两株益生菌的部分生物学特性研究

为了探明2株植物源芽孢杆菌K,F（暂定名）的抗逆性与抑菌特性,对其进行了耐酸,耐胆盐与抑菌试验。用pH 1.5、2.0、3.5的人工胃液模拟胃液环境;用0.3%胆盐及0.1%CuSO4.5H2O的人工肠液模拟肠液环境。分别测定K,F的培养上清与菌液抑制大肠杆菌的能力。采用传统的表型鉴定及生理生化鉴定方法及16SrDNA方法对K,F进行鉴定。结果：经过pH 1.5、2.0、3.5的胃液处理,K,F均有较高的存活率,随着pH的上升,存活率有上升的趋势;耐胆盐试验,处理组细菌存活率有所下降,但均高于90%;K的培养上清液和菌液对大肠杆菌的抑菌环直径为14.33,18.57 mm,F的为14.11,15.68 mm。所以人工胃液,人工肠液对K,F的活菌数几乎不产生影响。K,F的培养上清和菌液对大肠杆菌有很好的抑制作用。综合鉴定结果K为枯草芽孢杆菌,F为地衣芽孢杆菌。     

汉逊德巴利酵母菌在胃酸、肠胆盐环境的耐受性研究

为探究汉逊德巴利酵母菌在酸性、胆盐环境及人工胃肠液下的存活情况,采用活菌计数法,分别在p H值1.0、1.5、2.0、2.5,胆盐浓度0.2%、0.3%、0.4%的PDA液体培养基,人工胃液作用0、2、4 h,以及人工肠液作用0、2、4、6、8、10 h环境下,测定汉逊德巴利酵母菌的活菌数。结果表明:耐酸试验中,该菌株在p H值1.0没有存活,p H值1.5、2.0、2.5活菌数与对照组比较下降明显(P0.01);耐胆盐试验中,该菌株在0.4%的高胆盐浓度下仍然存活,活菌数随胆盐浓度增加而降低;人工胃液试验中,与0 h比较,2 h、4 h活菌数显著增加(P0.01);人工肠液试验中,随着处理时间的延长,该菌株活菌数先升后降,但都比0 h活菌数增加。可见,汉逊德巴利酵母菌能够耐受较高的酸性环境和较高的胆盐环境,并在人工胃肠液环境下具有较高的存活能力,符合研制新型微生态制剂的条件。     

一株猪源发酵乳杆菌的体外特性研究

采用全自动曲线分析仪测定了猪源发酵乳杆菌X6的不同接种量、不同初始pH的生长曲线;采用琼脂平板扩散法检测该菌的抑菌能力,探讨该菌在不同高温下的存活时间;在体外模拟了该菌对人工胃液和人工肠液的耐受性.结果表明:在接种量1%、初始pH 5.3的条件下,该菌的生长情况最佳;该菌能够抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的生长;该菌在50、55、60℃处理2min时,存活率分别为99.19%、91.94%、80.65%;该菌在人工肠液和pH 3.0的人工胃液中存在4h后活性几乎不受影响,活菌数在109 CFU/mL以上,说明该菌具备作为益生性饲料添加剂的基本条件.     

1株鸡肠源益生芽孢杆菌的分离·鉴定及其耐受特性研究

从人工饲养的健康仔鸡的盲肠和大肠中分离出1株对大肠杆菌有较强拮抗作用的芽孢杆菌菌株Y-1,对该菌株进行了菌落形态、培养特征观察和生理生化特性鉴定及16S rDNA序列的分析。以16S rDNA序列为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,其中与11个芽孢杆菌属的菌株的16S rDNA序列的同源性为94.63%~99.35%,Y-1被鉴定为侧孢短芽孢杆菌。模拟体内高胆盐环境(胆盐含量0.3%),监测菌株的耐受能力,然后测定在人工胃液、肠液环境中作用不同时间后的存活菌数。试验结果表明,Y-1在胆酸盐、人工胃液、人工肠液中表现出了很强的耐受能力。     

