绵羊瘤胃微生物胞外蛋白酶性质的研究

本试验测定了pH、温度和EDTA对纯化的绵羊的瘤胃微生物胞外蛋白酶活性的影响,并用一已知氨基酸排列顺序的肽段(由15个氨基酸组成)作为底物,进一步测定了蛋白酶的酶切位点。结果表明,(1)纯化蛋白酶的最适pH在6.0～6.5之间,最适温度为40℃左右。(2)不同浓度的EDTA(浓度分别为1,10,25,50,75和100mM)对蛋白酶活性没有影响,因而该酶属于丝氨酸蛋白酶类。(3)纯化蛋白酶是一种内肽酶,其酶切位点在组氨酸—酪氨酸(?)、天冬氨酸—丙氨酸(?)、亮氨酸—赖氨酸(?)和(或)缬氨酸—赖氨酸(?)相连的肽键。(4)胰蛋白酶和纯化的蛋白酶虽同属丝氨酸蛋白酶类,但前者对底物具有高度的专一性,后者对底物的专一性不强,这是瘤胃内饲料蛋白质强烈降解的主要原因之     

猪ADD1基因Eam1104I酶切位点多态性及其与肉质、胴体性状关系的研究

采用PCR-DHPLC技术发现猪ADD1基因DQ442276S3序列中第313位C→T突变而产生Eam1104I酶切位点,并通过PCR-RFLP方法在368头8个中外猪种中检测到长白猪和皮特兰猪的CC基因型频率明显高于中国猪种,长白猪只检测到CC基因型,长白猪和皮特兰猪的等位基因C的频率比中国猪种的高.对长蓝猪(长白×蓝塘)F2代资源家系进行此标记与胴体性状的关联分析,结果发现,CC基因型个体的皮脂率和屠宰率显著低于CT基因型个体,其他胴体性状和肉质性状差异不显著.     

一种简便快速的体外点突变方法

体外点突变是研究蛋白质结构 -功能关系、基因表达、载体修饰等的重要技术之一。已报道的一些体外突变方法 [1～ 4 ] ,一般需以单链 DNA为模板 ,并要求对突变基因进行亚克隆和对单链 DNA拯救 ,技术上较复杂 ,多数需 1周以上时间。Stratagen公司研制的 Quickchange试剂盒 ,可以双链 DNA质粒为模板 ,只需 4步操作 ,在 1～ 2 d内即可完成点突变过程 [5] ,但该试剂盒价格昂贵 ,使用次数有限。我们根据 Pfu和 Dpn 等酶的特性 ,自行设计了突变反应及方法 ,对 6kb、8kb和1 4.6kb的目的质粒分别进行了点突变 ,成功地在质粒上创造了相应的酶切…     

利用AFLP指纹技术鉴定桑树品种

传统的桑树品种鉴定是以形态学标记为依据，大多数性状易受环境条件的影响，而且，形态学性状常常局限于某一生命时期，给品种鉴定造成了一定的限制。AFLP分析的基本原理是选择性扩增基因组DNA酶切片段。由于不同基因组DNA的酶切位点存在差异，因而产生了扩增片段长度的多态性(Vos et al．，1995)。它既有RFLP的可靠性，又有RAPD的方便性，     

溶菌酶基因合成及其原核表达

根据T4噬菌体溶菌酶的氨基酸序列,选用植物偏爱的密码子设计并人工合成了溶菌酶基因,并在N-端加上23个氨基酸残基的α-淀粉酶信号肽序列和信号肽酶切位点HQP;用苷氨酸残基替代C-端的酰胺;新基因全长为576 bp,共编码190个氨基酸.为了检测该基因生物活性,将其克隆到原核表达载体pET28b( )中,导入宿主细菌E. coli BL21(DE3) pLysS,经IPTG诱导后,宿主细菌在2 h内全部被溶菌酶基因的表达产物裂解,说明该溶菌酶基因对细菌具有很强的抗性.     

