整合REV-LTR基因的MDV活疫苗与亲本CVI988/Rispens株的免疫效力比较

利用同源重组技术将禽网状内皮组织增生症病毒（REV）的长末端重复序列（LTR）整合进CVI988/Rispens疫苗株基因组中所构建成的重组马立克氏病病毒株（r MDV-LTR株）,具有较高的增殖效率。为比较r MDV-LTR株与亲本CVI988/Rispens株的免疫效力差异,开展了对这两种疫苗的比较试验。试验将这两种疫苗分别按照三个不同剂量经颈背部皮下接种1日龄SPF鸡。接种后第7 d,攻毒马立克氏病强毒株rMd5,连续观察60 d后进行剖检。临床病理观察结果发现,以不低于250 PFU/羽剂量的rMDV-LTR株或CVI988/Rispens株免疫SPF雏鸡都可以提供大于80%的免疫保护效率;以125 PFU/羽剂量的两种疫苗虽均不能提供大于80%的免疫保护效力,但rMDV-LTR株免疫组试验鸡未出现死亡,仅有2只鸡出现消瘦,剖解脏器无肿瘤,而CVI988/Rispens株免疫组鸡出现2只死亡,其中1只剖解后检出肿瘤。rMDV-LTR株和CVI988/Rispens株免疫组的免疫保护指数分别为77.78%和66.67%。由实验结果可见,在较小免疫剂量下,rMDV-LTR株免疫保护...     

鸡马立克氏病Ⅰ型疫苗的特点

马立克氏病Ⅰ型疫苗(CVI988/Rispens株)是我公司近年研制的、用于预防鸡马立克氏病的疫苗,也是目前免疫效力最好的疫苗之一。此疫苗有如下特点:     

鸡马立克氏病CVI 988/Rispens毒株生物学特性的研究

对荷兰农业渔业部提供的初代次 CVI988/ Rispens种毒 ,繁殖到 37代 ,用间接荧光抗体试验测定属血清 型 ,经接种雏鸡进行 6代毒力返强试验观察到 70日龄和对 1日龄雏鸡接种 4 5 0 0 0个蚀斑单位 ,观察到 12 0日龄均为安全。对 1日龄雏鸡接种免疫剂量的疫苗 ,于 4日龄产生病毒血症 ,7～ 14日龄达到高峰。用 37代毒繁殖生产的三批 CVI988/ Rispens疫苗 ,与国外 CVI988/ Rispens疫苗进行免疫效力比较 ,保护指数为 94 .5 %～ 10 0 %。     

企业

正大华农取得一项疫苗发明专利证书广东大华农动物保健品股份有限公司8月21日发布公告称,公司近日收到国家知识产权局颁发的一项发明专利证书,发明名称为"一株马立克氏病病毒疫苗株及其分离鉴定和应用"。大华农称,该发明在健康鸡场中分离到一株鸡马立克氏病病毒(MDV),命名为CVTR株。MDV CVTR株不会诱发鸡的肿瘤,对鸡群也没有免疫抑制作用。CVTR株病毒在鸡胚成纤维细胞(CEF)上或鸡体内比目前广泛使用的CVI988/Rispens疫苗株增殖更迅速。将CVTR株用作马立克氏病活疫苗的生产毒株所制备的疫苗,预防超强毒MDV诱发的鸡马立克氏病,其保护力优于目前国内外市场上应用     

