十足目虹彩病毒(DIV1)环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

本研究以十足目虹彩病毒(Decapod iridescent virus 1, DIV1)主要衣壳蛋白基因为靶序列设计引物，建立了DIV1的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测方法，并以pMD18-DIV1质粒标准品为模板对该方法的检测灵敏度、检测特异性等进行了评估。结果显示，此方法最适反应温度为64.4℃，优化后的25 μl反应体系中包含2.5 μl 10×Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg2+、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 U Bst 2.0 WarmStart® DNA聚合酶、0.8 μmol/L EvaGreen®和4.4 μl ddH2O。该方法检测灵敏度下限为3.54×102拷贝/反应；与虾肝肠胞虫(EHP)、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)、对虾偷死野田村病毒(CMNV)、传染性皮下及造血组织坏死病病毒(IHHNV)、白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)和黄头病毒(YHV)等主要虾类病原没有交叉反应；具有较好的重复性和稳定性。以GeneFinder®替换EvaGreen®并将其预置于反应管内，结合上述扩增方法可实现对DIV1的现场快速高灵敏检测。本研究建立的DIV1-LAMP实时荧光定量和现场检测方法具有灵敏、特异和快速等特点，为近几年新发虾类病原DIV1的定性、定量以及现场快速检测提供了新的技术选择，有利于对虾养殖业中开展DIV1的监测、预警和防控。     

圆背角无齿蚌损伤后血细胞的吞噬活性

模拟人工育珠手术对圆背角无齿蚌外套膜进行务后，研究了其血细胞在０～２５ｄ对荧光极毛杆菌的吞噬活性的变化。结果发现，圆背角无齿蚌４种血细胞中有吞噬能力的主要是颗粒细胞和无颗粒细胞。手术蚌血细胞的吞噬活性从手术后１０天起有了显著升高，在第２０天时达到最大，而后开始下降；血清对手术蚌和对照蚌血细胞的吞噬都具有调理作用。     

中华绒螯蟹血淋巴细胞的超微结构

改进常规血液细胞电镜制样技术 ,直接取中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)血淋巴液固定、脱水、包埋、电镜观察。结果显示 ,中华绒螯蟹血淋巴具有 3类细胞 ,即无颗粒细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞。其中 ,无颗粒细胞的核质比最大 ,异染色质高度浓缩、边缘化 ,几乎没有常染色质 ,胞质内线粒体数目相对较多 ,与高等动物的中幼红细胞结构很相似 ,该细胞数目在中华绒螯蟹血淋巴中最多 ,可能担负着血液的能量转换功能 ;小颗粒细胞核内常染色质较多 ,内质网、高尔基体发达 ,胞质中存在 0 .2～ 0 .4 μm的电子致密颗粒 ,而且胞质中有许多大小不一的空泡 ,细胞表面有许多突起似伪足 ,类似高等动物的单核细胞 ,可能具有吞噬和消化异物的功能 ;大颗粒细胞胞质中的颗粒较大 ,直径 1.4～ 2 .0 μm ,胞质中具空泡 ,细胞表面也常见伪足突起 ,类似高等动物的嗜酸性粒细胞     

白洋淀日本沼虾血细胞的初步研究

对取自华北白洋淀种群的日本沼虾(Macrobrachium nipponense)血细胞进行显微形态观察、分类、测量和计数。依据细胞的形态,胞质中颗粒的数量和密度以及细胞的核质比把日本沼虾血细胞分为透明细胞(hyaline cell,HC)、半颗粒细胞(semigranular cell,SGC)和颗粒细胞(granular cell,GC)3类。血细胞大小依次为颗粒细胞>半颗粒细胞>透明细胞。血细胞密度为(1.13±0.50)×106个/mL,其中GC占48.5%,SGC占31.8%,HC占19.7%。并对我国日本沼虾的华南种群、华中种群及白洋淀所在地华北种群的血细胞大小和数量进行了比较。     

