双歧杆菌胡萝卜复合汁增菌培养基的优化筛选

选择胡萝卜为主要原料,以两歧双歧杆菌(Bbm)和长双歧杆菌(Blm)为试验菌株,研究了胡萝卜汁基础培养基中添加单一营养因子对Bbm菌细胞生长量的影响,进一步利用正交实验筛选出Bbm菌胡萝卜复合汁增菌培养基;利用优选的胡萝卜复合汁增菌培养基对Blm菌进行验证性增菌试验。结果表明:大豆蛋白胨、牛肉浸膏、酵母膏、玉米浆可显著促进双歧杆菌Bbm的细胞增殖(P<0.01)而磷酸氢二钾既能促进Bbm生长,又有缓冲培养基pH值的作用;利用L934筛选出Bbm的胡萝卜复合汁增菌培养基的最佳配比为:在胡萝卜汁中添加0.3%大豆蛋白胨,0.6%牛肉浸膏,0.5%酵母膏,0.4%玉米浆,0.2%磷酸氢二钾,将此培养基经37℃培养12 h,Bbm活菌数4.75×109cfu/mL,Blm活菌数4.82×109cfu/mL。     

嗜酸乳杆菌促生长物质及增菌培养基优化研究

研究了在MRS培养基中添加不同营养物质对嗜酸乳杆菌生长的影响,进一步采用正交试验优化筛选了嗜酸乳杆菌的增殖培养基。结果表明,在MRS培养基中添加菊粉、乳清粉、酪蛋白水解物、胡萝卜汁可显著促进试验菌株的细胞生长,而乳糖、西红柿汁、啤酒的添加相对而言对菌的增殖影响不大;利用L9(34)正交试验筛选出增殖因子的最佳配比为:菊粉0.5%,乳清粉0.5%,酪蛋白水解物0.5%,胡萝卜汁5%。最后使用优化出的增菌培养基测定生长曲线,同时测定pH和滴定酸度的变化,确定增菌培养终止时间为10 h,此时活菌数可达2.59×1010cfu/mL,较对照MRS培养基的活菌数提高了22.72倍。     

一株婴儿双歧杆菌生长及存活特性的研究

经对筛选、驯化的一株婴儿双歧杆菌（ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｆａｎｔｉｓＧＲＸ）的生长和存活特性的研究表明，该菌在１２％ＮＦＳ的牛乳培养基中，添加１％的葡萄糖和３％的浓缩黄浆水，生长良好，活菌数量为３．２×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ；该菌在ＢＭ液体培养基上，生长状况与厌氧条件相当，且能耐受１．５％的牛胆酸钠。在ｐＨ２的ＭＲＳ液体培养基上，经３７℃放置１ｈ，该菌活菌数量基本保持不变；同时该菌对光不敏感。体外胃肠壁粘附试验表明，该菌具有较强的粘附能力。该菌发酵乳在１周室温贮放过程中（平均气温２５℃）。活菌数量仍能高于１０８ｃｆｕ／ｍｌ。     

产细菌素双歧杆菌L-SN对酸奶后酸化及品质的影响

选择产细菌素双歧杆菌L-SN菌株与保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌混合发酵剂配伍共同发酵生产酸奶,通过测定4℃贮藏条件下酸奶的pH、可滴定酸度、活菌数、持水力和黏度等指标的变化探讨产细菌素双歧杆菌对酸奶后酸化效果及品质的影响.结果显示:双歧杆菌L-SN的加入能有效抑制酸奶的后酸化,以添加水平为(2～5)×106 cfu/mL为最佳,可在20 d贮藏期内维持酸度为100～110°T、pH 4.1～4.2、活菌数≥106 cfu/mL,并能显著提高酸奶的持水力和黏度,赋予酸奶良好的色泽、口感和组织状态.     

人体消化道高抗逆性双歧杆菌的筛选

双歧杆菌是人体肠道的一种微生态调节剂,对人体消化道环境的抗逆性是其发挥抗肠道感染作用的关键。分别利用激光共聚焦显微镜,测定五株分别来源于药物和婴儿粪便的双歧杆菌对结肠癌细胞Caeo-2的黏附性,再通过耐酸和耐胆汁盐初筛,模拟胃液和模拟肠液复筛,筛选出消化道高抗逆性双歧杆菌L-1,其对Caco-2的黏附数为166±21黏附菌数／细胞;在pH3．0模拟胃液中作用2h后的存活率为72％;在胆汁盐浓度为0．2％的模拟肠液中24h,其存活率为14％。结果表明,五株双歧杆菌肠道抗逆性有所不同,L-1菌株消化道抗逆性能力最好,可用做微生态制剂菌株。     

