Regulation of MMP-2 and TIMP-3 expression by uPA signal transduction system in human bone giant cell tumor

AIM: To study effects of urokinase-type plasminogen activator (uPA) signal transduction on expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-3 (TIMP-3) in giant cell tumor of bone (GCT). METHODS: Expression of uPAR, MMP-2 and TIMP-3 in GCT tissue was detected by immunohistochemistry. Phosphorylation level of mitogen-activated protein kinase (p44) in uPA/uPAR signal pathway in cultured GCT cells was detected by immunoprecipitation. The expression of MMP-2 and TIMP-3 in cultured cells after treatment with uPA-ATF or anti-uPAR antibody was also detected by Western blotting. RESULTS: 1) Urokinase-type plasminogen activator receptor (uPAR) was positive on the cell membrane and in cytoplasm of some mononuclear stromal cells (MSCs) and multinucleated giant cells (MGCs); 2) MMP-2 was positive in the cytoplasm and on the cell membrane of almost all of MSCs and some of MGCs. The polar distribution of MMP-2 in the cytoplasm of MGCs was especially obvious; 3) The expression of TIMP-3 of some MSCs and MGCs in GCT was much lower than MMP-2. The positive signal also showed a prominent polarity; 4) After treatment with uPA-ATF, the phosphorylation level of p44 in GCT cultured cells was much higher than the control. Addition of anti-uPAR antibody in the cells remarkably down-regulated the phosphorylation level of p44 as compared with the control group, suggesting that uPA-ATF participates cell signal transduction and this reaction can be inhibited by anti-uPAR antibody; 5) uPA-ATF cell signal pathway up-regulated expression of MMP-2 and TIMP-3, while anti-uPAR antibody down-regulated the expression of MMP-2 and TIMP-3. CONCLUSION: These results demonstrate for the first time that uPA-ATF directly regulates the expression of MMP-2 and TIMP-3 by signal transduction pathway, and the over-expression of MMP-2 and TIMP-3 may play an important role in local osteolysis of GCT.     

AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究

旨在研究AMPK激活剂二甲双胍（metformin，Met）和阿卡地新（acadesine，AICAR）对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度（0、100、200、300、400、500 μmol·L^-1）的Met和AICAR，冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度（400 μmol·L^-1 Met、200 μmol·L^-1 AICAR）；然后分别使用不同的冷冻稀释液（对照组：稀释液；Met组：含400 μmol·L^-1 Met的稀释液；AICAR组：含200 μmol·L^-1 AICAR的稀释液）冷冻精液，解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明，稀释液中添加400 μmol·L^-1 Met和200 μmol·L^-1AICAR均可显著提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性（P<0.05），其中400 μmol·L^-1 Met组精子总活力达43.20%，顶体完整率为91%，质膜完整率为46%。与对照组相比，Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显著升高（P<0.05）；顶体酶活性显著提高（P<0.05）；丙酮酸水平显著下降（P<0.05），乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显著升高（P<0.05）；与对照组相比，Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位（P<0.05），提高ATP酶（P<0.05）以及抗氧化酶的活性（P<0.05）。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。     

SN—924酶激活剂在大豆上的应用效果分析

在大豆上应用ＳＮ－９２４酶激活剂，可加快幼苗生长，增加叶片叶绿素含量和光合速率；单株结荚率提高１０％，产量增加１２％。     

一种促进植物根系生长的极细链格孢菌蛋白质分离、纯化和生物功能

通过硫酸铵沉淀、有机溶剂沉淀、离子交换和分子筛连用的方法，从极细链格孢菌JH505菌株中分离纯化到分子量约为35kD的植物激发子。利用固相梯度凝胶双向电泳方法测定了该蛋白的等电点为4．22。将该纯化蛋白稀释液浸泡小麦种子8h，7d后小麦根系琥珀酸脱氢酶活性提高65．27％，经蛋白处理的小麦根长比对照提高13．1％。     