1株鸡肠源益生芽孢杆菌的分离·鉴定及其耐受特性研究

从人工饲养的健康仔鸡的盲肠和大肠中分离出1株对大肠杆菌有较强拮抗作用的芽孢杆菌菌株Y-1,对该菌株进行了菌落形态、培养特征观察和生理生化特性鉴定及16SrDNA序列的分析。以16SrDNA序列为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,其中与11个芽孢杆菌属的菌株的16SrDNA序列的同源性为94．63％～99．35％,Y-1被鉴定为侧孢短芽孢杆菌。模拟体内高胆盐环境（胆盐含量0．3％）,监测菌株的耐受能力,然后测定在人工胃液、肠液环境中作用不同时间后的存活菌数。试验结果表明,Y-1在胆酸盐、人工胃液、人工肠液中表现出了很强的耐受能力。     

一株具有抑菌活性的凝结芽孢杆菌的筛选、鉴定及其抗逆性研究

研究采用MRS培养基平板钙溶圈法结合琼脂扩散牛津杯法进行抑菌性能评估,获得一株具有产酸和抑菌活性的芽孢杆菌菌株CA04121。该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均具有明显抑制作用,在模拟胃液中处理180 min存活率达到72.7%,在0.6%的胆盐溶液中处理6 h存活率达到54.5%。通过形态特征、生理生化特征以及gyrB基因进化分析结果,鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans),该菌种保藏于中国普通微生物菌种保藏中心,保藏编号为CGMCC NO.16244。     

猪源枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其特性研究

为筛选高生物活性的益生菌菌株,通过热处理从健康猪肠道内容物、粪便、土壤等来源筛选具有较高抗逆性的菌株,综合形态特征、生理生化特性及16S r DNA序列分析进行鉴定;通过耐人工胃液、耐人工肠液、耐胆盐、耐高温、产酶试验、药敏试验、抑菌试验来研究菌株的特性。综合鉴定菌株ZZS16-3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其在p H为2.0的人工胃液中,存活率可达到65.8%,在胆盐浓度为0.3%时存活率为51.2%,在100℃处理3 min后其存活率达到11.2%,可产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等,对于绝大多数的药物是敏感的,对金黄色葡萄球菌则有明显的抑菌效果。枯草芽孢杆菌ZZS16-3具有较强的抗逆性和潜在的益生性能,为研制微生态制剂提供了优良的菌种参考。     

植物蛋白发酵乳酸菌对模拟胃肠道环境的耐受性研究

通过模拟人体胃肠道环境,研究植物蛋白发酵乳酸菌植物乳杆菌FJAT-7926(Lactobacillus plantarum FJAT-7926)和干酪乳杆菌FJAT-7928(Lactobacillus casei FJAT-7928)在不同pH值人工胃液和不同胆盐浓度人工肠液下的存活情况。结果表明,pH3.0的人工胃液对2株菌的存活影响较小。经4h处理后,2株菌的存活数都在1×108cfu·mL-1以上,存活率分别为56.06%和55.65%。pH2.0的人工胃液对2株菌的影响较大,经2h处理后,2株菌的存活数降至1×105cfu·mL-1,4h后,2株菌存活数分别为3.67×102 cfu·mL-1和2.30×103cfu·mL-1。2株菌对不同胆盐浓度的人工肠液均有较好的耐受性。0.1%胆盐浓度的人工肠液对2株菌的存活基本没影响。随着胆盐浓度的升高,2株菌的存活率有所下降,但都与初始菌数维持在同一数量级上。在中高浓度胆盐(0.3%和0.5%)的人工肠液中处理4h后,植物乳杆菌FJAT-7926的存活率在70%以上,干酪乳杆菌FJAT-7928的存活率在40%以上。可见这2株菌均有较强的胃肠道环境耐受力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种耐受肠胃环境的要求,在植物乳酸菌发酵食品方面具有广阔的应用前景。     

MS-D活性糖对肠道菌生长及部分生物学特性影响的初步探究

为研究MS-D活性糖对肠道细菌生长及其生物活性的影响,选择大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和嗜酸乳杆菌4种肠道菌的标准菌株作为受试菌种,进行MS-D对细菌的生长、酸碱耐受性、温度耐受性及耐盐性的影响等试验。结果表明:MS-D对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、嗜酸乳杆菌和金黄色葡萄球菌有增菌作用,最适作用量分别为5%、2%、0.1%和0.4%;MS-D对4种细菌的耐酸碱能力均有一定的保护作用;提高了对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的温度耐受能力;对嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的胆盐耐受能力有一定的保护作用。     

