绿色蔬菜叶绿体DNA的提取和纯化

对蔬菜绿叶通过组织匀浆,差速离心分离,密度梯度离心分离、纯化、提取叶绿体。显微镜下观察所得叶绿体纯度、形态及结构,看到椭圆、球形叶绿体,并用数码照相机拍照。样品用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后,用酚、苯酚/氯仿及氯仿/异戎醇抽提、处理纯化。取得的叶绿体DNA(ctDNA)用紫外分光光度计检测浓度与纯度,1%琼脂糖电泳得到清晰、整齐的条带。     

羊肺炎支原体基因组DNA几种提取方法的比较

为了筛选支原体基因组DNA最优提取方法以便用于支原体的检测和分子鉴定,本试验采用两种试剂盒、CTAB法、高盐法、酚/氯仿/异戊醇法和煮菌法对3批两种支原体液体培养物进行总DNA提取,通过检测基因组DNA纯度和PCR产物比较其提取效果。结果显示:6种方法提取的支原体基因组DNA均能用于PCR。进口试剂盒和CTAB法获得的DNA纯度最高,酚/氯仿/异戊醇法、高盐法和国产试剂盒次之,煮菌法省时但质量较差,酚/氯仿/异戊醇法较慢。CTAB法和高盐法可快速获得优质的基因组DNA,可作为提取支原体基因组DNA的首选方法。     

黄鳝线粒体DNA的提取及其酶切分析

用碱裂解法从黄鳝肝脏组织中提取线粒体DNA,并对提取的线粒体DNA纯度、完整性进行了检测.结果表明,其紫外吸收比值为OD26/280在1.72～1.96之间,纯度较高,琼脂糖凝胶电泳表明提取线粒体的完整性好;用EcoR Ⅰ和HindⅢ对黄鳝线粒体DNA进行酶切,用琼脂糖凝胶电泳检测,均能检测出两套不同的酶切片段,证明黄鳝线粒体DNA存在多态性.     

改良CTAB法提取鸢尾属植物DNA

鸢尾属植物中酚类、多糖含量较高,DNA提取较为困难。在前人工作基础上,改进了提取植物DNA的CTAB方法,通过延长水浴时间、氯仿/异戊醇(24∶1)2次抽提、适当延长氯仿/异戊醇与提取液接触时间等一系列改进,简化了提取步骤,大大缩短了提取时间。所提取的DNA纯度高,可满足以PCR扩增为基础的试验需要。     

PCR仪法从林麝毛发中提取基因组DNA

采用PCR仪法从林麝(Moschus berezovskii)毛发中提取基因组DNA,并与酚/氯仿法进行比较.结果表明,采用PCR仪法提取所得的DNA浓度高、纯度好.以提取所得的DNA为模板扩增林麝雄性激素受体基因外显子1,获得的PCR产物务带清晰、位置正确.PCR仅法与酚/氯仿法相比操作简单,提取所得的DNA质量较高,值得推广.     

鱼组织线粒体基因组提取方法的改进

基因组的提取是分子生物学研究的基础技术。提取的纯度及结构的完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。报道了一种改进的鱼组织线粒体基因组的提取方法,该方法操作简便,提取的线粒体基因组结构完整,并尽可能避免了核DNA、蛋白质、有机溶剂等的污染,而得率和纯度都可满足鱼组织线粒体基因组的研究要求。     

大黄最佳提取方法的比较研究

[目的]研究大黄的最佳提取方法,为有效提取大黄甙提供参考。[方法]用2种方法对大黄的有效成分提取进行了对比研究。[结果]结果表明,以乙醇为提纯剂的产率高于以氯仿为提纯剂的产率,但以乙醇为提纯剂所获得产物的纯度低于以氯仿为提纯剂所获得的产物。以乙醇和氯仿混合溶剂为提纯剂时,产物的产率和纯度相对有所提高。[结论]确定了用乙醇与氯仿混合溶剂进行大黄提取的条件及有效方法。     

鱼糜制品中基因组DNA提取方法的比较

将分别采用普通酚-氯仿抽提法和试剂盒(柱吸附法)提取DNA的两种方法加以比较,以确定最适提取鱼糜制品DNA的方法.将鱼肉和鱼糜制品作为原料,用两种方法提取基因组DNA,利用分光光度计测定其A260与A280的吸光值,计算比率估计核酸的纯度,并利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置;并用线粒体16S rRNA基因PCR扩增产物鉴定所提取的基因组DNA.     

