仔猪腹泻大肠埃希菌的分离鉴定及药敏试验

为了了解甘肃省武威市凉州区部分地区引起仔猪黄白痢的致病性大肠埃希菌的主要血清型及其致病性,从凉州区4家规模化猪场采集了60份仔猪肛门拭子,用细菌分离培养方法分离出20株大肠埃希菌菌株,然后经形态观察、生化试验,确定了该次分离菌株为致病性大肠埃希菌。经血清型鉴定,表明20株分离菌株分布在8个血清型中,其中优势血清型为O8（9株）,占总数的45%。药物敏感性试验结果表明,分离菌株对临床常用药物具有抗药性。该研究能够对凉州区仔猪腹泻病的流行病学研究、诊断和免疫防制提供科学参考。     

藏香猪源大肠埃希菌致病性和血清型检测及药敏试验

为了解四川省藏香猪源大肠埃希菌致病性、血清型及耐药性情况,从四川省藏香猪养殖场中无菌采集腹泻仔猪肝脏、肛拭子及粪便等组织病料253份中,分离得到155株大肠埃希菌。采用人工感染小鼠致病性试验、玻板凝集试验和KB药敏纸片法分别测定155株大肠埃希菌分离菌株的致病性、血清型及耐药性。结果显示,小鼠致病性试验表明155株分离菌中120株有致病性;玻板凝集试验表明120株致病性大肠埃希菌分离株属于14个血清型,以O111、O147、O109和O119为主要流行的优势血清型;耐药性试验表明120株致病性大肠埃希菌分离株对阿莫西林、氨苄西林、新霉素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药较严重,耐药率在94.2%~98.3%之间,对庆大霉素、氟苯尼考、多西环素等6种药物耐药率在44.2%~85.0%之间,对其他药物耐药率在15.0%~37.5%之间。说明该地区藏香猪源致病性大肠埃希菌血清型呈多样性分布,耐药性严重。     

规模化猪场仔猪致病性大肠埃希菌分离株的药敏试验

从湖北省3个规模化猪场45份典型仔猪黄、白痢病料中分离出大肠埃希菌.对其中40株经22种主要致病性大肠埃希菌O抗原定型血清鉴定,其中定型36株,4株未能定型,结果分属于9种血清型.用13种抗菌药物进行药敏试验,结果3个猪场分离的致病性大肠埃希菌对13种药物的敏感性各不相同.选择两种高度敏感药物,在3个相对应猪场进行临床治疗,疗效明显.     

仔猪水肿病病原的分离鉴定

从陕西省周至县5个乡镇疑似猪水肿病的病、死猪体内分离到8株细菌,根据其形态、培养特性和生化特性鉴定为大肠埃希菌。动物致病性试验表明,8株分离菌中有5株为致病性大肠埃希菌,能致死小鼠和引起断奶仔猪发病。血清学鉴定ZH1、ZH3和ZH7分离株为0138,ZH6分离株为0141,ZH4分离株为08,其中0138为优势血清型。     

腹泻仔猪肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性研究

为探明仔猪细菌性腹泻肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌流行的血清型、耐药表型及耐药基因型,本试验采集了贵州省5个地（州）市7个规模化养猪场的128份腹泻仔猪肠道样本,并对采集的样本进行了大肠埃希氏菌和沙门氏菌分离与鉴定,通过动物试验鉴定菌株的致病性,利用血清学方法鉴定其血清型,并通过药敏纸片法对主要致病菌进行耐药性研究,采用PCR技术检测各致病菌株耐药相关基因,分析细菌耐药表型和耐药基因型相关性。结果显示,本研究共分离鉴定到78株致病性大肠埃希氏菌与21株沙门氏菌,致病性大肠埃希氏菌血清型以O138、O87为主,沙门氏菌血清型以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌居多;药敏试验结果表明,本试验分离到的78株致病性大肠埃希氏菌对β-内酰胺类药物耐药率达80%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均超过40%,分离鉴定的21株沙门氏菌对氨基糖苷类药物耐药率达50%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均达20%以上;本试验分离鉴定的致病性大肠埃希氏菌共检出12种耐药相关基因,沙门氏菌共检出10种耐药相关基因,两种细菌耐药基因型与耐药表型符合率均达60%以上,且均为多重耐药。本研究为仔猪腹泻的综合防控提供了理论依据。     

