在6月达到最大值,即(1 233.52±126.07)pg/mL,血清睾酮质量浓度在5月已经达到最大值,即(13.99±1.54)pg/mL。     

低蛋白水平饲料对黄鳝性腺指数和性腺发育的影响

以体重(13.50±1.10)g的黄鳝(Monopterus albus(Zuiew))为试验对象,以鱼粉作为主要蛋白源,按5个蛋白水平(10、15、20、25、40g/100g)设计等能饲料,每处理3个重复,通过为期15个月的饲养试验,探讨了低蛋白水平对黄鳝性腺指数和性腺发育的影响。结果显示,不同蛋白水平饲料对黄鳝性腺指数和性腺发育均具显著影响,对照组(40g/100g)中黄鳝性腺指数显著性地高于其他各试验组。组织切片结果表明,各处理组中性腺发育的方式是相同的,各组之间没有差异;在间性个体中,可看见精母细胞分布在卵母细胞中,在蛋白含量低的处理组中这种现象比较明显;在蛋白含量较低的试验组中可见有成熟的雄性性腺存在;还发现有繁殖后的功能性雄鱼。     

黄鳝nanos3基因克隆鉴定及其组织表达分析

【目的】明确nanos3基因在黄鳝卵巢发育和维持过程中的重要作用,为黄鳝PGCs可视化分子标记、生殖细胞移植及性腺发育分化机制研究打下基础。【方法】通过RACE克隆黄鳝nanos3基因cDNA序列,运用ProtParam、 SOMPA、 SWISS-MODEL、 SignalP、 TMHMM及NetPhos等在线软件进行nanos3蛋白生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR检测nanos3基因在黄鳝不同组织中的表达情况,并以冰冻切片荧光原位杂交进行性腺组织定位。【结果】黄鳝nanos3基因cDNA序列全长1289 bp,包括147 bp的5'非编码区 （5'-UTR）、 531 bp的开放阅读框 （ORF）及611 bp的3'非编码区（3'-UTR）,共编码176个氨基酸残基。黄鳝nanos3蛋白分子量为19.61 kD,理论等电点（pI）为9.07,为碱性蛋白;在黄鳝nanos3氨基酸序列第108~162位处存在2个锌指基序 “CCHC”结构域,无信号肽和跨膜结构域;蛋白二级结构以无规则卷曲的占比最高 （64.20%）,其次是α-螺旋 （占24.43%）,延伸链、 β-转角的占比分别为6.82%和4.55%。黄鳝与大刺鳅、射水鱼、斑马鱼等鱼类的nanos3氨基酸序列相似性分别为67.5%、 57.2%和50.3%,与中国林蛙、粗皮蛙等两栖类动物的相似性分别为39.3%和30.3%,与人类、小鼠等哺乳类动物的相似性分别为33.3%和30.9%。nanos3基因在黄鳝肌肉中不表达,在精巢、肾脏、脾脏、脑、肝脏、肠道、心脏和血液中的相对表达量较低,在卵巢中的相对表达量最高,极显著高于在其他组织中的相对表达量（P<0.01）,呈明显的组织特异性表达模式;冰冻切片荧光原位杂交分析结果显示,黄鳝nanos3基因仅在生殖细胞中表达,支持细胞中未见表达。【结论】黄鳝nanos3基因进化相对保守,主要在卵巢的生殖细胞中表达,且以细胞质中的表达为主,与核遗传信息的传递相关,是黄鳝性腺发育及分化相关的功能基因。     

黄鳝性腺差异表达基因的筛选和克隆

运用ACP—DDRT—PCR技术筛选和克隆了黄鳝不同发育时期性腺组织的差异表达基因。结果显示：利用2个随机ACP引物筛选到2个表达差异显著的基因,并对这2条差异表达片段进行克隆、测序分析,获得这2个基因的部分cDNA序列,长度分别为408bp和421hp。同源性分析结果显示其中一个基因与黄鲈卵巢cDNA文库中的一个基因（Gene BankNo．G0657149．1）高度同源;而另一个基因无同源性序列,视为新报道的基因。进一步半定量RT—PCR检测,结果显示：这两个基因在黄鳝卵巢和间期性腺中的表达差异显著,因此推测其在黄鳝性腺发育以及性逆转过程中起着重要作用。     