三江白猪心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因多态性及多态片段的序列分析

利用PCR-RFLP方法测定80头三江白猪H-FABP基因的多态性并对其多态性片段进行了序列分析。结果表明,HinfⅠ-RFLP和MspⅠ-RFLP位点上没有表现多态性,基因型分别为HH和AA型;只存在HaeⅢ-RFLP和HinfⅠ＊-RFLP位点多态性,基因型分别为DD、Dd、dd和Bb、bb型,等位基因b的频率为0.95,等位基因d的频率为0.75。在HinfⅠ＊-RFLP位点上,PIC为低度多态（PIC〈0.25）;HaeⅢ-RFLP位点上PIC为中度多态（0.25     

苹果基因邻近未知序列的PCR扩增与测序方法

本文提出的方法是首先利用已知基因序列设计三个巢式PCR引物p14、p15和p16,然后设计3’端为常见酶切位点、5’端为随机引物序列p17的9个酶切位点引物,用p14外引物与9个酶切位点引物进行第一轮PCR扩增,其中前5个反应的退火温度较低可以将酶切位点引物的5’端序列引入到PCR产物中,其余反应则以此PCR产物为模板采用较高的正常退火温度进行,退火温度较高是为了使整个酶切位点引物能稳定地结合到最初反应形成的产物上。为提高PCR产物的特异性和产量,用p15和p16引物分别与p17引物配对进行第二轮和第三轮PCR扩增,电泳检查发现PCR产物条带后进行纯化和测序。为保证序列的正确性,利用测得的DNA序列再设计新引物f3x与p14(或p15)配对,直接用提取的DNA为模板进行PCR扩增和测序。利用此方法成功地获得了苹果FPPS基因邻近的启动子序列528bp和5’UTR序列142bp,并已在GenBank注册（登录号FJ263960）。利用Blastn发现这是GenBank中首次发表苹果FPPS基因启动子序列。这说明用该方法获取基因邻近的未知序列是可行的。     

新疆卡拉库尔羊BMPR-IB基因的PCR-RFLP检测与分析

研究表明,Booroola羊多胎性状主要是由于骨形态发生蛋白受体基因(BMPR-IB)编码区第746碱基对位置上发生了A-G突变而导致FecB表型的突变所引起.王根林等和柳淑芳等相继发现了湖羊和小尾寒羊存在FecB基因,同时柳淑芳认为BM-PR-IB基因是调控小尾寒羊多胎的主要基因[2,4-5,9].而李海等人通过对新疆卡拉库尔羊、多浪羊、巴音布鲁克羊进行血液蛋白遗传标记的对比研究后发现,这3种羊品种的遗传距离以多浪羊和卡拉库尔羊最小[1,6].因此,陈晓军等人通过多浪羊BMPR-IB基因多态性的初步研究,推测卡拉库尔羊很可能也携带BMPR-IB基因[3].本试验以绵羊BMPR-IB基因为候选基因,以新疆卡拉库尔羊为研究对象,通过PCR-RFLP检测该品种绵羊是否存在BMPR-IB基因,旨在为该品种绵羊的种质资源开发与利用提供理论依据.     

小眼高原鳅线粒体DNA的酶切分析

用4种限制性内切酶对小眼高原鳅进行了线粒体DNA的酶切分析，共检测出7个酶切位点，发现EcoRI一种酶切类型具有多态性。     

撒坝猪及长撒二元杂交猪SLA-DQA基因PCR-RFLP多态性分析

根据SLA-DQA基因cDNA序列和已报道的引物序列,在猪中成功扩增了一个731bp的片段,该片段包括猪SLA-DQA基因的大部分第2外显子、完整第2内含子和少部分第3外显子.采用限制性内切酶EcoR1对撒坝猪和长撒二元杂猪SLA-DQA基因的扩增产物进行多态性分析,结果2个猪种在酶切后出现2个等位基因,3种基因型:654 bp/77 bp(AA)、731 bp(BB)和731 bp/654 bp/77 bp (AB).分析发现,A等位基因在群体中占优势,经X2适合性检验,撒坝猪和长撒二元杂交猪SLA-DQA基因在EcoR1酶切位点处于Hardy-Weinberg遗传平衡状态.