益生菌SFU—9发酵工艺的确定

益生菌具有促进动物生长，提高机体免疫能力等生理功能，常用作微生态饲料添加剂。菌体SFU－9是一株蜡状芽杆菌，该菌株在不利环境下能够以孢子形式存在，具有耐高温，耐酸碱和耐挤压等优点，较乳酸菌，酵母菌等益生菌更能保持活菌状态，适合饲料加工业的需要。该研究以菌株SFU－9进行实验，研究发酵温度，接种量，培养基初始pH值，溶解氧等因素对菌株生长的影响，确定出最佳培养条件为：培养基初始pH值为6．0－6．5，接种量5％（相对摇瓶装液量），培养温度30－32℃，装液量28-33mL/250mL。发醇液中的活菌数可达10^11cfu/mL。在此基础上，采用单因子和正交实验相结合的方法，确定出最佳发酵培养基组成为：玉米淀粉2．0％，啤酒酵母1．5％，NaH2PO40.2%,Na2HPO40.2%,玉米浆2．0％。是以最佳培养基配方给菌体提供营养，在最佳培养条件下培养，可以使发酵液中的活菌数高达10^12cfu/mL.     

双歧杆菌发酵乳饮料的研究

对含双歧杆菌碳酸发酵乳饮料生产工艺的研究表明,采用嗜热链球菌和双歧杆菌单菌培养制备生产发酵剂,混菌发酵工艺是可行的。发酵乳中的双歧杆菌活菌数达到10~9cfu·mL~(-1)。最佳发酵条件为:双歧杆菌:嗜热链球菌=2:1,接种量6%,生长促进剂0.1%。发酵终点为 pH≤4.7,OD≥4.3,发酵时间为3～4 h。产品在4～5℃贮藏一周后,双歧杆菌活菌数在10~5 cfu·mL~(-1)。     

益生菌SFU—9发酵工艺的确定

益生菌具有促进动物生长，提高机体免疫能力等生理功能，常用作微生态饲料添加剂。菌体SFU－9是一株蜡状芽杆菌，该菌株在不利环境下能够以孢子形式存在，具有耐高温，耐酸碱和耐挤压等优点，较乳酸菌，酵母菌等益生菌更能保持活菌状态，适合饲料加工业的需要。该研究以菌株SFU－9进行实验，研究发酵温度，接种量，培养基初始pH值，溶解氧等因素对菌株生长的影响，确定出最佳培养条件为：培养基初始pH值为6．0－6．5，接种量5％（相对摇瓶装液量），培养温度30－32℃，装液量28-33mL/250mL。发醇液中的活菌数可达10^11cfu/mL。在此基础上，采用单因子和正交实验相结合的方法，确定出最佳发酵培养基组成为：玉米淀粉2．0％，啤酒酵母1．5％，NaH2PO40.2%,Na2HPO40.2%,玉米浆2．0％。是以最佳培养基配方给菌体提供营养，在最佳培养条件下培养，可以使发酵液中的活菌数高达10^12cfu/mL.     

植物乳杆菌LPL10的体外益生特性研究

[目的]在筛选到一株食品源植物乳杆菌LPL10的基础上,通过对其耐酸性、耐胆盐、抑菌能力和产酸能力进行研究,确定其益生特性。[方法]采用平板活菌计数法测定LPL10的耐酸、耐胆盐性能,通过抑菌圈法评价菌株的抑菌能力,高效液相色谱法测定LPL10发酵产有机酸能力。[结果]植物乳杆菌LPL10具有良好的低酸耐受能力,在pH 3.5条件下培养24 h活菌数为1.2×108 cfu/mL,存活率为148%;LPL10受0.1%胆盐抑制影响较小,培养24 h后活菌数为3.60×108 cfu/mL,存活率为356%;植物乳杆菌LPL10对指示菌金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和绿脓杆菌均有良好的抑制作用;LPL10发酵上清液中产的主要有机酸为乳酸和乙酸,相对含量分别为20.33、25.26 mg/L。[结论]体外益生特性研究表明,植物乳杆菌LPL10可以作为潜在的益生性菌株。     

青春双歧杆菌工业化培养基以及生长条件的筛选

以廉价的商业化产品作为原材料,以提高发酵液中的青春双歧杆菌活菌数为目的,通过单因素试验筛选并最终确定能够用于规模化生产青春双歧杆菌的廉价工业化培养基成分,即:脱脂乳8%(W/V)、双歧因子A1%(W/V)、双歧因子B1%(W/V)。结果表明,在此培养基基础上,筛选出了青春双歧杆菌的最佳生长条件:最佳接种量为1%(V/V)、最佳培养温度为37℃。在此优化的生长条件下,测定青春双歧杆菌的生长曲线和pH值变化,选取在厌氧条件下培养时间9h为最佳培养时间,此时青春双歧杆菌活菌数最高可达1.16×109cfu·mL-1。     