超强马立克病病毒株的致病性研究

拟对一株超强马立克病病毒(MDV)SD2012-1株的致病性进行研究。将60只SPF鸡平均分成未免组、HVT免疫组和CVI988疫苗免疫组3组。于1日龄时对其进行马立克病(MD)疫苗免疫,于10日龄时进行SD2012-1攻毒;每天观察攻毒鸡临床症状,对病死鸡进行病理剖检和组织学观察;用PCR反应对感染鸡进行MDV跟踪监测。病理学研究结果显示:攻毒后第2周,试验鸡有轻微组织病变;攻毒后第6周,试验鸡有眼观病变,镜检有散在的肿瘤细胞团块;攻毒后第9周,试验鸡有明显的眼观肿瘤病变,镜检有大量肿瘤细胞聚集;SD2012-1可以突破CVI988疫苗免疫,引起高达30%的鸡发病。PCR跟踪监测结果显示:攻毒后第5天,未免组和HVT免疫组可检出MDV;攻毒后第10天,未免组和HVT免疫组阳性检出率均为100%,CVI988免疫组阳性检出率为30%;攻毒后第20天,3组试验鸡阳性检出率均为100%;用PCR检测病死鸡的肝、肾、肌胃、肠系膜、十二指肠、心和法氏囊样品的结果均为MDV阳性;攻毒300d后,健康存活鸡的羽髓PCR检测结果均为MDV阳性。结果表明,HVT疫苗对于SD2012-1株几乎无保护作用,超强马立克病病毒SD2012-1株能够长期在免疫鸡体内存在,突破免疫保护,引起发病,这对国内防控鸡马立克病提出了严峻挑战。     

血清3型火鸡疱疹病毒疫苗与血清1型CVI988疫苗的效力比较

用血清3型火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗和血清1型CVI988疫苗免疫SPF白来航鸡后,分别攻击国内马立克氏病(MD)标准强毒京-1株和国际MD标准超强毒(VVMDV)RB1B株。结果表明,HVT和CVI988免疫组攻击京-1株或RB1B株与相应攻毒对照组相比,保护指数差异极显著(P<0.01)。HVT和CVI988疫苗抗京-1株攻毒的保护效果相似(保护指数分别为93.75%和93%),而CVI988疫苗抗RB1B株的攻击效果优于HVT疫苗(保护指数分别为92.6%和75.3%),但差异不显著(P>0.05)。CVI988疫苗抗京-1株和RB1B株的效果(分别为93%和92.6%)无显著差异(P>0.05),HVT疫苗抗京-1株和RB1B株的效果(分别为93.75%和75.3%)存在一定差异,但差异不显著(P>0.05)。     

CVI988/Rispens疫苗的过去、现在和未来

一、CVI988疫苗的过去荷兰农业渔业部动物科学和健康研究所Rispens博士1969年从自然界发现CVI988毒株，经过三年的研究，于1972年以该博士命名的CVI988／Rispens 液氮疫苗问世，在荷兰全国推广应用到现在，有效地控制了鸡马立克氏病MD。CVI988／Rispens疫苗是世界养禽业的重大科技成果，了解Rispens博士研究的历史，对于我国控制MD的危害是十分有意义的。1． CVI988／Rispens种毒的培育 制疫苗种毒的原始分离株在鸭胚成纤维细胞上传4代，然后在鸡胚和鸭胚成纤维细胞交替传14代，测定安全性、免疫原性、检查外源病原等，继续在…     

表达马立克氏病病毒CVI988/Rispens糖蛋白B重组鸡痘病毒的免疫性及安全性

用表达马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型疫苗株CVI988/Rispens 糖蛋白B(gB)基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB/R)和鸡痘病毒(FPV)疫苗株282E4 免疫1 日龄不同品种的鸡,来评价2 种病毒株的安全性及免疫性。试验结果表明,rFPV gB/R和FPV 282E4 免疫鸡后对FPV 强毒攻击均可提供100% 的保护,对有FPV母源抗体的商品蛋鸡安全无毒性,而对无母源抗体的SPF鸡的毒性则不同。斑点杂交和Southern 杂交证实,rFPV-gB/R 中无氨苄青霉素的抗性基因。     

威力克与马立克氏病疫苗Rispens混合注射免疫的兼容性

自20世纪60年代以来,全世界就认识到马立克氏病(MD)对于后备鸡具有重要的经济意义,并研发了多种疫苗预防马立克氏病.无致病性的血清3型火鸡疱疹病毒(HVT)是研发的首批疫苗株之一,目前仍用于肉鸡胚内注射或者1日龄颈部皮下注射免疫.一种致弱的血清1型马立克氏病疫苗CVI988/Rispens研发于1972年,目前主要用于较大日龄家禽,如后备蛋鸡和种鸡.     

