间接荧光抗体法快速检测中国淡水鱼主要病原菌

本研究制作了６种兔抗中国淡水鱼主要病原菌（鳗弧菌,弧菌Ⅰ组淡水亚弧菌,嗜水气单胞菌,柱状嗜胞菌,荧光假单胞菌和鲁克氏耶尔森菌）的纯化抗体,用间接荧光抗体法与各病原菌以及来源于水环境和鱼体分离菌发生反应。结果,抗各病原菌抗体在１∶５００稀释后,只与其相应菌株发生特异性荧光反应,而不与其它病原菌株以及水环境和鱼体分离菌株发生特异性反应,并可在１００ｍｉｎ内定性检出抗原。作者推测,此法能用于检测中国鱼类病原菌的并发、继发和混合性感染。     

荧光抗体法检测猪细小病毒

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)为引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一.猪细小病毒感染的主要特征是孕猪在怀孕前容易受到感染,可引起胚胎或胎儿的感染和死亡,导致母猪发生流产,死胎,胎儿木乃伊化及新生仔猪的死亡.目前,国内外检测猪细小病毒的方法主要有原位杂交、银加胶体金检测法、ELISA双抗体夹心法、聚合酶链反应和荧光抗体法等.免疫荧光技术是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应.笔者认为荧光抗体法较适用,而关于此方法的报道甚少,因此进行了以寻求快速、特异的直接荧光抗体检测方法为目的的研究.     

免疫荧光技术概况

荧光抗体技术是用荧光性染料与抗体结合,利用抗原——抗体的特异性反应特点,在荧光显微镜下能激发出特殊的荧光现象,以作为观察抗原——抗体的一种方法,因为荧光抗体法既是利用特异性极高的抗原——抗体反应,而又是在组织细胞标本上进行的,即将免疫学方法应用在组织化学的范围内,“它”使免疫学的敏感性和特异性,与显微术的精确性结合起来,故又称为免疫组织化     

藻胆蛋白荧光探针在动物疫病检测中的应用展望

藻胆蛋白具有无毒性、水溶性强、稳定性好、吸收光谱区域宽、斯托克位移大、荧光明亮、易交联、不易淬灭、非特异干扰小等特性,是一类新型荧光染料。藻胆蛋白及其偶联物可与抗原或抗体、核酸及其它分子交联成为荧光探针用于荧光检测。藻胆蛋白用于荧光检测使荧光检测法的灵敏度显著提高,多色荧光分析得以实现。藻胆蛋白荧光探针可用于可溶性抗原、抗体、受体、表面标记物、核酸及药物残留等固相免疫荧光检测和多色荧光分析,具有广阔的应用前景。     

藻红蛋白标记抗鸡IgG荧光抗体的高效制备

藻红蛋白的斯托克位移大,荧光量子产率高,荧光明亮,是一种应用前景广阔的荧光染料.制约藻红蛋白应用的主要因素是分离纯化困难及其成品售价昂贵.通过我们已经建立的藻红蛋白低成本高效制备平台.使其应用于预防兽医学检测成为可能.首次采用适宜摩尔浓度的交联剂SPDP将藻红蛋白与抗鸡IgG抗抗体以摩尔比1:1高效交联,经高效液相色谱法纯化制备出藻红蛋白标记的抗鸡IgG荧光抗抗体.本研究对制备的荧光抗抗体从荧光特性、吸收光谱特性、抗体活性、纯度及稳定性等方面进行了鉴定.结果表明,藻红蛋白标记的抗鸡IgG荧光抗体为电泳纯,荧光明亮,抗体活性高,性质稳定,可用于鸡传染病的间接免疫荧光检测.     