具有潜在抑制肠道致病菌能力的乳酸菌的筛选

[目的]从实验室保藏的乳酸菌中筛选出耐酸耐胆盐能力较强的乳酸菌,并研究其对肠上皮细胞的黏附能力及对肠道病原菌的抑制能力。[方法]通过模拟人工胃肠液及体外与IEC-6细胞共培养来分别研究乳酸菌的耐酸耐胆盐能力及对细胞的黏附能力,并利用单层琼脂平板扩散法测定其抑菌效果。[结果]试验的27株乳酸菌中,10株乳酸菌在p H 3.0的人工模拟胃液中培养3 h的存活率均大于44.00%,在p H 8.0的人工模拟肠液中培养4 h的存活率均大于51.56%,在含0.30%胆盐的培养基中培养24 h的存活率均大20.00%;其中菌株C13、A03、A17及A90对IEC-6细胞的黏附个数均大于8个/cell;菌株C13、A03对艰难梭菌、沙门氏菌和大肠杆菌的抑制能力较强,抑菌圈直径均大于22 mm。经16S rRNA测序将C13和A03分别鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosu)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。[结论]L.rhamnosu C13、L.plantarum A03的耐酸耐胆盐能力及对上皮细胞的黏附能力较强,对肠道病原菌有较好的抑制作用,可作为良好的抑制肠道病原菌的候选益生菌株。     

1株鸡肠源益生芽孢杆菌的分离·鉴定及其耐受特性研究

从人工饲养的健康仔鸡的盲肠和大肠中分离出1株对大肠杆菌有较强拮抗作用的芽孢杆菌菌株Y-1,对该菌株进行了菌落形态、培养特征观察和生理生化特性鉴定及16S rDNA序列的分析。以16S rDNA序列为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,其中与11个芽孢杆菌属的菌株的16S rDNA序列的同源性为94.63%~99.35%,Y-1被鉴定为侧孢短芽孢杆菌。模拟体内高胆盐环境(胆盐含量0.3%),监测菌株的耐受能力,然后测定在人工胃液、肠液环境中作用不同时间后的存活菌数。试验结果表明,Y-1在胆酸盐、人工胃液、人工肠液中表现出了很强的耐受能力。     

国兰“绿蕙红舌”的组织培养技术

采用不同培养基对国兰"绿蕙红舌"的种子进行组织培养试验研究,综合分析不同培养基配方在国兰"绿蕙红舌"组织培养过程中对种子萌发与原球茎诱导、原球茎继代增值、原球茎分化及生根壮苗的影响。结果表明,种子萌发与原球茎诱导最适宜培养基为MS+BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+水解酪蛋白100 mg·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎继代增值最适培养基为KC+BA0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+活性碳2g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎分化最适培养基为KC+BA1.0 mg·L-1L+NAA 0.2mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;生根壮苗最适培养基为1/2 MS+NAA 0.5mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1。以上培养基pH均为5.1～5.4。     

含婴儿双歧杆菌的铜仁花生酸奶的加工工艺研究

[目的]结合具有保健功能的婴儿双歧杆菌（Bifidobacterium infantis）与风味品质优良的铜仁花生,开发一种兼具营养与保健功能的特色搅拌型酸奶。[方法]采用单因素试验与正交试验相结合的方法,优化含婴儿双歧杆菌的铜仁花生酸奶的加工工艺。[结果]110℃下烘烤30 min去皮,采用质量分数0.5%的NaHCO3浸泡花生仁,制得的花生汁色泽洁白,花生味芳香,稳定性好。当花生汁与鲜牛奶的比例为3∶2,蔗糖添加量为9%,复合稳定剂添加量为0.14%,婴儿双歧杆菌∶保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）∶嗜热链球菌（Streptococci thermopiles）为2∶1∶1的混合发酵剂接种量为4.0%时,所得酸奶香味浓郁,口感细腻,且特征双歧杆菌活菌数可达到5.5×108 cfu/ml。[结论]该研究制得的酸奶兼备了花生、酸奶与双歧杆菌的营养和保健功能,对地方特色农产品的开发利用具有积极意义。     

芽孢杆菌益生菌株的筛选

选用从健康动物肠道中分离的芽孢杆菌为出发菌株,按照益生菌的特定要求,模拟体内胆盐环境(胆盐含量0.3%w/v),来监测菌株的耐受能力;测定在人工胃液、肠液环境中作用不同时间后的存活率,初步筛选能够作为益生菌的芽孢杆菌。试验结果表明,有3株芽孢杆菌分别为:B5329、B22、B544,在胆酸盐、人工胃液、人工肠液中表现出了很强的耐受能力,其中B544还具有很强的产淀粉酶、蛋白酶和木聚糖酶的能力。     

