油菜茎基溃疡病菌LAMP-HNB 检测方法的建立

油菜茎基溃疡病菌是油菜上最严重的真菌病害之一,是我国重要的检疫性有害生物。因此为防范其危害我国油菜产业生产安全,建立油菜茎基溃疡病菌的快速筛查方法具有重要意义。基于环介导等温扩增法(LAMP),以ITS(内转录间隔区)为靶序列并结合指示剂羟基萘酚蓝(HNB)建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的油菜茎基溃疡病菌的快速检测方法,并对其特异性、灵敏性进行评价以及实际样品进行检测。结果显示,该方法在62℃等温条件下仅需80 min即可通过肉眼直接目测试验结果。LAMP-HNB法与标准PCR检测方法对比显示其具有良好的特异性以及更高的灵敏度,利用该方法对10批油菜籽样品进行检测,共检出5批阳性样品,与标准中PCR检测方法结果一致。该方法的建立为油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定提供了新途径。     

油菜茎基溃疡病菌DPO-PCR检测方法的建立

根据油菜茎基溃疡病菌ITS基因序列,设计特异性DPO引物,建立检测油菜茎基溃疡病菌的DPO-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性进行评价。结果显示与常规PCR检测方法相比,DPO-PCR反应对退火温度不敏感,具有更强的特异性。利用该方法对10批油菜籽样品进行检测,共检出5批阳性样品,检测结果与常规PCR一致,为油菜茎基溃疡病菌的检测提供了新方法。     

警惕检疫性害虫大洋臀纹粉蚧在中国大陆扩散

大洋臀纹粉蚧(Planococcus minor)是一种近年来入侵我国大陆的检疫性害虫,原仅记载于我国台湾,2008年以来在广西、广东、海南、云南等地被陆续发现。该虫食性杂,为害超过250种水果、经济作物、花卉和园林植物。本文介绍了大洋臀纹粉蚧的基本信息、为害特点、生物学特性、地理分布、寄主范围、国内扩散趋势、口岸截获、风险评估以及防控措施,以期为防止该虫在中国大陆的再次传入及扩散蔓延提供科学依据。     

2014—2018年湛江口岸进境大豆疫情分析与建议

本文概述了2014—2018年湛江口岸进境大豆的基本情况,通过对大豆中截获的有害生物名单进行汇总,分析得出截获有害生物319种,5664种次,其中检疫性有害生物34种,707种次,截获频率最高的检疫性有害生物为假高粱和刺蒺藜草。结合新海关新要求,提出应开发智能鉴定系统,研究商品原产地溯源技术,提高进口品质要求的检疫建议,以严防外来疫情传入。     

利用DNA条形码对10种苍耳属杂草的鉴定

使用ITS、ITS2、psbA-trnH、rbcL和matK等序列对截获的10种苍耳属(Xanthium)杂草进行扩增测序,比较各序列的扩增和测序效率,采用最近距离法和相似性搜索算法评价不同序列的鉴定效率。采用最佳鉴定序列计算种间K2P距离并构建系统进化树。结果表明,ITS、psbA-trnH2个序列的扩增效率和鉴定效率最高;ITS序列的种间变异最大,其次是psbA-trnH序列,matK序列的种间变异最小;ITS序列的NeighborJoining(NJ)树可明显地将不同苍耳属杂草种分开;psbA-trnH序列可明显地将国内苍耳种和检疫性苍耳种分开。说明利用DNA条形码能够准确地鉴别苍耳属杂草,ITS和psbA-trnH序列是鉴别苍耳属杂草较理想的条形码组合。该研究结果为苍耳属杂草的分子鉴别提供了科学依据与新的思路。     

2005-2019年进境玉米携带杂草疫情分析

分析比较了我国2005-2019年从乌克兰、美国、保加利亚和俄罗斯4个国家进口玉米中截获杂草籽的情况,发现检疫性有害杂草在截获杂草种类中的占比各国稍有不同,但类别主要集中在9类(种),应当引起检疫部门的重点关注.通过因子分析深入研究各国玉米杂草疫情,列出截获频率较高的前100种杂草,并提出了具有针对性的检疫监管建议.     

双重DPO-RT-PCR检测南方菜豆花叶病毒及烟草环斑病毒

南方菜豆花叶病毒及烟草环斑病毒是中国进境植物检疫性有害生物,属于大豆种传病害,为提高在进口大豆中两种病毒的检出率,本研究针对SBMV及TRSV基因组中的保守序列,分别设计特异性DPO引物,建立了一种快速检测这两种植物病毒的双重DPO-RT-PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏度及退火温度敏感性等性能进行评价.结果表明:该方法能准确地从10种植物病毒中鉴定出SBMV及TRSV,表现出良好的特异性,且检测灵敏度可达0.02 ng·μL-1,退火温度为在45～65℃时该方法检测结果无明显差异,表现出对退火温度不敏感的特性.研究结果为进出境植物病毒的高通量检测提供了新的思路.     

杂草疫情分析在大豆产地溯源中的辅助性应用研究

中国是进口大豆主要消费国,近15年,累计进口大豆90 875万t.由于各国大豆品质不一,征税标准不同,国际大豆贸易中的掺假行为日益凸显.为了进一步完善大豆溯源技术,本研究对2005-2019年进口大豆中携带杂草籽的种类、截获频次、来源国等信息进行整合分析,采用主成分分析和聚类分析方法提取累计贡献率高的主成分,并分析各类杂草是否存在地域差异.结果显示:确定杂草种类981种,其中单一来源国杂草251种.主成分分析提取的前2个因子贡献率达95.41％,可反映进口大豆中携带杂草疫情的绝大多数信息.以上述2个因子为分类变量,对综合因子得分前100的杂草进行聚类分析的结果显示,进口大豆携带的部分杂草地域特征明显,杂草种类与地理位置密切相关,按其来源特征可分为一般性杂草、南美区和北美区3类.如圆叶牵牛(Ipomoeapurpurea)等24种杂草在南美洲国家进口大豆中截获率更高,而苘麻(Abutilontheophrasti)等14种杂草在北美洲国家进口大豆中则更加常见,可为进口大豆产地溯源提供辅助性指标,为商品归类属性鉴别业务提供参考依据.     

trnH-psbA序列作为DNA条形码在苍耳属杂草鉴定中的应用

以trn H-psb A序列作为DNA条形码,对从国外截获的9种苍耳属杂草及1种国内苍耳进行物种鉴定研究。采用DNeasy Plant Mini Kit试剂盒进行总DNA的提取,应用通用引物对其trn H-psb A基因进行PCR扩增,测序得到10种苍耳属杂草的trn H-psb A序列,并利用MEGA 7.0软件进行比对分析构建系统进化树。结果显示:苍耳属杂草trn H-psb A基因序列共有543个位点,其中有53个变异位点,31个变异信息位点,22个单突变位点,30个碱基缺失;种间遗传距离为0~0.093,种内无遗传差异;进化树显示10个苍耳物种均处于独立分支,能够利用该条形码对苍耳属杂草进行区分鉴定。