秀珍菇原基形成相关基因PpFBD1的克隆与表达研究

前期研究中通过对秀珍菇经低温诱导后不同发育阶段样本进行转录组测序及差异表达基因分析发现,ID为Cluster-6377.64510的基因(命名为PpFBD1)在原基形成前期的样本中高表达。为进一步了解分析其表达特性及功能,根据转录组测序结果设计特异性引物,利用RT-PCR技术从秀珍菇中克隆获得了该基因的cDNA全长。该基因由342个核苷酸组成,编码一个由113个氨基酸组成的蛋白,蛋白相对分子质量约11 ku。进化树分析显示,PpFBD1编码蛋白与糙皮侧耳hydrophobin1编码的疏水蛋白亲缘关系最近。Gene Ontology功能分析表明,PpFBD1主要参与真菌类细胞壁的合成。荧光定量RT-PCR检测显示,该基因在菌丝体经低温诱导后恢复至室温阶段(原基形成前期)表达量最高,这表明其可能参与调控秀珍菇原基形成过程。本研究结果为阐明秀珍菇原基形成机制提供参考。     

工厂化瓶栽金针菇的配方试验

应用3个营养配方处理,测试其对金针菇的发菌成品率、产品品质和产量的影响。结果,在培养料中加入16%的左右木屑栽培的白金针菇产量高,品质优,可节省成本、提高效益。     

利用ISSR分子标记鉴别杏鲍菇生产菌株的研究

以15个杏鲍菇生产菌株为试材,采用ISSR分子标记鉴别方法,从52个ISSR通用引物中筛选出32个ISSR引物对其DNA进行PCR扩增,分析其DNA序列多态性;同时,比较研究了各菌株的菌丝长势及产量情况。结果表明:菌丝生长速度和产量没有表现出各类群的特点,杏鲍菇的菌丝生长速度和产量比较易受环境条件和基因显隐性的影响;参试菌株遗传相似系数变异范围为0.64~0.98,采用UPGMA分析表明,在0.87处15个杏鲍菇菌株可分为5类。     

羊肚菌遗传多样性分析及菌丝显微结构观察

以收集的20株羊肚菌为试材,采用ISSR分子标记法,研究其遗传多样性与亲缘关系,并用扫描电镜分析大棚种植的2个羊肚菌不同生长发育阶段菌丝体的微观结构,以期为羊肚菌种质资源开发提供参考依据。结果表明：7个ISSR引物共扩增出35个DNA片段,其中多态性条带33个,多态比率为94.3%;在遗传相似系数为0.74时,将20个羊肚菌聚类分析为6类;扫描电镜结果表明,Me19和Me20羊肚菌菌丝分枝的显微形态均由扁平状(30 d)逐渐变得浑圆(78 d),Me19的菌丝更粗壮、致密,在大棚里长势较好。     

秀珍菇转录组测序和初步分析

[目的]本文旨在了解秀珍菇子实体形成的分子机制,为培育优质、高产、抗逆的秀珍菇品种提供理论基础。[方法]构建秀珍菇高质量c DNA文库,采用illumina高通量测序技术对秀珍菇菌丝体和子实体进行转录组测序,并利用生物信息学方法开展基因表达谱的研究以及功能基因的预测。[结果]共获得81 693个非重复序列基因(universal gene,Uni Gene),经BLAST比对NR数据库,可比对上的Uni Gene数量为61 306个。NR数据分析显示,秀珍菇已比对的Uni Gene与糙皮侧耳相似度最高,占总数目的 86.1%。同时,对秀珍菇转录组的Uni Gene进行了生物学通路的注释和预测,共注释14 315个Uni Gene,且部分与糖类代谢、氨基酸代谢、信号传导、翻译相关通路有关,分别为1 683、1 241、1 243和1 372个,表明富集在上述通路中的Uni Gene在秀珍菇子实体形成过程中可能起到重要作用。通过分析SNP突变,发现秀珍菇中分别有10 967和10 683个位点发生C/T转换和A/G转换,同时,有2 102个位点发生A/C颠换。通过查找分析SSR位点发现,共获得7 574个SSR位点,占Uni Gene总数的比例为9.27%。其中,单核苷酸重复在所有SSR重复类型中所占比例最高,为45.14%,其次为三核苷酸重复类型,为31.94%。[结论]通过高通量测序技术获得秀珍菇菌丝体和子实体的转录组数据,结合生物信息学分析,为了解秀珍菇群体遗传多样性、构建遗传连锁图谱和研究其不同生长阶段差异表达基因及其功能奠定基础。     

巴马小型猪在辽宁地区的适应性观察及血液生理生化指标检测

从广西巴马瑶族自治县引进巴马小型猪20头,进行饲养繁殖,观察其在东北环境下的适应性及血液生理生化指标的变化.经过2年的观察与检验,证实引进的巴马小型猪适应性良好,繁殖性能正常,性成熟期为2～3月龄,妊娠期为114～120 d,初产仔猪数为3～7头,经产仔猪数为5～10头,产仔猪数与母猪体重呈正相关(R²=0.96).血液生理生化指标检测结果显示,与巴马原种厂提供的数据相比,白细胞数(WBC)、血红蛋白(HGB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖定量试验(GLU)、总胆固醇(T-Ch)、甘油三酯(TG)、胆碱酯酶(CHS)、Na、Cl、淀粉酶(AMS)和二氧化碳结合力(CO₂CP)均有显著差异(P<0.05),其余指标差异均不显著(P>0.05).结果表明由辽宁省饲养并繁殖的巴马小型猪的血液生理生化指标与人类具有一定的相似性,可以为辽宁地区试验应用巴马小型猪提供参考依据.     

