HPLC法测定贯叶金丝桃中金丝桃素的含量

[目的]用HPLC法测定贯叶金丝桃（Hypericum perforalurnL.）提取液中金丝桃素含量,以期为贯叶金丝桃的开发利用提供理论依据。[方法]HPLC条件为：岛津VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm,0.5μm）色谱柱;流动相为甲醇-乙酸乙酯-磷酸盐缓冲溶液（V∶V=60∶20∶20,pH=2.0）;流速为1.0 ml/min;柱温25℃;检测波长590 nm;进样量10μl。[结果]贯叶金丝桃提取液在金丝桃素含量为2.56～19.20μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,测得金丝桃素的含量为0.79 mg/g,提取率0.079%。[结论]该方法精密度良好,重现性好,稳定性好,适合贯叶金丝桃中金丝桃素含量的测定。     

矮壮素对贯叶连翘生长和金丝桃素含量的影响

[目的]研究矮壮素对贯叶连翘生长和金丝桃素含量的影响。[方法]对贯叶连翘喷施不同浓度的矮壮素,测定其生长形态、叶绿素荧光特性和金丝桃素含量金丝桃素含量的动态变化。[结果]尽管矮壮素对贯叶连翘的生长发育具有抑制效应,但是其对提高金丝桃素含量有较为明显的促进作用。适度的矮壮素处理对贯叶连翘光合荧光生理有明显的调控作用。[结论]在贯叶连翘的规模化生产和栽培中,恰当浓度的植物激素处理能提高贯叶连翘的产量和药用成分含量。该研究首次通过叶绿素荧光这一生长指标来研究不同生长激素对贯叶连翘生长生理的调控,也为中草药的安全生产与调控提供一种的新的思路。     

贯叶连翘金丝桃素的提取及干花茶的研制

以朵大饱满的贯叶连翘花朵为原材料,利用甲醇、吡啶和甲醇(1∶1)、吡啶分别在20,40 min条件下提取金丝桃素,筛选提取金丝桃素的最佳方法。在贯叶连翘花瓣中加入不同比例的绿茶,通过感官评价茶汤色泽、汤色、香气和鲜味,确定一种最好的花茶制作方式。结果表明:甲醇、吡啶和二者混合液均可提取出金丝桃素,其中吡啶提取40 min的金丝桃素含量最大;当贯叶连翘花瓣与绿茶的比例为4∶3时窨制的混合花茶感官评价最好,茶的风味和颜色最佳。     

正交试验法优化微波提取金丝桃苷工艺

[目的]优选贯叶连翘中金丝桃苷微波提取工艺。[方法]以金丝桃苷提取率为考核指标,采用正交试验法考察辐射温度、微波功率、微波辐射时间及料液比对贯叶连翘中金丝桃苷提取率的影响,建立微波提取贯叶连翘中金丝桃苷的最佳工艺。[结果]微波提取金丝桃苷的最佳工艺条件为辐射温度50℃、微波功率500 W、微波辐射时间9 min及料液比1∶20。[结论]通过以上试验得到的微波提取工艺条件可靠,稳定性好,可用于贯叶连翘中金丝桃苷的提取。     

贯叶连翘高产栽培技术

贯叶连翘为藤黄科植物贯叶金丝桃（Hypericwn perforatum L.）的干燥全草，别名女儿茶、千层楼、小刘寄奴、小过路黄、赶山鞭等。性辛、寒。全草含金丝桃素，以花瓣的含量最高。具有收敛、抗菌、止血、利湿、通经活络及抗病毒、抗抑郁、抗肿瘤等作用。现代研究表明，贯叶连翘对艾滋病病毒有抑制作用。据报道，其抗艾滋病病毒的Ⅱ期临床试验已完成，并收到了较好的临床效果，无毒副作用，深受患者欢迎。贯叶连翘提取物，在欧美作为原料药，价格昂贵且供不应求，市场很好。贯叶连翘分布于陕西、甘肃、四川、山东、河北等省，现四川、陕西等省已有栽培。     

贯叶连翘的组织培养和金丝桃素的生产

以贯叶连翘种子为材料,对贯叶连翘组培苗进行生根培养,筛选和优化生根培养基,进一步在生物反应器内诱导培养不定根,并研究了蔗糖浓度、铵态氮/硝态氮配比以及MS培养基浓度对不定根中金丝桃素含量积累的影响.结果表明:贯叶连翘在3/4MS+IBA 2.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8g/L(pH 5.8)培养基上的生根效果最佳;40 g/L的蔗糖有利于金丝桃素的积累,此时不定根中金丝桃素的含量最高、达0.94 mg/g;当铵态氮/硝态氮配比为30/30时,金丝桃素的含量和生产量达到最大,分别为0.98 mg/g和12.41 mg/L;不定根在不同浓度范围的MS培养基中均可生长,金丝桃素在2MS培养基上的生产量最大、为15.70 mg/L.     