黄鳝性腺差异表达基因的筛选和克隆

运用ACP—DDRT—PCR技术筛选和克隆了黄鳝不同发育时期性腺组织的差异表达基因。结果显示：利用2个随机ACP引物筛选到2个表达差异显著的基因,并对这2条差异表达片段进行克隆、测序分析,获得这2个基因的部分cDNA序列,长度分别为408bp和421bp。同源性分析结果显示其中一个基因与黄鲈卵巢cDNA文库中的一个基因（GeneBankNo．G0657149．1）高度同源;而另一个基因无同源性序列,视为新报道的基因。进一步半定量RT—PCR检测,结果显示：这两个基因在黄鳝卵巢和间期性腺中的表达差异显著,因此推测其在黄鳝性腺发育以及性逆转过程中起着重要作用。     

光照时间对黄鳝生长及性腺发育的影响

以体重(25.5±0.7)g的雌性幼鳝(Monopterus albus)为对象,研究了不同光照周期对其生长和性腺发育的影响。结果表明,黑暗组在63 d和42 d时,黄鳝的增重率和体重特定增长率均显著大于其他处理组(P0.05);63 d时,长光照组黄鳝的体重增长受到明显抑制,但其性腺指数却显著高于其他各处理组;24 h的持续光照同时抑制黄鳝的生长和性腺发育,与短光照或自然光照相比,黄鳝在黑暗状态下其生长和性腺发育均得到改善。     

论述黄鳝养殖技术

目前黄鳝人工繁殖技术尚未普及,鳝种来源仍要靠捕捞和购买野生鳝种,因此本文主要介绍成鳝养殖技术. 一、黄鳝的生物学特征 1.耐氧性 黄鳝口腔、喉腔以及肠腔内壁表皮布满血管,组成辅助呼吸器官,可直接呼吸空气中的氧气;湿润的皮肤也可直接呼吸空气(黄鳝鳃严重退化,呼吸水中溶解氧能力弱).只要水中溶解氧含量在2毫克/升以上,黄鳝就正常生活.     

中华条颈龟胚胎期性腺分化的组织学观察

采用石蜡组织切片和HE染色法,观察了在29℃下中华条颈龟(Mauremys sinensis)受精卵孵化胚胎期的性腺发育,并研究了其性别分化的过程。结果发现,沃尔夫管的发育早于缪勒氏管,从胚胎发育第19天起,单层缪勒氏管管壁细胞开始分裂增殖,随着胚胎的发育,管壁分化出黏膜层、黏膜下层和浆膜层,发育趋于完整;沃尔夫管发育停滞,萎缩退化。在胚胎发育第19天,性腺开始观察到少量卵原细胞和卵巢腔,分化完成时间为第25天,发育为卵巢。结果表明,胚胎期第19～25天为性别决定的关键时期,缪勒氏管的发育与卵巢分化具有同步性。     

低蛋白含量饲料对黄鳝生长和性转变的影响

以体重为(9.86±0.82)g的黄鳝(Monopterus albus Zuiew)为试验对象,以白鱼粉和豆粕作为蛋白源,设计10%、15%、20%、25%、40%共5个蛋白水平梯度的等能饲料,探讨低蛋白含量饲料对黄鳝生长、性腺发育和性逆转的影响。结果显示,黄鳝的体重、肥满度、日增重、净增重和成活率都随着饲料蛋白含量的增加而显著增加;黄鳝的性腺指数随着蛋白水平的升高而增加。低蛋白含量饲料组中,间性和雄性比例明显高于高蛋白含量组,表明低蛋白含量饲料对黄鳝的性逆转有促进作用。     

饥饿和再投喂对中间球海胆性腺发育的影响

对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius进行了不同时间的饥饿和再投喂试验。采用各组“饥饿时间 投喂时间”相同的试验设计,在30 d内,试验组(S3、S6、S9、S12组)海胆分别饥饿3、6、9和12d后再连续饱食投喂直至试验结束,同时设对照组S0。结果表明:试验结束时S3组海胆性腺重、性腺指数均接近对照组,其余各组较对照组低;特殊生长率在再投喂的第2 d或第4 d出现最大值。性腺组织学观察的结果表明:对照组海胆性腺为滤泡型,由生殖细胞和营养细胞构成,发育至生长期;随着饥饿时间的延长,雄海胆性腺中成熟精子的数量减少,雌海胆性腺中初级卵母细胞发育迟缓,而雌、雄海胆性腺中营养细胞的数量无明显变化;再投喂后,性腺有不同程度的发育。     