光镜及扫描电镜下波纹龙虾血淋巴细胞的形态及其分类

光镜及扫描电镜下,研究波纹龙虾血淋巴细胞的组织学结构、形态学特征和数量。根据细胞质中颗粒存在与否,颗粒数量的多少,细胞体积的大小及外部形态,对波纹龙虾的血淋巴细胞进行分类。结果表明,光镜下波纹龙虾的血淋巴细胞有3种类型:无颗粒细胞,小颗粒细胞,大颗粒细胞;这3种血淋巴细胞不是连续发育过程中血淋巴细胞的不同阶段,而是彼此独立的。3种血淋巴细胞的数量占循环血淋巴细胞总量的比例分别为:无颗粒细胞占57.1%,大颗粒细胞占24.9%,小颗粒细胞占18.0%;在扫描电镜下,细胞表面不平,有各种突起,揭示细胞具有活跃的变形运动和吞噬能力。血淋巴细胞形态有球形、卵圆形和椭圆形。     

格氏线虫表皮蛋白和分泌蛋白抑制昆虫免疫活性的比较

格氏线虫表皮蛋白和分泌蛋白都具有抑制昆虫免疫反应的能力,能够帮助侵染期线虫侵染寄主,但两者所含蛋白组分并不相同,从而导致蛋白活性也有所差异。本研究采用乙醇萃取和昆虫匀浆诱导,分别从侵染期的格氏线虫体表及分泌物中得到了表皮蛋白和分泌蛋白,并比较了这两者之间的异同。结果表明,无论是在昆虫体内还是体外,侵染期线虫表皮蛋白和分泌蛋白都具有抑制昆虫免疫反应的生物活性,并且分泌蛋白的活性更强。本研究为进一步研究线虫侵染与昆虫免疫间的相互关系和线虫抑制昆虫免疫反应的作用机理提供了科学佐证。     

Dietary nucleotide mixture effects on reproductive and performance,ovary fatty acid profile and biochemical parameters of female Pacific shrimp Litopenaeus vannamei

The effects of different dietary nucleotide mixture (NT) levels (0, 2, 4 and 6 g/kg) were investigated on the reproductive performance, fatty acid profile and biochemical parameters in Litopenaeus vannamei female that were co‐fed with fresh food (two times daily) and experimental diets (two times daily) for 30 days. Sampling was carried out at the first day of the trial, before eyestalk ablation (ESA) (day 21) and after ESA (day 30). Reproductive performance parameters including the hepatopancreatic index, absolute fecundity, egg diameter and latency period were higher in the NT‐supplemented groups than the control group (p < .05). Total n‐3 polyunsaturated fatty acids in the ovaries, especially eicosapentaenoic acid, were higher in the NT‐supplemented groups than in the control (222.6 ± 7.3 versus 204.7 ± 3.0 mg/g extracted lipid) (p < .05). Total hemocyte count, granular cells, plasma glucose (Glu), total protein (TP), calcium (Ca²⁺), total cholesterol (Chol), triglyceride (Tg) and high‐density lipoprotein (HDL) levels were significantly increased in the NT‐supplemented groups in comparison with the control group (p < .05). After ESA, the concentration of plasma Glu, TP, Chol and Tg significantly decreased, but HDL levels increased in all groups (p < .05). These results suggested that the application of dietary NT may present a novel strategy for increasing reproductive performance and health status in L. vannamei.     

中国对虾血淋巴抗凝剂的筛选

依据中国对虾血细胞电镜照片中细胞整体形态和细胞器、细胞核的变化,研究对虾抗凝剂成分配比,初步确认了一种理想的抗凝剂配方NaCl450mM,KCl100mM,EDTA,Na210mM,HEPES10mM(pH7.45)。它能够良好的保持细胞的整体形态以及细胞器、细胞核的形态。     

镉胁迫对凡纳滨对虾血细胞基因表达的影响

为探讨镉(Cd)胁迫下凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血细胞的分子响应,以不同浓度的Cd2+(0,0.5 mg/L和5 mg/L)进行胁迫,于不同胁迫时间取血淋巴,测定血细胞中Trx 2、Grx 2、Grx 3和MGST 3的基因表达量变化。结果显示,Trx 2、Grx 3和MGST 3表达量在胁迫的中后期显著上调,Grx 2表达量在5 mg/L Cd2+胁迫6 h开始即有显著的升高,并持续至48 h。结果表明在Cd胁迫作用下,对虾血细胞中上调这四个氧化还原与抗氧化相关基因的表达水平,以进行胁迫防御;Grx 2对Cd胁迫较为敏感,在整个胁迫过程发挥作用,Trx 2、Grx 3和MGST 3主要在胁迫的中后期发挥作用;基因的表达响应具有一定浓度效应。