适合于基因组测序的红麻高纯度线粒体DNA提取

采用红麻黄化苗为试材,结合密度梯度离心和差速离心的方法提取线粒体DNA(mtDNA)以满足测序要求.结果表明,蔗糖密度梯度离心法比Percoll密度梯度离心法更适合于红麻线粒体的分离.分离后的线粒体经DNaseI消化核DNA,并采用Jannus绿检测线粒体的完整性,SDS和蛋白酶K裂解线粒体,并用酚/氯仿抽提除去蛋白,...     

卵黄抗体五种提取工艺比较及初步应用

为了得到较优的卵黄抗体提取工艺,试验改良了辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法与聚乙二醇沉淀法5种提取方法。IPGT诱导表达重组猪致病性大肠杆菌(Escherichia coli)毒素STxB蛋白(rSTxB),与佐剂71VG乳化制备免疫原免疫蛋鸡,利用改良的聚乙二醇沉淀法提取高免卵黄抗体,采用SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,通过Western blot检测卵黄抗体和血清抗体效价。结果表明,辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法提取效率分别为96.00、81.99、155.50、65.34、46.00 mg/mL,其中聚乙二醇沉淀法的提取纯度最高。重组STxB蛋白分子量大小约25 kDa,血清中抗体效价最高达到64 000倍,卵黄抗体最高稀释倍数为16 000倍。综合评估,聚乙二醇的提取法相对较优,且提取的卵黄抗体具有良好的免疫活性。     

棉花线粒体基因组细菌人工染色体文库的构建

以P30A细胞质雄性不育系黄化苗为材料,采用蔗糖密度差速离心和不连续蔗糖密度梯度超速离心提取棉花线粒体,低熔点琼脂糖包埋和原位消化裂解的方法制备高分子量的线粒体DNA(mtDNA),经BamHⅠ,HindⅢ酶切和PCR扩增进行纯度鉴定,并对其进行部分酶切,酶切片段与载体连接,电击转入大肠杆菌DH10B中,成功的构建了棉花线粒体基因组BAC文库。该文库共挑取3 840个单克隆,平均插入片段大小为15.5 kb,覆盖率超过70倍,研究结果表明该基因文库具有较高的质量。     

植物粗提物对朱砂叶螨触杀活性的研究

为了筛选出新型的植物源杀螨剂,采用玻片浸渍法测定10种植物30种粗提物对朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)成螨的触杀活性。当粗提物浓度为2 mg/mL时,蒲公英的氯仿粗提物和生栀子的甲醇粗提物,关黄柏、吴茱萸和甘草的石油醚粗提物,对朱砂叶螨均有较好的触杀活性,其中生栀子的甲醇粗提物致死率最高,为83.67%。经初步试验筛选,选取这5种触杀活性较高的中草药提取物做进一步的毒力测定,结果为关黄柏、吴茱萸的石油醚粗提物(24 h)的LC50值为分别为1.6332 mg/mL和1.6530 mg/mL;蒲公英的氯仿粗提物LC50值为(24 h)为1.6818 mg/mL;生栀子的甲醇粗提物(48 h)LC50值为1.4623 mg/mL;甘草石油醚粗提物(48 h)LC50值为1.5131 mg/mL。这5种中草药的提取物均具有比较好的杀螨活性。     

黔北一新鱼种遵义小钝吻鮠线粒体DNA的分离纯化

用差速离心法和改进的碱裂解法分离纯化遵义小钝吻鮠线粒体DNA,紫外检测其OD260/OD280在1.78～1.85,并计算出该鱼肝组织线粒体DNA的含量为0.613μg/g。纯化样品经紫外分析仪在200～290 nm波长范围内扫描,呈现典型的DNA吸收峰,其最大吸收峰在259～260 nm。以λDNA/HindⅢ的完全酶切片段作为相对分子量标准,利用电泳迁移率与分子量的对数的线性关系,由已知片段大小推算出遵义小钝吻鮠mtDNA分子大小为(15.44±0.16)kb。     