猪源大肠埃希菌血清型O145菌株分离鉴定、耐药性及致病性研究

大肠埃希菌是引起仔猪腹泻甚至死亡的最常见的细菌性病原体。本试验对辽宁某规模化猪场3日龄腹泻仔猪进行了细菌分离鉴定。结果显示：从腹泻仔猪肝脏中分离出革兰氏阴性杆菌,经16S rDNA基因扩增和序列测序比对,与GENBANK登录号为CP031919.1(血清型为O145大肠埃希菌)基因序列同源性为99.44%,表明分离菌株为血清型O145大肠埃希菌;动物试验结果：分离菌36h内引起感染小鼠全部死亡,说明分离菌株为强致病性大肠埃希菌;毒力基因检测结果：分离菌株携带iusD、iss、FimH等毒力基因;药敏试验结果：分离菌株对头孢噻肟敏感,对阿米卡星中敏,对多黏菌素B、头孢唑啉、阿奇霉素、阿莫西林、大观霉素、环丙沙星、红霉素、多黏菌素E、利福平、复方磺胺甲唑和多西环素等11种药物均呈现耐药;耐药基因检测：分离菌株携带aac(6′)-Ⅰb、aac(3′)-Ⅱ、TEM、qnrS、ermB等耐药基因。     

奶牛粪样中致病性大肠埃希菌的分离与鉴定

大肠埃希菌血清型众多,一些具有特殊血清型的大肠埃希菌对人和动物有致病性。本试验从包头市侯家营奶牛场77头外表健康成年泌乳荷斯坦奶牛采集新鲜粪样,进行细菌分离培养,共分离到疑似大肠埃希菌69株,经过形态观察、生化鉴定、动物致病性试验和血清型鉴定,其中12株为致病性大肠埃希菌,均为强毒株,占分离菌数的17.4%,另57株为非致病性大肠埃希菌,占分离菌数的82.6%。同时对12株致病性大肠埃希菌进行了"O"血清型鉴定,分属7种血清型O78、O6、O9、O98、O1、O8、O149,分别占定型菌株的25.0%(3/12)、8.3%(1/12)、16.7%(2/12)、8.3%(1/12)、8.3%(1/12)、8.3%(1/12)、25.0%(3/12)。     

某规模化猪场大肠埃希菌O141的分离鉴定及药敏试验

从河北衡水某规模化猪场21日龄发病仔猪脾脏中分离到1株革兰氏阴性杆菌,通过菌落形态、培养特性和微量生化试验,鉴定为大肠埃希菌,应用大肠埃希菌O抗原定型血清鉴定为O141。该菌株对供试的14种抗菌药物均产生耐药性,其中多种常用抗菌药物对其完全没有抑制作用。动物致病性和毒素试验表明,该菌株在20 h内能够导致70%小鼠死亡,并产生热稳定肠毒素,为1株产肠毒素性大肠埃希菌。     

引发仔猪水样腹泻的多重耐药、高致病性大肠埃希菌的分离与鉴定

近来,长春地区多个养猪场发生高致病性、高死亡率的仔猪水样腹泻,腹泻仔猪经多种药物反复治疗,均无疗效。试验从发病仔猪肠壁内膜分离到2株大肠埃希菌(Escherichia coli),经鉴定,分离菌株为多耐药、高致病性菌株。将分离株进行生化试验及其16S rRNA序列的克隆、测序,并与GenBank中的序列进行对比,结果显示,分离菌株16S rRNA与GenBank登录的大肠埃希菌序列同源性达99%。动物回归试验结果显示,该大肠埃希菌能引起仔猪水样腹泻。药敏试验结果显示,常用治疗大肠杆菌病的药物如庆大霉素、氧氟沙星、环丙沙星等均对其无效。     

云南部分地区仔猪大肠杆菌分离鉴定

采自云南昆明、曲靖、楚雄、大理、玉溪、保山等州(市)规模化养猪场疑似仔猪黄、白痢的病(死)猪直肠棉拭子、十二指肠和肠系膜淋巴结病料,分离158株大肠杆菌。通过40种主要致病性大肠埃希氏菌O抗原的血清型鉴定,除46株未能定型、6株自凝外,鉴定出106株分离株的O抗原血清型。这些分离株覆盖了23个血清型,其中O24、O119、O88、O8、O9、O85这6种血清型的菌株占总分离菌株的39.24%、占定型菌株的58.49%,为分离株的优势血清型。这些血清型与已报道的常见血清型间存在一定差异,O24、O119作为猪致病性大肠杆菌优势血清型在我国少见报道。     