藜麦种子总黄酮的提取及体外抑菌作用

采用96孔板微量法和牛津杯法研究藜麦种子总黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌的抑制作用。结果表明,藜麦种子总黄酮对供试菌株的抑制效果由大到小顺序为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌,对金黄色葡萄球菌基本没有抑菌作用。最低抑菌浓度值分别为:大肠杆菌32 mg/m L、枯草芽孢杆菌64 mg/m L、白色念珠菌128 mg/m L、铜绿假单胞菌256 mg/m L、金黄色葡萄球菌512 mg/m L。说明藜麦种子总黄酮对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌有抑菌作用,对金黄色葡萄球菌不敏感。     

芽孢杆菌益生菌株的筛选

选用从健康动物肠道中分离的芽孢杆菌为出发菌株,按照益生菌的特定要求,模拟体内胆盐环境(胆盐含量0.3%w/v),来监测菌株的耐受能力;测定在人工胃液、肠液环境中作用不同时间后的存活率,初步筛选能够作为益生菌的芽孢杆菌。试验结果表明,有3株芽孢杆菌分别为:B5329、B22、B544,在胆酸盐、人工胃液、人工肠液中表现出了很强的耐受能力,其中B544还具有很强的产淀粉酶、蛋白酶和木聚糖酶的能力。     

人体消化道高抗逆性双歧杆菌的筛选

双歧杆菌是人体肠道的一种微生态调节剂,对人体消化道环境的抗逆性是其发挥抗肠道感染作用的关键。分别利用激光共聚焦显微镜,测定五株分别来源于药物和婴儿粪便的双歧杆菌对结肠癌细胞Caeo-2的黏附性,再通过耐酸和耐胆汁盐初筛,模拟胃液和模拟肠液复筛,筛选出消化道高抗逆性双歧杆菌L-1,其对Caco-2的黏附数为166±21黏附菌数／细胞;在pH3．0模拟胃液中作用2h后的存活率为72％;在胆汁盐浓度为0．2％的模拟肠液中24h,其存活率为14％。结果表明,五株双歧杆菌肠道抗逆性有所不同,L-1菌株消化道抗逆性能力最好,可用做微生态制剂菌株。     

乳酸菌益生特性及降胆固醇机理的研究

本试验通过对具有良好益生特性乳酸菌的筛选,研究其降胆固醇的机理。我们将分离自内蒙古和新疆地区牧民家庭自制的10份酸马奶中的16株乳酸菌经耐酸、耐胆盐实验,筛选出1株益生特性较好的乳酸菌,为E2301。同时通过胆固醇吸收动力曲线和超声波抗性实验对E2301进行降胆固醇机理研究。结果表明E2301耐受pH3.0人工胃液和0.3%的高胆盐环境的能力分别为57.12%和86.93%。且E2301菌体破碎液中胆固醇含量高达49.96%,说明胆固醇被菌体细胞吸收进入了自身体内。     

In vitro系统评价胃肠液pH及土液比对铅、镉、砷生物可给性的影响

土壤中铅、镉、砷可能直接通过人的口部无意摄入进入人体,危害人体健康,而各研究者评价土壤重金属对人体健康风险所用的实验参数有别,结果缺乏可比性,因此探讨不同评价方法对结果的影响具有重要意义。以污染的棕钙土和红壤为研究对象,应用in vitro方法研究分析胃肠阶段不同土液比、pH以及土壤性质对铅、镉、砷生物可给性的影响。结果表明,重金属的生物可给性与in vitro系统中的pH、土液比、土壤类型以及重金属本身有关。在胃阶段,随着土液比升高,3种重金属生物可给性趋于降低;不同土液比处理下,红壤中铅生物可给性大于棕钙土,而砷则相反,红壤和棕钙土中镉的生物可给性差异不明显。在肠阶段,随着土液比升高,3种重金属生物可给性也趋于降低(除了红壤镉以外),土液比1∶100的3种重金属生物可给性均显著大于1∶10。不同pH处理下,铅的生物可给性随pH的升高逐渐降低,而pH对镉和砷的生物可给性的影响与土液比有关。因此,肠胃实际吸收的重金属可能与摄入水量、食物成分与组成以及食物摄入引起的肠液pH变化有关。     

