黄鳝性腺差异表达基因的筛选和克隆

运用ACP—DDRT—PCR技术筛选和克隆了黄鳝不同发育时期性腺组织的差异表达基因。结果显示：利用2个随机ACP引物筛选到2个表达差异显著的基因，并对这2条差异表达片段进行克隆、测序分析，获得这2个基因的部分cDNA序列，长度分别为408bp和421hp。同源性分析结果显示其中一个基因与黄鲈卵巢cDNA文库中的一个基因（Gene BankNo．G0657149．1）高度同源；而另一个基因无同源性序列，视为新报道的基因。进一步半定量RT—PCR检测，结果显示：这两个基因在黄鳝卵巢和间期性腺中的表达差异显著，因此推测其在黄鳝性腺发育以及性逆转过程中起着重要作用。     

异育银鲫促甲状腺激素β亚基基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR、RACE及克隆等方法获得了异育银鲫促甲状腺激素β亚基(TSHβ)基因全长cDNA序列。该cDNA全长926 bp,5’端非编码区68 bp;3’端非编码区372 bp;开放阅读框(ORF)486 bp,编码161个氨基酸。经序列分析显示,其编码的氨基酸序列与金鱼[Carassius auratus(goldfish)]、鲤(Cyprinus carpio)、鳙(Aristichthysnobilis)、斑马鱼(Danio rerio)、虹鳟(Salmo gaidnerii)、鲑(Salmo salar)、鳗鲡(Anguilla anguilla)具有较高的相似性,其相似性分别为91.3%、87.6%、83.2%、77%、58.6%、56.1%、43.55%,同源性较高,这说明TSHβ亚基在长期的进化中具有较高保守性。而且在比较中还发现:异育银鲫和其它7种鱼类相比在5’端多11个氨基酸序列,并且都含有定位保守的12个半胱氨酸残基和一个N糖基化位点。     

黄鳝性腺差异表达基因的筛选和克隆

运用ACP—DDRT—PCR技术筛选和克隆了黄鳝不同发育时期性腺组织的差异表达基因。结果显示：利用2个随机ACP引物筛选到2个表达差异显著的基因，并对这2条差异表达片段进行克隆、测序分析，获得这2个基因的部分cDNA序列，长度分别为408bp和421bp。同源性分析结果显示其中一个基因与黄鲈卵巢cDNA文库中的一个基因（GeneBankNo．G0657149．1）高度同源；而另一个基因无同源性序列，视为新报道的基因。进一步半定量RT—PCR检测，结果显示：这两个基因在黄鳝卵巢和间期性腺中的表达差异显著，因此推测其在黄鳝性腺发育以及性逆转过程中起着重要作用。     

氨氮对白斑狗鱼成鱼的急性毒性研究

采用常规生物急性毒性实验法，研究了在pH7．85、水温8℃条件下，氨氮对白斑狗鱼成鱼的急性毒性。结果表明，自斑狗鱼对氨氮的耐受力不强，氨氮对白斑狗鱼成鱼的24、48、72、96h的半数致死浓度分别为45．85、35．26、27．24、24．92mg/L，安全浓度为2．492mg/L；非离子氨对白斑狗鱼的24、48、72、96h的半数致死浓度分别为0．613、0．471、0．364mg/L、0．333mg/L，安全浓度为0．033mg/L。     

LR 型微囊藻毒素对鲢鱼PEPCK基因表达的影响

在前期经LR 型微囊藻毒素（MC-LR）处理后建立鲢鱼肝脏组织抑制差减杂交文库的基础上,利用RACE 方法克隆了经MC-LR 处理后差异表达明显的鲢鱼磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK 基因cDNA 全长,并对其进行了序列分析,然后通过半定量分析了经MC-LR 投与1、5、10 h鲢鱼肝脏组织PEPCK 表达水平。结果显示：鲢鱼PEPCK 基因cDNA 全长2 605 bp,包括101 bp 的5'' 端非翻译区、564 bp 的3'' 端非翻译区、1911 bp 的开放阅读框,编码636 个氨基酸。将鲢鱼PEPCK 基因cDNA 核酸及氨基酸序列与GenBank 中已发表的其他几种鱼类的相应序列进行比对,表明鲢鱼PEPCK 与翘嘴红鲌的同源性最高,其核酸及氨基酸序列的相似性分别达到97%和99%;其次为斑马鱼,同源性均达到90%以上;与星斑川鲽的同源性最差,但核酸及氨基酸序列的相似性也分别达到77%和84%,说明鱼类PEPCK 在长期的进化过程中具有很高的保守性。鲢鱼PEPCK 具有与草酰乙酯结合的特有结构域以及与GTP 三磷酸链结合的激酶1 和激酶2 基序。另外,鲢鱼投予MC-LR 后,肝脏组织PEPCK 经过1、5、10 h 的表达量均有显著升高,说明鲢鱼投予MC-LR 1 h内该基因即被诱导表达,且在10 h内皆维持较高的表达水平。这与微囊藻毒素作用有关,推测与微囊藻毒素解毒过程相关。     

微囊藻毒素对鲢鱼肝脏GST和CYP7A1基因表达的影响

为探究微囊藻毒素(MC)对鲢鱼肝脏谷胱甘肽S转移酶(GST)和胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)基因表达的影响,克隆了鲢鱼肝脏GST和CYP7A1基因的部分c DNA片段,并对饲养密度为1.3×108cell/L的有毒和无毒两种铜绿微囊藻水体中第2 d、第4 d和第6 d的鲢鱼肝脏取样,通过RT-PCR与Q-PCR技术分析肝脏GST和CYP7A1基因在MC影响下不同时间点的表达情况。结果显示,有毒铜绿微囊藻水体中鲢鱼肝脏GST相对表达量在第6 d显著下降,说明GST基因在第6 d时在MC解毒过程中开始发挥作用;鲢鱼CYP7A1相对表达量自第2 d开始显著下调并随时间延续维持在一个较低的水平,说明MC作用下CYP7A1表达受到抑制,可能对胆汁酸合成造成影响。为进一步研究鱼类微囊藻毒素去毒基因以及抑制对MC转运和吸收的关键基因提供依据。     