规模化养鸭场鸭源大肠杆菌分离株的致病性及系统发育分析

为研究鸭源大肠杆菌(E.coli)的致病性,明确鸭病原性E.coli与人和其他动物E.coli的亲缘关系及O血清型与菌种间遗传关系的相关性,本研究从我国西南地区规模化养鸭场患典型E.coli败血症的雏鸭体内分离37个血清型共82个E.coli分离株(其中优势血清型32株,其他血清型50株),以每株0.2 mL (109 cfu/mL)腿部肌肉接种7日龄健康鸭进行致病性试验;并对其中14个鸭源E.coli代表株进行16S rRNA基因克隆、测序及系统发育分析.结果表明:所有分离株全部为致病性E.coli,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别占受试菌株的80.5％(66/82)、17.1％ (14/82)和2.4％(2/82),4个优势血清型全部为高致病株和中等致病株,分别占受试菌株的84.4％(27/32)和15.6％(5/32);14个代表株鸭源E.coli的16S rRNA形成2个主要分支,3株新发现的血清型单独形成一个较远的分支,11株常见血清型与人及其他动物源E.coli形成另一个大的分支,其中有6株与人的O157亲缘关系较近,2株与出血性E.coli O157:H7 sakai聚为一个小分支;从遗传进化的关系分析,这些菌株有可能是人类的潜在病原菌;同时还发现不同血清型的分离株可以聚为一支,而同一血清型的分离株可以处于不同的分支,常规的O血清学分型不能体现菌种间遗传关系的远近.     

规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查

为了调查猪致病性大肠杆菌的耐药性及流行血清型 ,从湖北、河南、江西、安徽、浙江等省的 33个猪场采集 32 1份仔猪黄、白痢病料进行细菌的分离和生化鉴定 ,结果分离到大肠杆菌 30 2株 ,其中致病性大肠杆菌 2 76株。对 112株致病性大肠杆菌进行了 15种抗生素敏感性试验 ,发现分离菌株对 15种药物均有不同程度的耐药性 :青霉素 G对其完全没有抑制作用 ;先锋霉素 抑制作用最强 (97.3% ) ,其次为呋喃妥因 (78.6 % )、痢特灵 (71.4 % )、环丙沙星(6 8.8% )、诺氟沙星 (6 5 .1% )。 112株菌中 ,有 4 7种耐药谱型 ,多数为 6耐以上的菌株 (80株 ) ,占供试菌株的 71.4 %。应用微量平板凝集试验 ,对分离的 2 76株致病菌进行了血清型鉴定 ,鉴定共有 72种血清型 ,其中优势血清型 10种 ,占能定型分离致病菌株的 5 3.7%。     

广东屠猪肉样品中大肠杆菌耐药性与毒力特征的分析

为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(E.coli)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株E.coli,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行系统进化背景判定。结果显示,112株E.coli中,定型菌株95株,分别属于15种血清型,其中O65、O131、O8和O158为优势血清型。几乎所有菌株对氟苯尼考、多西环素和四环素高度耐药,而对头孢曲松高度敏感,其中多重耐药菌株多数耐5种以上药物,常见的多重耐药表型是氟苯尼考/氯霉素/多西环素/四环素/氨苄西林。PCR鉴定结果表明,含有毒力基因的菌株中38%至少具有两个毒力基因,其中EAST1+Stx2e和hlyF+Stx2e比较常见。比较常见的毒力基因为Stx2e和EAST1,STb基因仅在一株菌中检测到。多重PCR鉴定结果显示,屠猪肉样品中E.coli主要分布为共生型的A组和B1组。本研究为大肠杆菌病的控制和合理使用抗生素提供实验依据。     

仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析

为了解贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌流行情况及耐药性变化,本研究运用凝集试验、PCR和药敏纸片琼脂扩散法等方法对分离的78株致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因及耐药性分析。结果显示,78株致病性大肠杆菌以O138、O87血清型为主,占定型菌株的60.8%;其中62株致病性大肠杆菌检出毒力基因,检出率为79.5%,可分为8种毒力基因类型,分属肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）和肠聚集性大肠杆菌（EAEC）,毒力基因eaeA、elt和escV检出率较高,分别为38.5%、28.2%和21.8%;分离到的致病性大肠杆菌对β-内酰胺类药物高度耐药,均为多重耐药株,耐药种类可达8种以上。结果表明,当前贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。本试验结果可为规模化养猪场防控仔猪腹泻提供基础资料及理论依据。     