黄鳝血清总脂含量与体长关系的研究

[目的]为了探讨黄鳝血清总脂含量与体长的相关性。[方法]以处于繁殖季节的体长为19.3～68.0 cm的53尾黄鳝为研究对象,采用香草醛法测定不同体长黄鳝的血清总脂含量,并分析体长与黄鳝血清总脂含量的关系。[结果]黄鳝血清的总脂含量为3.94～11.61 mg/ml。黄鳝体长(x)与血清总脂含量(y)间的回归方程为y=5.526 1 x+392.7(r=0.373 8),说明两者间存在显著正相关。[结论]在繁殖期间黄鳝血清总脂含量随体长变化不大,这使黄鳝在繁殖期间血清总脂含量处于较稳定的生理状态。     

黄鳝性转变与体重、年龄的关系

研究了黄鳝（Monopterus albus Zuiew）性转变与体重、年龄的关系。结果表明,黄鳝性别与体重关系密切,体重在50．0g以下的黄鳝,均为雌性个体;体重在50．1～75．0g的黄鳝,开始出现性转变;体重在100．1～125．0g,雄性比例开始超过雌性的比例;体重在125．1～300．0g之间,随着体重的增加,雄性比例逐步增加,而雌性的比例逐步减少;体重超过300．0g的个体,则全部为雄性个体。1龄、2龄黄鳝均为雌性个体,3龄黄鳝开始出现性转变,4龄黄鳝的雄性比例超过雌性比例;5～8龄的个体,随着年龄的增长,雌性比例逐渐减少,雄性比例逐渐增加;9～11龄的个体,仍然有雌性个体。     

高效氯氟氰菊酯对黄鳝的急性毒性作用

[目的]研究高效氟氯氰菊酯对黄鳝的毒性作用,为安全使用农药提供参考。[方法]将体长26.6~29.9 cm,体重17.68~21.51 g的黄鳝置于水簇缸内,采用常温静水试验法进行高效氯氟氰菊酯对黄鳝的急性毒性试验。按等对数间距设置0.055 2、0.038 1、0.026 30.018 10、.012 5μg/L高效氯氟氰菊酯的5个浓度组和1个对照组,观察黄鳝24、48、729、6 h的存活、中毒及死亡症状。[结果]随着药液浓度上升和浸泡时间的延长,各浓度组黄鳝的平均死亡率均逐步上升。至48 h时0.055 2μg/L浓度组黄鳝已全部死亡。对照组无死亡。高效氯氟氰菊酯对黄鳝的244、87、29、6 h的半致死质量浓度分别为0.036 2、0.032 00、.026 30、.021 3μg/L,安全质量浓度为0.002 13μg/L。[结论]药物的浓度与黄鳝的死亡情况密切相关,高效氯氟氰菊酯对黄鳝剧毒。     

三种高蛋白活体动物饲料对黄鳝生长的影响

探究了3种高蛋白活体动物饲料对黄鳝(Monopterus albus)生长的影响.分别用蝇蛆、黄粉虫、蚯蚓以及三者与市售鱼粉饲料混合制成的人工配制饲料饲喂黄鳝,养殖周期为30d.结果显示,就黄鳝的体重和体长增加而言,投喂活体动物明显优于人工配制饲料,且蝇蛆最佳,黄粉虫其次,蚯蚓第三;但投喂活体动物的黄鳝死亡率明显高于人工配制饲料,其中,投喂蚯蚓的死亡率最高.     

几种防渗渠道断面的比较分析

通过对防渗渠道的U形、梯形、矩形、半圆形、复合式、暗渠等断面组成及其水力学特性的对比分析,认为在防渗渠道的建设中,干、支渠应选用宽浅式梯形断面,而农渠中应选用U形断面.