企业

<正>大华农取得一项疫苗发明专利证书广东大华农动物保健品股份有限公司8月21日发布公告称,公司近日收到国家知识产权局颁发的一项发明专利证书,发明名称为"一株马立克氏病病毒疫苗株及其分离鉴定和应用"。大华农称,该发明在健康鸡场中分离到一株鸡马立克氏病病毒(MDV),命名为CVTR株。MDV CVTR株不会诱发鸡的肿瘤,对鸡群也没有免疫抑制作用。CVTR株病毒在鸡胚成纤维细胞(CEF)上或鸡体内比目前广泛使用的CVI988/Rispens疫苗株增殖更迅速。将CVTR株用作马立克氏病活疫苗的生产毒株所制备的疫苗,预防超强毒MDV诱发的鸡马立克氏病,其保护力优于目前国内外市场上应用     

对一株超强马立克氏病毒株的检测和研究

对从发病鸡场分离到的一株超强马立克氏病毒株,用PCR扩增该分离毒株的meq致瘤基因并测定了其序列,发现其与超强病毒株SD2012-1的核苷酸同源性为99%。该分离毒株的meq基因序列在第575～577位比疫苗株CVI988/Rispens的meq基因序列多插入3个碱基（CAC）,与SD2012-1相同。使用该分离毒株进行疫苗免疫攻毒实验,未免组的发病率为80.0％,常规剂量HVT组和10×常规剂量HVT组的发病率分别为73.0％和76.6％,HVT不能提供有效免疫保护。常规剂量CVI988组和10×常规剂量CVI988组的发病率分别为30.0％和30.0％,常规剂量HVT+CVI988组和10×常规剂量HVT+CVI988组的发病率分别为26.6％和26.7％,免疫CVI988疫苗组鸡和HVT+CVI988联苗组鸡的发病率比免疫HVT疫苗组鸡低。说明,野外毒株的不断变异已经突破现有疫苗的免疫保护,会给养鸡业带来严重的损失。     

鸡马立克病疫苗株CVI988/Rispens meq基因编辑及缺失毒株的构建与鉴定

meq是鸡马立克病病毒(MDV)最重要的致瘤基因,在马立克病(MD)肿瘤发生中发挥关键作用。同时,它在疫苗株和强毒株之间具有明显的序列差异性。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以MDV疫苗株CVI988/Rispens meq基因为靶点,设计合成gRNA,克隆构建pX459-gRNA质粒,转染CEF并感染CVI988/Rispens,然后对meq基因编辑的病毒噬斑进行克隆纯化,经过PCR扩增、测序分析及IFA鉴定,成功构建1株meq基因编辑的缺失毒株CVI988Δmeq-C7,为后续筛选和鉴定抗MD疫苗株MEQ单抗及鉴别诊断研究奠定了基础。     

技术问答(六)

<正> 1 问:什么是马立克“814”疫苗? 答:现在能够抵御超强毒和超超强毒的马立克(MD)疫苗主要有“814”K株和CVI988,CVI988是荷兰的Rispns在1969年分离的,因为其与MDV强毒有高度同源性,免疫原性强,受母源抗体影响小,免疫效果好,被西欧和东南亚各国广泛采用。“814”K株是哈兽研的童昆周先生等从健康鸡群中分离出,用鸡胚皮肤细胞(CEK)培育成功,也是我国唯一的血清I型毒株,安全稳定,具有良好的免疫原性,受母源抗体干扰小。我厂做的实验室免疫效力对比试验表明,低代毒马立克氏病(MD)减少率89％,疫苗毒84％。     

国产鸡马立克氏病CVI988/Rispens疫苗的稳定性研究

近年的养鸡生产中，许多鸡场已采用CVI988／Rispens冷冻活疫苗进行鸡马立克氏病（MD）的防制，但仍未能取得较为理想的免疫效果。出现免疫失败的情况，探讨其原因除了与鸡群的饲养管理水平、早期感染MDV、毒力变异增强、免疫抑制性病毒感染、母源抗体等多方面因素影响外，疫苗本身的质量及操作使用也是一个不可忽略的因素。不同厂家所生产的不同种类的MD疫苗，其质量及使用方法均存在一定差异。北京市农林科学院畜牧兽医研究所通过引进荷兰制苗种毒产业化生产的CVI988／Rispens活疫苗是一种细胞结合性病毒，经检测具有免疫效力高、安…     

