A型流感病毒神经氨酸酶蛋白功能研究进展

A型流感病毒(IAV)的宿主谱广泛,对人类健康和畜禽养殖均构成严重威胁。神经氨酸酶(neuraminidase, NA)作为IAV囊膜表面主要的糖蛋白之一,在病毒的感染过程中至关重要,是常用的抗病毒药物作用靶点。以往关于NA蛋白的研究主要聚焦于其通过切割宿主细胞表面唾液酸与血凝素(hemagglutinin, HA)之间的α-2,6或α-2,3糖苷键以促进新生病毒粒子释放的功能方面,而近来不断有证据表明,神经氨酸酶蛋白在受体结合和宿主适应性方面同样发挥关键作用。论文综述了神经氨酸酶蛋白的结构特征,并对神经氨酸酶蛋白的酶催化活性、受体结合功能以及与HA蛋白的功能平衡方面进行了总结,以期为深入理解IAV感染的分子机制提供参考。     

流感病毒受体特异性检测新技术

新流感病毒及血凝素(HA)受体特异性研究需要分析大量相关毒株或HA,现有的很多流感病毒受体特异性分析方法存在准确性差、效率低、成本高等问题。中国科学院微生物研究所李学兵研究员领导的科研团队研发了一种高通量、可视化、特异性的流感病毒受体特异性检测新技术,相关内容于2014年5月发表在《ACS Nano》杂志。     

貉源犬瘟热病毒CDV-ZC株分离鉴定、全基因测序与分析

应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒。分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC)。采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%。血凝素(H)基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T)。致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据。     

抗流感病毒药物研究进展

季节性和爆发性流感引起了高发病率和死亡率,不仅严重危害人体健康,还影响社会稳定和经济发展。目前对抗流感的主要措施是预防接种,然而流感病毒变异速度非常快,使得现有的疫苗对新变异的流感病毒无效或者预防效果不好。因此,抗病毒药物的研究显得非常必要,而被深入研究的流感病毒的生命周期和病毒结构蛋白也推进了抗流感病毒药物设计的进展。本文将对抗流感药物设计靶向进行概述,旨在为今后研究开发出更高效、更理想的多靶向抗流感病毒药物提供借鉴。     

新城疫病毒血凝素蛋白RNA适配体的筛选及活性研究

核酸适配体与单克隆抗体相比具有更高的分辨率,能识别配体间一个基团的细微差别,且所需的结合活性位点更小。本试验通过SELEX技术,体外经过12轮筛选获得了能够与F48E9株新城疫病毒特异性结合的3个RNA适配体,命名为FHN12-45-3、FHN12-36-6和FHN12-19-9。RNA适配体的二级机构预测结果显示,所筛选获得的RNA适配体空间结构以外环、内环、发夹环及突起结构为主。特异性试验结果显示,适配体FHN12-45-3经ELISA和Dot-blot试验证实能够区分不同株的新城疫病毒。生物学活性试验结果显示,适配体FHN12-45-3能够减少4个单位的F48E9株病毒血凝效价,初步表明适配体与F48E9株病毒可能的活性作用位点在血凝素蛋白上,在鸡胚成纤维细胞培养体系中适配体FHN12-45-3能够减少84.62%的F48E9株病毒蚀斑,荧光定量RT-PCR方法检测适配体FHN12-45-3能够减少培养体系中77.73%病毒载量,表明筛选的RNA适配体在细胞水平能够有效的抑制F48E9株新城疫病毒的复制。     

H9N2禽流感病毒HA基因纳米颗粒疫苗的制备及其免疫研究

<正>H9N2亚型禽流感病毒(AIV)是禽流感病毒所有亚型中传播最快、分布最广的低致病性病毒,因而研制高效、生产工艺简单的疫苗至关重要[1]。血凝素(HA)是流感病毒颗粒表面的一种糖蛋白,能诱导保护性中和抗体的产生,从而不同程度地抵抗流感病毒的攻击[2],以HA研制的基因疫苗可对同一H亚     

基因位点缺失促进低致病性禽流感病毒亚群产生

为更好地了解流感病毒的进化,美国乔治亚州立大学禽病诊断与研究中心的科研人员对一株分离自野鸟的低致病性禽流感病毒在鸡胚中进行传代试验。他们将传代病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)序列与母本病毒进行比较。传代过程中多重突变出现较早,不过在后面的传代中这些突变保持稳定。有趣的是,大     

禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型夹心ELISA方法的建立

将禽流感病毒(AIV)H5、H7、H9血凝素亚型标准血清中的IgG作为包被抗体,H5、H7、H9血凝素亚型单克隆抗体作为第二抗体,建立了双抗体夹心ELISA(AC-ELISA)方法,并优化了反应条件.结果表明:单抗和标准血清最适工作质量浓度分别为5、10 mg/L,标准阳性血清于4℃包被12 h,二抗作用条件为37℃作用1 h,封闭条件为37℃作用1 h,酶标抗体工作条件为1∶5 000稀释后,37℃作用1 h,底物作用条件为37℃作用10 min.阴阳性抗原临界值为0.274～0.332.本方法具有很高的特异性和敏感性.     

表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒的构建

采用聚合酶链反应或反转录聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构建含这些基因的转移载体质粒pMHA;以MDV Rispens CVI988毒株的基因组DNA和PMHA质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),采用同源重组方法将LTR、lac/smGFP和HA基因插入到MDV基因组,获得重组病毒rMDV-HA/GFP;以cre介导的同源重组去除lac/smGFP标志基因,再转染CEF,获得仅带LTR启动子和HA基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-HA.rMDV-HA仍保留了MDV RispensCVI988疫苗毒株的复制特点,并能稳定表达AIV的HA.     

我国与周边国家H5N1亚型禽流感病毒血凝素演变分析

基于2008~2012年我国及周边国家禽流感病毒血凝素(HA)核酸在线BLAST,及MEGA5.1Bate4选取病案样本比对等方法,对我国与周边国家(地区)H5N1亚型禽流感病毒血凝素演变进行了研究。结果显示,各样本均具有与禽受体特异性结合的特性,但部分样本在对病毒受体结合特异性有影响的位点发生氨基酸替换,2010年和2011年我国家禽和人样本HA抗原表位关键位点氨基酸与参考疫苗有较大变异,部分样本与中国香港和越南野鸟样本抗原匹配较高;回顾性分析表明,我国人和家禽在面临原有病毒株感染的同时增加了感染境外来源病毒株和中国香港、青海野鸟毒株的风险,应加强对H5N1亚型禽流感病毒变异和境外毒株向我国境内传播的监测,及时研制新的疫苗以应对新毒株类型。