黑龙江茴鱼(Thymallus arcticus grubei Dybowski)精子活力的观察

用BSS和水两种激活剂对黑龙江茴鱼精子活力进行测定,并在4℃和14℃(室温)条件下,对精原液和用ASP稀释的精液分别进行保存试验.试验结果显示,用BSS和水均可激活黑龙江茴鱼精子,其精子活率分别可达100%和98%.14℃条件下,用BSS激活黑龙江茴鱼精子平均寿命为72.1s,A级(快速)运动时间平均为14.1s;用水激活精子平均寿命为67.2s,A级运动时间平均为12.5s.不同温度保存的精子寿命和快速运动时间也有显著差异:精原液4℃保存2h后精子失去A级运动,其激活率在70%以上,保存6h后激活率小于20%;精原液14℃保存1.5h后精子失去A级运动,其激活率大于70%,4h后激活率小于20%.经ASP(pH分别为7.0、7.8、8.0、8.5、9.0)稀释的精液,在4℃和14℃条件下,BSS和water对精子的激活率均小于20%,且精子均呈现C、D级运动,1.5h后各保存组激活率为0.试验结果表明,BSS对黑龙江茴鱼的精子有良好的激活效果;精原液4℃保存效果好于14℃,在4℃保存条件下2h以内使用,可以得到理想的结果;精液不宜用ASP稀释保存.     

Fusion Expression and Purification of Marek’s disease virus Tegument Protein VP16 and Its Antibody Preparation

马立克氏病病毒(Marek’s disease virus ,MDV)UL48基因编码的蛋白与单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus ,HSV)衣壳蛋白VP16为同源物，将其克隆入pET-32a载体中，获得pET-VP16, 转化Escherichia coli BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳显示:融合蛋白获得可溶性表达，表达蛋白的相对分子量约为67 kD；将表达的融合蛋白过His·Bind柱，获得纯化的蛋白，将该蛋白免疫家兔，制备多克隆抗体。通过间接ELISA和Western blot鉴定制备的多克隆抗体的效价和特异性，结果表明，该抗体具有较高的特异性，间接ELISA效价大于2×10－5。     

绿僵菌生防制剂助剂的筛选

使用绿僵菌油剂防治草原蝗虫曾收到很好的防效。实验对绿僵菌油剂助剂中介质油、增活剂、紫外保护剂进行筛选。结果表明,用色拉油与煤油的混合油,作为绿僵菌孢子粉喷洒介质比较理想;增C,50mg/kg为最佳的增活剂及浓度;UV-14∶10为最佳的紫外保护剂和紫外保护剂与孢子粉的配比。用该油剂对蝗虫进行室内生物测定,求得LT50为5.23d。     

侧金盏花CBF转录激活因子基因片段的克隆

[目的]探索CBF转录激活因子基因在侧金盏花中是否存在。[方法]以侧金盏花基因组DNA为模板,根据拟南芥CBF基因序列的保守区设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得1个DNA片段,将其克隆到pUCm-T载体中,转化大肠杆菌TG1,筛选阳性克隆并对其进行测序鉴定。[结果]测序结果显示通过PCR扩增获得的基因片段长448 bp。在GenBank中检索,该序列与从拟南芥和其他作物中克隆的CBF同源基因序列同源性较低,说明是一个新的基因片段,初步认定该片段是侧金盏花CBF基因片段。[结论]该研究为进一步克隆侧金盏花CBF转录激活因子基因全长序列、鉴定其生物学意义奠定了基础。     

植物激活蛋白对白术根腐病和斑枯病的诱抗效果及其对产量的影响

植物激活蛋白能显著提高白术对病害的抗性。试验表明700~1300倍液植物激活蛋白喷施白术叶面,隔30 d喷1次,对白术根腐病和斑枯病的诱抗效果分别达53.9%~81.2%和39.7%~63.3%。植物激活蛋白能显著提高白术商品性和产量,白术的单术重量增加35%以上,白术产量提高46%以上。6月初使用700倍激活蛋白,间隔30 d,整个生长期使用5次对白术抗病增产效果最好,对斑枯病诱抗效果达63.3%,增产129.93%。     

UK114基因的克隆和表达载体的构建

本研究采用PCR法扩增得到重组UK114 cDNA序列,将其克隆于T-easy载体并进行了序列测定与分析。结果表明该序列全长1 017 bp,有一个开放的阅读框(40 nt~450 nt),可编码137个氨基酸(14.2 kDa),与UK114的序列比较,同源性为91%,突变的86个核苷酸中都为无义突变,开放阅读框中仅有一个核苷酸突变。此外,本实验构建了pBV114表达载体,选择阳性克隆提取质粒进行酶切,琼脂糖检测获得约1 kb和3.7 kb的两个片段。