山东省部分地区禽源致病性大肠杆菌的血清流行病学调查与耐药性检测

为调查山东省禽源致病性大肠杆菌流行的血清型及耐药性,从山东部分地区的45家养禽场分离到致病性大肠杆菌96株,应用微量平板凝集试验进行了血清型鉴定,共鉴定出18种血清型,其中优势血清型6种,分别为O78、O2、O15、O18、O143、O88,占定型致病性菌株的64％。抗菌药物敏感性试验发现,96株大肠杆菌对20种药物有不同程度的耐药性。75％以上的菌株对氨苄青霉素、阿莫西林、土霉素等5种抗菌药耐药,50％以上的菌株对卡那霉素、多西环素、环丙沙星等7种抗菌药表现为耐药;所有分离株存在多重耐药现象,75％的受检菌对9种或9种以上的被测药物耐药。结果表明,O78、O2、O15、O18、O143、O886种血清型是山东省部分地区近年来禽源致病性大肠杆菌的优势血清型,且禽源致病性大肠杆菌的耐药现象严重,有必要加强耐药性检测,以指导兽医临床合理使用抗菌药物。     

Differentiation of pathogenic and nonpathogenic Escherichia coli isolated from poultry

Twenty-one isolates of Escherichia coli recovered from chickens and turkeys were evaluated for pathogenicity in 1-week-old chicks. Fifteen produced coli-septicemia (pathogenic) and six were innocuous (nonpathogenic). Both pathogenic and nonpathogenic E. coli were tested for their ability to selectively absorb Congo red (CR) dye incorporated into agar medium. Eight of 15 pathogenic E. coli (somatic antigen types O1, O78, O11, O88, and OX9) absorbed the dye and produced red colonies (CR+) between 48 to 72 hours of incubation. All serotypes of E. coli with homologous somatic antigen O78 were CR+, while those of O2 antigen were CR- (white colonies). Five of six nonpathogenic E. coli also were CR+. In contrast to pathogenic E. coli, however, nonpathogenic isolates absorbed CR early, between 18 to 24 hours of incubation. Although CR dye binding did not correlate well with pathogenicity, it may be an identifiable property of some serotypes of E. coli.     

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of Interstinal Pathogenic Escherichia coli and Salmonella Isolated from Diarrhea Piglets

In order to find out the serotype, resistant phenotype and genotype of Escherichia coli (E. coli) and Salmonella in piglets, this study collected 128 samples of diarrhea piglets from seven large-scale pig farms in five cities in Guizhou province, and the E. coli and Salmonella were isolated and identified. The pathogenicity of the strain was identified by animal test. The drug resistance of the main pathogen was tested by drug susceptibility paper. The resistance gene of each pathogen was detected by PCR. The drug resistance and genotype correlation of the bacterial were analyzed. The results showed that 78 strains of pathogenic E. coli and 21 strains of Salmonella were isolated and identified in this study. The serotypes of pathogenic E. coli were predominantly O138 and O87. Salmonella Typhimurium and Salmonella Enteritidis were predominant serotypes. The susceptibility test showed that the resistant strains of 78 strains of E. coli were more than 80% resistant to β-lactams and more than 40% for other antibacterials. The resistance rate of 21 strains of Salmonella to aminoglycosides was more than 50% and more than 20% to other types of antibacterials; 12 and 10 kinds of drug resistance-related genes of E. coli and Salmonella were detected, respectively; The coincidence rate of resistant genotype and phenotype of two kinds of bacteria were above 60%, and both were multiple drug resistance. This study provided a theoretical basis for comprehensive prevention and control of piglets diarrhea.     

鹅源致病性大肠杆菌O86K61 和O44K74亚型的分离与鉴定

从湛江养鹅场发生的疑似大肠杆菌病病死鹅无菌采集病料,分离鉴定出8株大肠杆菌,其中,O86K61 4株,O44K74 3株,1株未定型,上述菌株均不产生内毒素;药敏试验结果表明,大部分菌株对阿米卡星高度敏感,对恩诺沙星、先锋霉素、磺胺嘧啶、诺氟沙星、强力霉素呈交叉耐药;对万古霉素、新霉素、呋喃唑酮中度敏感;对阿莫西林、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素不敏感。上述结果提示,同一发病鹅场存在着多种致病性大肠杆菌的血清型,并存在多重耐药。