粪肠球菌F71的增殖培养基优化研究

为达到增殖菌体的目的,对粪肠球菌F71进行了培养基优化正交试验。结果表明,最佳培养基的组成为:胰蛋白胨10 g/L,酵母粉10 g/L,葡萄糖10 g/L,无水氯化钙0.04 g/L,七水合硫酸镁0.019 2 g/L,磷酸氢二钾0.04 g/L,磷酸二氢钾0.04 g/L,磷酸氢钠0.4 g/L,氯化钠0.08 g/L,土豆汁50 g/L,碳酸钙1 g/L,乙酸钠10 g/L,碳酸铵2 g/L,乙酸铵1 g/L,半胱氨酸盐酸盐0.5 g/L,pH值为9,最适培养温度为35℃。用此培养基进行增殖,F71的最高活菌数达到2.78×108 cfu/mL,比基础培养基提高了54.6%。     

2株猪源益生性肠球菌对酸和胆盐及热的耐受性研究

为了筛选动物肠道中的有益优势菌,研究了2株分离自猪肠道的益生性屎肠球菌(E1,E7)的耐受特性。本试验设pH 2,2.5,3,4的4个处理组,以pH 7为对照组;设胆盐浓度分别为0.2%,0.4%,0.6%,0.8%,1%的5个处理组,以不含胆盐的培养液为对照组;温度设50,80,90℃,以37℃为对照,分别作用5,10,15,20 min,经该3种方法处理后各取100μL培养液用细菌稀释计数法测定活菌数。结果表明:E1,E7都有较强的耐酸能力,在pH 2时,作用2 h后仍能检测到活菌。胆盐浓度达到0.4%时,E1,E7仍有一定的耐受能力,随胆盐浓度升高至0.6%时,活菌数由108.2CFU/mL降到102.5CFU/mL。2菌株在不同温度下经不同作用时间处理后呈不同的生长态势。     

西北酸菜直投式发酵剂菌株高密度培养的研究

[目的]制备出适合西北酸菜发酵的复合直投式发酵剂。[方法]前期筛选出3个菌株:产酸速率快的东方醋酸杆菌AC5,降解亚硝酸盐高的干酪乳杆菌L5,醇香味适中的东方伊萨酵母Y7。对这3种菌分别进行高密度培养研究,确定菌体增殖的最佳培养基及培养条件。[结果]确定增殖培养基的成分是马铃薯汁、番茄汁、葡萄糖、蛋白胨和磷酸盐。通过正交试验和培养条件优化得出,AC5的最佳培养基为马铃薯汁含量40 g/L、番茄汁含量80 g/L、葡萄糖含量20 g/L、胰蛋白胨含量10 g/L、磷酸盐含量10 g/L,在pH 5.5、30℃、150r/min下培养24 h活菌数达到3.42×108cfu/ml;L5的最佳培养基为马铃薯汁含量40 g/L、番茄汁含量60 g/L、葡萄糖含量5 g/L、胰蛋白胨含量15 g/L、磷酸盐含量10 g/L,在pH 6.5、30℃、120 r/min下培养24 h活菌数可达到1.93×109cfu/ml;Y7的最佳培养基为马铃薯汁含量60 g/L、番茄汁含量60 g/L、葡萄糖含量20 g/L、胰蛋白胨含量20 g/L、磷酸盐含量10 g/L,在pH 6.0、35℃、150 r/min下培养24h活菌数可达到2.74×108cfu/ml。[结论]该研究使单位体积的活菌数有很大提高,为制备西北酸菜直投式发酵剂提供了依据。     

饲喂益生菌Lactobacillus casei Zhang对高脂日粮大鼠肝脏脂质代谢的作用

【目的】研究不同剂量益生菌L. casei Zhang（2.0×1010 CFU/d、2.0×109 CFU/d和2.0×108 CFU/d）及其发酵乳饮料（2.0×108 CFU/mL/d）对高胆固醇血症大鼠肝脏脂质的治疗作用。【方法】采用高脂饲料诱导高脂血症,采用相应试剂盒测定肝脏总胆固醇水平（TC）和甘油三酯（TG）水平、粪便总胆汁酸水平与胆固醇水平以及血清载脂蛋白ApoAⅠ与ApoB水平。【结果】益生菌各剂量组和发酵饮料组与高脂模型组相比,肝脏总胆固醇水平（TC）和甘油三酯（TG）水平均显著降低(P＜0.05 或P＜0.01)。各试验组均可显著增加高血脂大鼠粪便总胆汁酸水平和血清载脂蛋白ApoAⅠ水平以及显著降低血清载脂蛋白ApoB水平(P＜0.01),但对粪便胆固醇水平影响不明显(P＞0.05)。【结论】益生菌L. casei Zhang主要通过增加总胆汁酸的排出和调节载脂蛋白水平来改善高血脂大鼠肝脏脂质水平。