日粮中添加微生态制剂对瘦肉型繁殖母猪生产性能的影响

为探讨微生态制剂对母猪繁殖性能和仔猪生长性能的影响,选择同期配种的长×大二元杂种健康母猪20头,随机分为对照组和试验组2组(每组10头),对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮基础上添加酵母菌制剂0.1%(活菌数1.7×106cfu/g)、乳酸菌制剂0.1%(活菌数2.0×106cfu/g)和枯草芽孢杆菌制剂0.1%(活菌数1.1×106cfu/g),进行1个繁殖周期(怀孕到仔猪断奶)135d的对比饲养试验。结果表明:试验组窝均产仔数11.10头,窝均产活仔数10.50头,分别比对照提高12.61%(P>0.05)和10.48%(P<0.05);仔猪初生窝重15.523kg,平均个体重1.511kg,分别比对照提高17.48%(P>0.05)和5.76%(P<0.05);仔猪平均断奶窝重49.169kg,平均断奶个体重5.096kg,分别比对照提高32.89%(P>0.05)和16.90%(P>0.05)。试验组仔猪死胎率2.8571%、弱仔率6.306 3%、断奶死亡率4.610%,分别比对照降低0.334 4%(P>0.05)、0.910 2%(P>0.05)和3.35%(P>0.05)。结论:在日粮中添加微生态制剂可提高母猪的繁殖能力与仔猪的生长力,降低仔猪的死亡率。     

抗菌抗病毒杂合肽M-L发酵液的抑菌谱及生物稳定性研究

为测定实验室前期构建的可分泌Melittin(1-13)-LL(17-30)(M-L)杂合肽的毕赤酵母工程菌发酵上清液的抑菌谱以及生物稳定性。采用牛津杯琼脂扩散法测定其对16株指示菌的抑菌效果,以及经过模拟胃肠液和不同温度处理后的稳定性。结果表明,上清液对多种致病菌具有良好的抑菌效果,且抑菌直径半数在20mm以上,而对有益菌屎肠球菌无抑菌作用;经模拟胃液处理后,活性明显下降;但经过模拟肠液以及不同温度梯度处理后抑菌活性无明显变化。因此,杂合肽M-L发酵液抑菌谱广,温度耐受性好,但在胃液中稳定性较差。     

耐消化道逆环境双歧杆菌优良菌株的筛选

为筛选耐消化道逆环境的优良双歧杆菌菌株，以来源于母乳婴儿粪便、未断奶仔猪粪便、市售双歧杆菌制剂和本实验室保存的双歧杆菌为出发菌株，采用改良MRS液体培养基，模拟人体胃肠道逆环境，对其耐消化道逆环境特性进行了研究。通过耐酸（pH3的PBS）、耐胆汁酸盐（质量浓度1～20mg／mL）试验对初筛得到的14株菌株进行复筛，得6株菌株，它们在pH3条件下作用120min后存活率均〉93％，活菌数均〉100cfu／mL；在含5mg／mL牛胆酸钠的改良MRS液体培养基中作用24h后活菌数仍〉10^6cfu／mL，除J12和B03外，其他4株在含20mg／mL牛胆酸钠的改良MRS液体培养基中作用24h仍有活菌被检出（活菌数〉100cfu／mL）。在此基础上，采用胃蛋白酶和胰蛋白酶模拟胃肠液得3株耐消化道酶菌株A03、A04和L-1，在含5mg／mL胃蛋白酶的PBS培养基（pH3）作用120min后其活菌数均高达约100cfu／mL，而在含10mg／mL胰蛋白酶的改良MRS液体培养基作用24h后，其活菌数均高达约10^9cfu／mL；这2种消化道酶对其几乎没有抑制作用。研究结果表明，双歧杆菌A03、A04和L-1菌株耐受消化道逆环境的能力最好，可用做微生态制剂菌株。