10个秀珍菇菌株的比较试验

试验对10个不同来源的秀珍菇菌株在不同培养基中的生长情况及生物学效率进行了比较。结果表明：不同的菌株具有各自的优势。在PDA培养基中以日本秀珍菇菌丝生长速度最快,达2．22cm／d,菌丝洁白浓密;在棉子壳培养基中。以夏秀玲菌丝生长速度最快,达0．65cm／d;从生物学效率来看,秀珍菇5号最高达88％,而以秀丽1号最低仅35％。     

金福菇菌株分离留种研究

研究不同培养基和不同培养温度对金福菇菌株分离留种的影响。结果表明,适合金福菇菌株分离留种的最佳培养基配方为:葡萄糖20g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁1g,蛋白胨3g,维生素B120mg,琼脂粉8g,另加200g玉米煮出液;最适培养温度为28℃。利用该培养基和该培养温度分离、培养的金福菇母种组织块萌发和菌丝生长都比较快,而且菌丝生长势好,色泽亮白,可以用于金福菇生产栽培。     

成纤维细胞生长因子21及其受体1、2在小鼠毛囊形成期的定位和表达

本试验旨在通过研究成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)及其受体FGFR1、FGFR2在胚胎小鼠毛囊形成阶段中的定位与表达,从而探究其在小鼠毛囊形成中的作用。试验采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR及Western blotting方法研究FGF21、FGFR1、FGFR2蛋白和mRNA在胚胎期13～18d(E13～E18)小鼠皮肤中的表达。结果显示:(1)FGF21蛋白在E13主要表达于表层细胞、基底层细胞及结缔组织中,E14表达于表层细胞和基板,E15在毛芽中有微量表达,E16、E17表达于毛钉中,E18主要表达于未成熟毛囊细胞;FGFR1和FGFR2蛋白在E13～E18于表层细胞、基底层、基板、毛芽、毛钉、未成熟毛囊和结缔组织中均有表达。(2)实时荧光定量PCR及Western blotting结果显示:FGF21mRNA和蛋白在E14相对表达量最高;FGFR1mRNA及蛋白在E16～E17相对表达量较高;FGFR2mRNA及蛋白的相对表达量在E13至E18均呈上升趋势,在E18相对表达量最高。结果提示:在小鼠胚胎期毛囊形成和发育过程中,FGF21可能在诱导毛囊启动过程中发挥一定的作用;FGFR1可能促进毛钉形成;FGFR2可能在毛囊形成和成熟中发挥重要作用。     

FGF21及其受体FGFR1和FGFR2在小鼠毛囊第1生长周期的表达

旨在通过对FGF21、受体FGFR1和FGFR2在小鼠毛囊第1生长周期中的定位和表达情况的研究,以探索FGF21、受体FGFR1和FGFR2在毛囊发育过程中的作用。选取1、3、5、8、12、17、21和23日龄小鼠背部皮肤,采用免疫组织化学技术,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测FGF21、FGFR1和FGFR2 mRNA及蛋白表达。结果显示:在小鼠毛囊第1生长周期中,FGF21主要表达于毛囊毛乳头、毛基质、内外根鞘以及毛囊周围的结缔组织中;FGFR1在毛囊各部均有表达,且在退化期(12～17日龄)和静止期(18～21日龄)主要表达于内外根鞘中;FGFR2广泛表达于毛囊各部。1、3、5、8、12、17日龄FGF 21 mRNA表达量极显著低于23日龄(P<0.01),21日龄的表达量低于23日龄,差异不显著(P>0.05);1～5日龄和23日龄FGF21蛋白表达量较高。1、3、5、8、12、21、23日龄FGFR1 mRNA表达量极显著低于17日龄(P<0.01);FGFR1蛋白表达量从12日龄开始上升,在17日龄时达到最高,之后又呈下降趋势。1、5、8、12、21和23日龄FGFR2 mRNA表达量极显著低于17日龄(P<0.01),在3日龄的表达量低于17日龄,差异不显著(P>0.05);FGFR2蛋白在1～17日龄都有较高表达。综上表明,在第1个毛囊生长周期中,FGF21对参与毛囊形成的成纤维细胞的增殖和分化具有重要作用,诱导毛囊由生长期进入退化期。FGFR1对内外根鞘细胞的增殖、分化有着明显作用,诱导毛囊由退化期进入静止期。FGFR2对毛囊内细胞增殖、分化具有重要作用,诱导毛囊由生长期和退化期进入静止期。