2种提取猪肝基因组DNA方法的比较

[目的]对2种猪肝基因组DNA提取方法,进行比较研究。[方法]分别采用试剂盒法和常规的氯仿／异戊醇抽提法,提取新鲜猪肝基因组DNA,并对其进行综合分析。[结果]试剂盒方法得到的DNA浓度较低,其OD260nm／OD280nm比值达到2.05,虽然蛋白质除的较干净,但是含RNA较高;而氯仿／异戊醇抽提法得到的DNA浓度高,其OD260nm／OD280nm比值1.88,纯度较高,且成本低。[结论]氯仿／异戊醇法对猪肝基因组DNA提取效果优于试剂盒法。     

油菜蜂花粉抗炎成分的GCMS初步分析*

 研究油菜蜂花粉及其不同溶媒萃取物对小鼠抗炎作用的影响。采用二甲苯致小鼠耳肿胀法评价抗炎药效作用,然后用GC-MS分析主要抗炎组分中的化学成分。结果显示油菜蜂花粉不具有抗炎活性,但其氯仿萃取组分与水萃取组分对二甲苯所致耳肿胀有显著的抑制作用（P＜0.01）。GC-MS分析表明,油菜蜂花粉氯仿组分中邻苯二甲酸二丁酯含量为17.454%。油菜蜂花粉系统萃取物中氯仿萃取组分和水萃取组分具有抗炎活性,氯仿组分中的邻苯二甲酸酯可能是花粉氯仿萃取物抗炎作用的物质基础。研究为从油菜蜂花粉中开发抗炎药物提供理论依据。     

狼毒根三种萃取物生物活性的测定

通过实验室测定,狼毒根在氯仿、石油醚和乙酸乙酯三种萃取物中,氯仿的萃取物对麦二叉蚜的触杀活性最高,为77.95%,其50mg/ml的浓度触杀活性最高,校正死亡率为95.00%。氯仿萃取物对甘蓝蚜的拒食活性最好,校正拒食率达到了87.85%。在氯仿萃取物的四个浓度中,(50mg/ml)的拒食活性最高,达到了91.84%,25mg/ml和16.67mg/ml的拒食率分别为87.04%和87.71%,12.5mg/ml的拒食活性仍然达到了84.82%。     

核桃青皮提取物对枸杞蚜虫的触杀和拒食活性研究

研究核桃青皮对枸杞蚜虫的触杀和拒食活性,为开发以核桃青皮为原料的植物杀虫剂提供依据。采用点滴法,测定了核桃青皮乙醇提取物和石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水4种不同极性萃取物对枸杞蚜虫的触杀活性;用载毒叶片法,测定了石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水的4种提取物对枸杞蚜虫的拒食活性。结果表明,核桃青皮提取物对枸杞蚜虫有较高的触杀活性,质量浓度为50.00 g/L时,48 h的校正死亡率达86.6%;4种萃取物对枸杞蚜虫的触杀活性和拒食活性的顺序为水萃取物>氯仿萃取物>乙酸乙酯萃取物>石油醚萃取物,其中水萃取物48 h的校正死亡率为93.0%。由此表明,核桃青皮对枸杞蚜虫具有较强的触杀活性,且杀虫活性和拒食活性较强的物质为一类极性较大的化合物。     

旋覆花花序氯仿萃取物抗植物病原真菌活性研究

为进一步明确旋覆花的农用杀菌活性,采用生长速率法、孢子萌发法,分别测定了旋覆花花序氯仿萃取物对13种植物病原真菌的离体抑菌活性,并测定了其对黄瓜灰霉病的防治效果。结果表明,在剂量为1.0 g/L时,氯仿萃取物对小麦全蚀病菌、西瓜炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、苹果炭疽病菌、黄瓜灰霉病菌和番茄果腐病菌的菌丝生长有较强的抑制作用,抑制率均在50%以上,其中对小麦全蚀病菌的抑制作用最强,抑制率高达100%;对西瓜炭疽病菌和番茄果腐病菌孢子萌发抑制率达92.90%和82.92%。在10.0 g/L剂量下,氯仿萃取物对黄瓜灰霉病的治疗效果和保护效果分别为54.27%和76.68%(48 h),其中保护效果与对照药剂0.4 g/L施佳乐无显著差异。