应用间接荧光抗体染色法监测鸡传染性支气管炎抗体的研究

本文对间接荧光抗体染色法监测鸡传性支气管炎抗体进行了研究。试验结果表明感染鸡性染性支气管炎病毒的鸡成纤维细胞（ＣＥＦ）不适宜做ＩＦＡ方法的抗原，而感染ＩＢＶ后３６－４８小量的鸡胚肾细胞制做ＩＦＡ抗原效果很好。应用１０％犊牛血清封闭并适当改进洗涤条件要非特异性荧光。本试验将所建立的ＩＦＡ方法与美国ＫＰＬ生产的ＩＢＶ－ＥＬＩＳＡ进行了比较。应用ＩＦＡ方法第七天查出血清抗体。通过对十二个鸡群进行流行病调     

小反刍兽疫免疫荧光诊断技术研究

为了建立小反刍兽疫(PPR)荧光抗体诊断方法,研究选用小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria75/1减毒疫苗株制备抗原,免疫试验山羊,制备小反刍兽疫高免血清,用硫酸铵盐析法粗提免疫球蛋白(IgG),再应用提取的IgG制备异硫氰酸荧光素标记抗体。结果表明:所制备的荧光抗体对试验用Vero细胞组织抗原和犬瘟热病毒(CDV)抗原无反应性,对小反刍兽疫病毒感染细胞的检出敏感性为1×106稀释度。     

一种新的检测牛种布鲁氏菌抗体的方法—荧光极化法（FPA）

目前检测牛种布鲁氏菌（Ｂｒｕｃｅｌａａｂｏｒｔｕｓ）抗体常用的血清学方法有缓冲平板抗原试验（ＢＰＡＴ）、补体结合试验（ＣＦＴ）、间接酶联免疫试验（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和竞争酶联免疫试验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）。本文介绍的荧光极化法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｏ...     

犬瘟热荧光抗体技术的应用研究

用硫酸铵盐析法和蔗糖梯度离心法，从犬瘟热病毒人工感染犬的肝，脾中浓度提纯犬瘟热病毒，以其免疫家兔，制备兔抗犬瘟热病毒免疫血清，再经硫酸铵沉淀与ＱＡＥ－葡聚糖凝胶Ａ５０层析提取ＩｇＧ，于４℃低速搅拌标记异硫氰酸荧光素，制成兔抗犬瘟热病毒抗原荧光抗体。用上述荧光抗体检测２１只犬瘟热病毒人工感染犬和３５只自然感染犬的１１６份白细胞，抗原阳性１０９份，而健康犬，传染性肝炎犬，犬细小病毒肠炎犬的３７份血液白     

番鸭小鹅瘟病直接荧光诊断试剂的研制

将抗番鸭GPV单抗腹水采用透析法标记异硫氰酸荧光素（FITC）,制备成抗GPV荧光抗体,研制检测GPV抗原的直接免疫荧光诊断方法。结果显示GPV荧光抗体仅与GPV阳性的组织切片或细胞呈现特异性荧光,与番鸭细小病毒（MPV）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、鸭副粘病毒（DPMV）、鸭病毒性肝炎病毒（DHV）和正常番鸭组织切片不反应;与间接荧光方法的符合率为92．9％。表明GPV荧光抗体具有较好的特异性、敏感性和准确性,可用于临床快速诊断番鸭小鹅瘟病。     

犬瘟热病毒荧光抗体的制备及其鉴定

采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)(Onderstepoort株)核蛋白单克隆抗体(MAb);小鼠腹腔注射阳性克隆生产腹水;以G蛋白亲和层析法进行纯化;用透析法对单抗进行FlTC(异硫氰酸荧光素)标记;Sephadex G-25去除游离荧光素;测定F/P值及荧光抗体工作浓度;以吸收、阻断、抗原交叉试验对荧光抗体进行特异性鉴定.结果表明,获得6株能稳定分泌CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取抗CDV核蛋白的CE3单抗成功地制备了质量较高的荧光抗体.     

猪瘟荧光抗体的制备及应用评价

制备猪瘟荧光抗体并用于猪只活体扁桃体组织抹/涂片检测。将制备的猪瘟高免血清采用硫酸铵分级沉淀法纯化免疫球蛋白,反向透析法标记荧光素,过葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-50)去除游离荧光素,通过扁桃体组织匀浆吸附去除异嗜性或交叉反应抗体。以5?S做稀释液,以RT-PCR检测阳性样本的冰冻切片确定其最大稀释度为1/60,最佳工作浓度为1/30,阻抑试验证明荧光为特异荧光。用标记的荧光抗体检测活体扁桃体样本39份,检出阳性11份,与IDEXX猪瘟抗原检测试剂盒复核结果完全吻合。结果表明,本实验所制备的猪瘟荧光抗体具有很高的灵敏性和特异性,可用于猪瘟净化中扁桃体组织抹/涂片检测。     