黄鳝性腺抑制差减文库的构建和分析

应用抑制性差减杂交技术构建了黄鳝(Monopterus albus)Ⅳ期卵巢和间期性腺的差减cDNA文库.正向差减杂交以间期性腺为试验方,Ⅳ期卵巢为驱动方;反向差减杂交以Ⅳ期卵巢为试验方,间期性腺为驱动方.将获得的差减cDNA片段连接质粒载体,然后转化大肠杆菌DH5α,最后获得的正、反向差减文库分别含461、678个重组子.经PCR扩增鉴定插入片段范嗣为200～2000 bp.随机选取正、反文库共100个阳性克隆测序分析,得到90个有效基因片段,与GenBank进行BLASTx和BLASTn同源比对.进一步从文库中选取2个基因用于半定量RT-PCR,对文库质量进行验证.结果表明,所建文库能够达到富集这两期性腺差异表达基因的目的.黄鳝性腺差减文库的构建,为进一步分离、鉴定黄鳝性腺发育和性逆转的相关基因奠定了基础.     

异育银鲫促甲状腺激素β亚基基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR、RACE及克隆等方法获得了异育银鲫促甲状腺激素β亚基(TSHβ)基因全长cDNA序列。该cDNA全长926 bp,5’端非编码区68 bp;3’端非编码区372 bp;开放阅读框(ORF)486 bp,编码161个氨基酸。经序列分析显示,其编码的氨基酸序列与金鱼[Carassius auratus(goldfish)]、鲤(Cyprinus carpio)、鳙(Aristichthysnobilis)、斑马鱼(Danio rerio)、虹鳟(Salmo gaidnerii)、鲑(Salmo salar)、鳗鲡(Anguilla anguilla)具有较高的相似性,其相似性分别为91.3%、87.6%、83.2%、77%、58.6%、56.1%、43.55%,同源性较高,这说明TSHβ亚基在长期的进化中具有较高保守性。而且在比较中还发现:异育银鲫和其它7种鱼类相比在5’端多11个氨基酸序列,并且都含有定位保守的12个半胱氨酸残基和一个N糖基化位点。     

饥饿对白斑狗鱼耗氧率、代谢率及主要生化指标的影响

在不同温度下[(3±0.5) ℃,(8±0.5) ℃和(13±0.5) ℃)]对白斑狗鱼的呼吸耗氧率、代谢率及主要生化指标(肝糖元,乳酸,酸、碱性磷酸酶)进行120 h的饥饿试验.试验结果表明:在水温为(3±0.5) ℃、(8±0.5) ℃和(13±0.5) ℃下,白斑狗鱼的耗氧率与饥饿时间呈负相关,分别由(0.005 1±0.001 7) mg/(g·h)、(0.016±0.001 9)mg/(g·h)和(0.025±0.005 4) mg/(g·h)下降至(0.001 1±0.000 35)mg/(g·h)、(0.009 8±0.001 2) mg/(g·h)和(0.015±0.003 2) mg/(g·h).代谢率随着饥饿程度的加深而降低,分别由(5.23±0.34) mg O2/(kg·h)、(16.05±23.89) mg O2/(kg·h)和(25.39±37.28) mg O2/(kg·h)下降至(1.08±0.052) mg O2/(kg·h)、(7.48±14.77) mg O2/(kg·h)和(14.99±21.94) mg O2/(kg·h).肝糖元随着饥饿程度的加深而减少,分别由(67.70±6.66) mg/g、(59.69±5.75) mg/g和(41.83±3.72) mg/g减少至(54.14±5.12) mg/g、(38.77±3.38) mg/g和(19.18±1.14) mg/g;肝组织中乳酸含量随饥饿程度的加深而增加,分别从(0.36±0.004) 1 mmol/g prot、(0.25±0.002 9) mmol/g prot和(0.15±0.003 4) mmol/g prot增加至(3.16±0.089) mmol/g prot、(0.87±0.008 4) mmol/g prot和(0.48±0.028) mmol/g prot;随着饥饿时间的推移,肝胰脏中的酸、碱性磷酸酶活力也出现不同程度的增强,在(3±0.5) ℃下,分别增加了217.36 U/g prot和157.85 U/g prot;在(8±0.5) ℃下,分别增加了27.67 U/g prot和34.43 U/g prot;在(13±0.5) ℃下,分别增加了98.62 U/g prot和10.95 U/g prot.     

两种“吉富”罗非鱼耗氧率、窒息点的初步研究

[目的]为两种“吉富”罗非鱼的养殖结构优化及其运输提供理论依据。[方法]在恒温20±0．5℃条件下，用呼吸室法对“JNM”和“GTC”两种吉富罗非鱼的呼吸耗氧率、窒息点进行了试验。[结果]①平均体重为381．90±19．25g的“JNM”昼夜平均耗氧率为O．069±0．022mg/（g·h）；平均体重为302．00±7．76g的“GTC”昼夜平均耗氧率为0．033±0．017mg/（g·h）。②两种试验鱼的耗氧率与饥饿时间呈负相关，代谢率随着饥饿程度的加深而降低。③“JNM”和“GTC”的窒息点分别是：1．54±0．17、1．70±0．23mg/L。[结论]当温度在20±0．5℃时，“GTC”与“TNM”相比，需氧量大．窒息点低。