鸡马立克病疫苗株CVI988/Rispens meq基因编辑及缺失毒株的构建与鉴定

meq是鸡马立克病病毒（MDV）最重要的致瘤基因，在马立克病（MD）肿瘤发生中发挥关键作用。同时，它在疫苗株和强毒株之间具有明显的序列差异性。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，以MDV疫苗株CVI988/Rispens meq基因为靶点，设计合成gRNA，克隆构建pX459-gRNA质粒，转染CEF并感染CVI988/Rispens，然后对meq基因编辑的病毒噬斑进行克隆纯化，经过PCR扩增、测序分析及IFA鉴定，成功构建1株meq基因编辑的缺失毒株CVI988Δmeq-C7，为后续筛选和鉴定抗MD疫苗株MEQ单抗及鉴别诊断研究奠定了基础。     

鸡马立克氏CVI988疫苗应用效果观察

针对鸡马立克氏病免疫失败的问题 ,采用了HVT、HVT +ACM 1、CVI988三种疫苗大面积免疫 1日龄雏鸡的观察试验。结果表明 ,CVI988疫苗免疫效果最好 (发病率为 0 2 2 % ) ,HVT +ACM1次之 (发病率为 2 4 8% ) ,HVT疫苗居第三 (发病率为 6 5 % )。为临床上正确选择和应用疫苗预防鸡马立克氏病提供了可靠的依据     

马立克氏病液氮疫苗介绍

鸡马立克氏病病毒不易被杀灭是由于感染马立克氏病病毒的阳性鸡终生排毒。使用疫苗是预防该病的有效方法，而目前最有效的是CVI988/Rispens液氮苗。     

鸡马立克氏病三价活疫苗剂量配比和免疫剂量的研究

用马立克氏病病毒BJMDV-1株分别攻击由CVI988/B5、HCV2/B5和FC126/B5毒株组成的,剂量配比不相同的马立克氏病(MD)三价活疫苗免疫的鸡群,结果表明MD三价活疫苗中CVI988/B5、HCV2/B5及FC126/B5毒株的合适配比为2:1:2。按照此剂量配比制备的MD三价活疫苗,用RB1B超强毒株进行攻毒,当RB1B攻毒对照组MD阳性率为85.71%时,MD三价活疫苗的半数保护剂量(PD50)均数为111PFU/只,95%置信区间为585～53PFU/只的范围内,并确定MD三价活疫苗的免疫剂量为2500PFU/只。用该剂量对鸡进行MD三价活疫苗免疫,可使鸡体产生抗RB1B超强毒株攻击的坚强免疫力。     

马立克病毒感染鸡端粒酶活性的研究

对1日龄非免疫鸡分别接种马立克病病毒(MDV)Ⅰ型国际标准强毒GA株、国内标准强毒京-1株及Ⅰ型MDV疫苗毒CVl988株后第5d起，用改进的TRAP法和Bandscan软件测定分析、计算感染过程中鸡外周血淋巴细胞(PBMC)的端粒酶活性。结果，自接种MDV Ⅰ型强毒GA株和京-1株后，在鸡尚未出现临床症状和可视病变之前端粒酶就可被检测到，并且随着感染鸡日龄的增加逐渐升高，分别在20～25日龄时其相对活力达到最高值；接种MDV CV1988后，整个试验期端粒酶活性均呈阴性。试验结果表明，MDV CV1988疫苗株具有较可靠的免疫效果，PBMC端粒酶活性与马立克病的发病进程具有一定的相关性。     

鸡马立克氏病1型（CVI988／Rispens）活疫苗的研制

鸡马立克氏病1型（CVI988／Rispens）活疫苗毒力稳定，免疫原性好。免疫期可持续1年半，在液氮中保存，有效期1年以上，免疫鸡临床保护率近100％，对预防各品种雏鸡马立克氏病有明显效果。