应用间接荧光抗体技术检测兔波氏杆菌

以兔波氏杆菌为免疫原,强化免疫家兔,制备兔抗血清为第一抗体;以标准的羊抗兔IgG-FITC荧光抗体为第二抗体,建立了检验兔败血波氏杆菌的间接荧光抗体技术.用火焰、甲醇、丙酮三种方法固定标本,分别经过10 min和20 min两种不同时间固定,然后滴加不同稀释倍数的兔抗血清,滴加羊抗兔IgG-FITC,于荧光显微镜下观察.结果表明甲醇固定10 min和火焰固定,兔抗血清抗体效价为1:80时效果最好.     

小鹅瘟病毒荧光抗体的制备与应用

将小鹅瘟病毒(GPV)分离毒xw株接种健康兔获得兔抗GPV超免疫血清，由此制备兔抗GPV荧光抗体。采用直接荧光抗体试验对人工感染雏鹅、鹅胚及自然病例进行了检测。结果表明，该方法可栓出患病组织中的病毒抗原，且肠和肝的含毒量高于尿囊细胞。     

利用直接荧光抗体法检测病料中的伪狂犬病病毒

取疑似伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）感染致死仔猪的扁桃体、淋巴结、肝、脾、肾、肺组织,利用直接荧光抗体法（ＦＡ）进行病原检测。镜检可见,ＰＲＶ感染阳性猪组织细胞浆和细胞间隙有黄绿色荧光,各组织细胞荧光强度从强至弱依次为肝、肾、扁桃体、淋巴结、肺、脾。     

用间接荧光抗体试验检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的研究

建立检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）其抗体感染作时间Ｉ抗以５０～６０ｍｉｎ，Ⅱ抗以３０～４０ｍｉｎ最佳。该法具有良好的特异性，可检测出人工感染鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ａｕｓｔ－Ｔ，ＨＮ９３０１，ＴＪ９３０１，ＢＪ９３０１毒株后的抗原；对自然发病病例检测结果，阳性符合率高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验法。     

应用间接荧光抗体技术检测兔波氏杆菌

以兔波氏杆菌为免疫原，强化免疫家兔，制备兔抗血清为第一抗体；以标准的羊抗兔IgG-FITC荧光抗体为第二抗体，建立了检验兔败血波氏杆菌的间接荧光抗体技术。用火焰、甲醇、丙酮3种固定方法固定标本，分别经过10和20 min 2种不同的固定时间固定，然后滴加不同稀释倍数的兔抗血清，滴加羊抗兔IgG-FITC，于荧光显微镜下观察。结果表明甲醇固定10 min和火焰固定，兔抗血清抗体效价为1∶80,效果最好。     

抗独特型抗体及其在兽医领域中的应用前景

抗体分子可变区(V区)不仅能高度专一性地识别一种抗原并与之特异性结合,同时本身还可表现出抗原性.存在于抗体V区上的若干抗原决定簇称为独特位.它们的总和称为该抗体分子的个体基因型或独特型(id-iotype,Id).“免疫网络学说”认为:任何抗     

间接荧光抗体试验诊断犬吉氏巴贝斯虫病

利用冷藏抗原玻片 ,用间接荧光抗体试验检测感染吉氏巴贝斯虫犬血清 ,具有特异性强、敏感性高、快速、准确、操作简单等特点。对疫区 82份犬血清的检查 ,阳性率为 37 8% ;对非疫区 50份犬血清的检查 ,假阳性率为 2 %。与血液涂片染色检查比较 ,该法检出率高 ,结果可靠 ,可用于犬吉氏巴贝斯虫病的诊断和流行病学调查     

鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的建立及其应用

应用鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）作免疫原建立了８株分泌抗ＩＬＴＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均具有荧光抗体的特性，没有中和病毒的能力，分别属于ＩｇＧ２ａ，ＩｇＧ３和ＩｇＭ，应用异硫氰酸荧光素标记ＭｃＡｂ，建立了直接荧光抗体试验，用其检测ＩＬＴＶ抗原与分离病毒的符合率为９２．８％。