微波辅助提取贯叶连翘总黄酮的工艺研究

[目的]探讨贯叶连翘中总黄酮的微波辅助提取优化工艺条件。[方法] 采用正交试验方法,考察微波功率、提取溶剂浓度、液固比、提取时间对总黄酮含量的影响,确定微波辅助提取贯叶连翘总黄酮的最佳工艺条件,并与超声波提取法、索氏提取法进行比较。[结果] 微波辅助提取贯叶连翘总黄酮的最佳条件为乙醇溶液的体积浓度为70%、液固比为30∶1、微波功率450 W、微波提取时间5 min,在该条件下贯叶连翘总黄酮得率为6.02%。微波辅助提取5 min与索氏法提取4 h、超声波法提取1 h得率相当。[结论] 微波辅助提取法具有快速、高效、节能、选择性好等特点。     

贯叶连翘化学成分分析

从贯叶连翘地上部分带花全草的95%乙醇提取物中分离出6个化合物,经理化常数和光谱分析鉴定了其中4个化合物,分别为槲皮素( )、陈皮甙( )、芦丁( )、金丝桃素( ),化合物 、 由于量太少,未能进行全面鉴定,其中化合物( )陈皮甙为首次从贯叶连翘中获得。     

贯叶连翘的化学成分及药理作用研究

贯叶连翘是具有很高药用价值的植物。它作为镇静剂、抗炎药、抗抑郁、抗肿瘤药物具有广阔的应用前景,因而越来越受到人们的重视。介绍了贯叶连翘提取物的化学成分,并总结其药理作用,以期为进一步研究和开发利用贯叶连翘提供理论基础。     

HPLC测定连翘叶不同提取物中连翘苷的含量比较

采用C18柱,(250× 4.6mm,5μm),选用乙腈—水(21∶79)为流动相,检测波长为277nm,测定连翘叶三种提取物中连翘苷的含量.结果表明连翘苷的量在0.475fg—2.375μg之间线性关系良好,相关系数r=0.9986,平均回收率为100.1％,RSD=1.88％.结论:运用高效液相色谱法测定连翘叶不同提取物中连翘苷的的含量,结果表明三种连翘叶提取物中甲醇提取物的连翘苷含量最高,与乙醇提取物含量接近,而与水提物含量差异较大.     

贯叶连翘无菌苗茎尖诱导变异体研究

以研究贯叶连翘离体诱变及筛选变异体为目的,用贯叶连翘无菌苗茎尖为供试材料,研究了平阳霉素处理浓度、时间、外源添加物对供试茎尖存活率以及激素配比对茎尖不定芽诱导率的影响。结果表明:平阳霉素80mg/L的20min处理可作为适宜诱变处理,添加椰汁有利于茎尖存活;6-BA0.5mg/L、NAA0.01mg/L的激素组合有利于诱导正常型不定芽和获得较高的诱导率。通过研究,建立了贯叶连翘变异体诱导技术程序,获得了金丝桃素含量提高的变异体材料。     

贯叶金丝桃的电子束辐照杀菌研究

研究电子束辐照贯叶金丝桃杀菌的可行性,为科研和生产中有效地应用该方法提供理论依据。辐照样品中微生物数量的测定依据《中华人民共和国药典》提供的方法;应用高效液相色谱检测有效成分金丝桃素和金丝桃苷含量;依据微生物存活对数与辐照剂量的线性关系,求得D10;采用目测、鼻嗅、品尝的评定方法,评定样品辐照前后的外部性状变化。结果表明:细菌、霉菌+酵母菌的D10值分别为2.91 kGy和4.69 kGy,霉菌和酵母菌相对于细菌对电子束有更强的耐受力,适宜的辐照加工剂量为4.5~6.5 kGy,经过辐照后,样品可以保存30~150 d,卫生指标仍达到国家药典中规定的中药粉剂微生物限度标准,金丝桃苷和金丝桃素的含量未发生显著变化。因此,利用电子束辐照贯叶金丝桃杀菌是一种行之有效的方法。     

贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的建立与条件优化

[目的]建立贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系,并对其条件进行优化.[方法]以贯叶连翘基因组DNA为模板,用L16(45)正交试验设计系统分析引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2浓度、dNTP浓度和模板DNA浓度5种因素对贯叶连翘ISSR-PCR反应扩增结果的影响.[结果]正交试验设计的方法可以用于贯叶连翘1SSR-PCR反应体系的建立,经过优化得到贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的最佳条件为:20μISSR-PCR反应体系中含10×PCR buffer,Mg2+浓度1.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度50 U/ml,DNA浓度20 ng/μl,dNTP浓度250 μmol/L,引物浓度0.75 μmol/L.[结论]试验建立的贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系重复性好、分辨率高,结果稳定可靠.     

贯叶连翘愈伤组织诱导及其金丝桃素检测

采用不同培养基及激素诱导贯叶连翘愈伤组织,研究了不同蔗糖浓度对愈伤组织生长的影响,同时采用HPLC对不同生长状态的愈伤组织中金丝桃素含量进行检测。结果表明:MS + 2 ,4 -D 0 .2mg/L +KT 0 .0 2mg/L的培养基中愈伤组织的诱导率最高;提高蔗糖浓度可以促进愈伤组织生长,但合成金丝桃素的最佳蔗糖浓度为30g/L ;褐化的愈伤组织中金丝桃素含量明显高于生长状态好的愈伤组织,增加量可达7.5～9倍。     

贯叶金丝桃离体培养及植株再生体系的建立

[目的]研究贯叶金丝桃的组培快繁技术,以提高其繁殖率和生根率,并建立一套高效的离体培养再生体系。[方法]以贯叶金丝桃幼芽为外植体,对适宜的丛生芽繁殖和生根培养基进行了筛选。[结果]适宜的繁殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L;适宜的生根培养基为1/2 MS+IAA 0.5 mg/L+ABT 0.2 mg/L。[结论]研究结果为贯叶金丝桃的种质保存和良种选育工作奠定了基础。     

应用响应面法优化金丝桃素的纯化工艺

在单因素试验的基础上,根据中心组合试验设计原理,选择上柱液中金丝桃素的浓度、洗脱液中乙醇的浓度和洗脱液用量为考察因素,以产物中金丝桃素含量为响应值,采用3因素5水平的响应面分析法对NKA-9型大孔树脂分离纯化贯叶连翘中金丝桃素的工艺条件及参数进行优化.结果表明:金丝桃素的最佳纯化工艺条件为上柱液中金丝桃素的浓度37.6...